重组人干扰素α2b阴道泡腾片制备工艺的研究

重组人干扰素α2b阴道泡腾片制备工艺的研究 重组人干扰素α2b阴道泡腾片制备工艺的 研究 2009年5月第6卷第14期?制剂与技术? 重组人干扰素a2b阴道泡腾片制备工艺的研究 许晓,关晶华,陈新玲,张春丽,林艳红 (北京凯因生物技术有限公司暨病毒生物技术国家研究中心,北京100176) 【摘要】目的:研究重组人干扰素ot2b阴道泡腾片的制备工艺.方法:采用酸碱混合非水制粒, 微粉硅胶吸附干扰素 原液室温干燥,与酸碱颗粒混合压片制备干扰素阴道泡腾片,对泡腾片处方采用正交的 方法进行优化.结果: 微粉硅胶吸附干扰素能够较好地保持干扰素生物学活性不受损失,酸碱混合非水制粒泡腾 效果好,片剂更均匀处 方中硼酸,酒石酸,碳酸氢钠,羧甲基淀粉钠的质量在片剂中所占的百分比分别为 20%,15%,20%,2%.结论:该制 备工艺简单,合理可行,操作性强,成本低,适合工业大生产. 【关键词】干扰素c~2b;阴道泡腾片;制备;非水制粒 [中图分类号】R94【文献标识码】B【文章编号】1673-7210(2009)O5(b)一065—03 StudyonpreparationprocedureforrecombinanthumaninterferonoL2b vaginaleffervescenttablets UXiao,GUANJinghua,CHENXinling,ZHANGChunli,LINYanhong (BeijingKayinBio-TechCo.,LTD&NationalEngineeringResearchCentreforViralBio—Techn ology,Bering100176, China) [Abstract]Objective:Tostudytheproductionprocessesofrecombinanthumaninterferonot2bvaginaleffervescent tablets.Methods:Granulationbymi~ngacid&alkalineundernonaqueouscondition.Usedsiliconepowdertoabsorb concentratedsolutionofInterferond2b.1etitdryunderroomtemperature.Thenmixedthesiliconepowderwiththeacid& alkalinegranuleandsquashtoproducethevaginaleffervescenttablets.Orthogonaldesignwasemployedtooptimizethe prescription.Results:Interferonabsorbedbysiliconepowdercouldremainhi曲 biologicalpotency.Theeffervescenteffect producedbymixingacid&alkalineundernonaqueousconditionwasverygood;andtheingredientswerealsobetter-dis- tributed.Intheprescription,theweightofboricacid,tartaricacid,sodiumbicarbonateandsodiumcarboxynethyaccount- edfor20%,15%,20%and2%respectivelyofthetotalweight.Conclusion:Thisproductionmethodissim pleandfeasi— ble.Andduetoitsstrongoperabilityandlowcost,itissuitableforlargescaleproduction. [Keywords]Interferono~2b;Vaginaleffervescenttablets;Production;Nonaqueousgranulation 干扰素作为广谱抗病毒的生物制品,局部外用使损害处 干扰素浓度高.可充分发挥其抗病毒,抗增生及免疫调节作 用,以较小剂量取得较好疗效口1.干扰素阴道泡腾片,经阴道 给药,直接作用于病变部位,作用直接,安全,有效;泡腾片有 起效快,吸收完全,不伤黏膜等特点翻,能够遇体液快速崩解, 均匀分散.利用气泡产生的推动力,使药物充分地分布于宫 颈口和阴道中,并与感染病灶部位充分接触,从而达到更加 有效的治疗效果.邵为荣等131报道重组人干扰素2b阴道泡 腾片治疗宫颈糜烂疗效确切,使用安全,并对HPV,HSV一1I 及HCMV感染有一定的转阴作用,值得临床推广和使用.但 干扰素为蛋白类药物,性质不稳定,容易受到酸碱度,温度等 的影响而失活,所以在干扰素阴道泡腾片的制备过程中如何 保持其生物学活性,是干扰素阴道泡腾片制备的难点,本文 以制备过程中干扰素生物学活性的保持和发泡量等为检验 指标,研究和优化了干扰素阴道泡腾片的处方和制备工艺. 1仪器与试药 1.1仪器 FW一100型高速万能粉碎机(北京市永光明医疗仪器厂), DP一30A单冲压片机(北京国药龙立科技有限公司),VER. SAMAX酶标仪(美国典奥),XDS一1B倒置显微镜(重庆光电 【基金项目】北京市科技重大专项(D0204003000031). 仪器总公司),Biofugeprimor超速冷冻离心机(美国Her aeus)o 1.2试药 重组人干扰素ot2b原液(北京凯因生物技术有限公司生 产,批号为20050301—13);硼酸(批号为10374590),酒石酸 (批号为L370901),淀粉(批号为20051024),碳酸氢钠(批号 为20060107),硬脂酸镁(批号为20060126),均为北京凤礼 精求化工有限公司分装);羧甲基淀粉钠(批号为2006031304), 微粉硅胶(批号为2006031302),PVPK30(批号为2006031303), 均为安徽山河药用辅料有限公司生产;人羊膜细胞Wish株, 水泡性口腔炎病毒(vsv),北京凯因生物技术有限公司保存; MEM培养基(Gibco),胎牛血清(Hyclone),干扰素品(购 自中国药品生物制品检定所,批号为97104,效价为7500U). 2方法与结果 2.1重组人干扰素ot2b阴道泡腾片中干扰素生物学活性测定 方法 取本品10片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于 干扰素ct2b25万U),置25ml容量瓶中,用测定培养液定容 至刻度,充分溶解后取药液离心(10000rpm,10min),取上 清液,然后用测定培养液稀释至103U/ml,按照《中国药典》 2005版三部附录XC”干扰素生物学活性测定法(细胞病变 CHINAMEDICALHERALD巾国医药写报65 ? 制剂与技术? 抑制法)”进行测定141. 2.2重组人干扰素ct2b阴道泡腾片处方和制备工艺研究 2.2.1辅料选用泡腾片常用的酸源有柠檬酸,酒石酸,富马 酸,硼酸,苹果酸等[51,硼酸对干扰素活性有保护作用,但经过 预实验发现其发泡量不好,所以加酒石酸改善发泡量.选择 碳酸氢钠作为二氧化碳源.分别对淀粉,甘露醇,微晶纤维素 3种稀释剂进行了预试验.发现甘露醇可压性不好,容易黏 冲和裂片;微晶纤维素崩解不好,发泡量低,且影响干扰素生 物学活性,最终选择不易吸湿的淀粉作为稀释剂.选择羧甲 基淀粉钠作为崩解剂.选择适用于泡腾片的PVPk30作为黏 合剂. 2.2.2制备工艺的选择泡腾片的制备方法有4种.?湿法制 粒:将酸或碱加辅料分别制粒,在压片前混合;?非水制粒: 将处方中组分用非水液体制粒后混合压片;?直接压片:选 择合适的组分,将混合物直接混合压片;?干法制粒:用滚压 或重压法制粒,由于直接压片对辅料的要求高,不易实现产 业化,干法制粒的设备昂贵且损耗较大[61,所以笔者选择湿法 制粒和非水制粒进行研究. 2.2.2.1湿法制粒将淀粉,酒石酸,硼酸分别于60?干燥 2h.过100目筛,将PVPk30溶于水中制成5%的溶液,称取 酒石酸7.0g,硼酸14.0g.加入淀粉10.5g混匀,加入干扰素 原液0.64ml(含干扰素1.Oxl0U),混匀,再用5%的PVPk30 水溶液做黏合剂制软材,过20目筛制粒.另取碳酸氢钠 15.0g.加入淀粉l0.5g.用5%的PVPk30水溶液做黏合剂制 软材,过20目筛制粒.两种颗粒分别于42,45?鼓风干燥4, 6h,测定水分含量为0.5%,1.0%时,取出,过2O目筛整粒,加 入硬脂酸镁1.0g,羧甲基淀粉钠2.0g混匀,用椭圆的异形 冲模压片. 2.2.2.2非水制粒将淀粉,酒石酸,硼酸分别于60?干燥2h 后.过100目筛,将PVPk30溶于无水乙醇中制成5%的溶 液,称取酒石酸7.0硼酸14.0淀粉21.0碳酸氢钠15.0g 混匀.用5%PVP的无水乙醇溶液做黏合剂制软材,过20目 筛制粒,40~C鼓风干燥2.5h,过20目筛整粒;另称取微粉硅 胶1.0g.在搅拌下加入干扰素原液0.64ml(含干扰素1.0× l0sU).继续搅拌至充分吸收,室温鼓风干燥2h,将吸附好 的含药微粉硅胶及制得的酸碱颗粒混合均匀,加入羧甲基淀 粉钠2.0g混匀,用椭圆的异形冲模压片. 2.2.2.3工艺研究结果表1为两种工艺所制样品的考察结 果.结果表明,非水制粒能够较好地保持干扰素的生物学活 性.具有更好的流动性和均匀性,泡腾片的发泡量更好,更均 匀. 2.2.3处方优化通过正交试验方法对处方中辅料的比例进 行筛选.笔者重点选择了硼酸(A),酒石酸(B),碳酸氢钠 (C),羧甲基淀粉钠(D)4个因素(A,B,C,D为其质量在片 剂中所占的百分比),每个因素选择3个水平(表2),根据泡 腾片的使用特点以及干扰素的生物学特性,选择发泡量和生 物学活性作为处方评价的指标,并对试验结果进行级差分析 (表3). 表中发泡量的评分满分为l0分,根据平均发泡量适中 与否,泡沫细密与否,维持时间长短进行评分,生物学活性按 实际测量数据为准.K代表各水平结果之和,D代表级差. 66巾国医药写报CHINAMEDICALHERALD 2009年5月第6卷第14期 表1不同制备工艺所制样品考察结果 Tab.1Testresultofsamplesmadefromdiffereatproduetioa processes 表2正交设计因素水平 Tab.2lFaetorandhorizonoforthogonaldesign 试验号ABCD发泡量(评分)生物学活性(×l05U) 比较各因素的极差值可以看出,影响发泡量和生物学活 性的因素顺序为A>D>B>C,最优处方为A,B,CDl,即硼酸,酒 石酸,碳酸氢钠,羧甲基淀粉钠的质量在片剂中所占的百分 比分别为2O%,15%,20%,2%. 3讨论 泡腾片通过碳酸氢盐或碳酸盐与酸在水中发生中和反 应.生成二氧化碳,起到泡腾作用,但因干扰素为蛋白类药 物.性质不稳定.故处方设计原则基于既保证主药的稳定性 又符合泡腾片的质量要求.笔者曾选择柠檬酸作为酸源,由 于其吸湿性很强,导致黏冲,顶裂等现象,无法实现生产.而 硼酸作为干扰素复性缓冲液的成分,对干扰素的生物学活 性有保护作用,它与酒石酸组合作为干扰素泡腾片的酸源, 是干扰素泡腾片制剂的最佳选择. 湿法制粒的工艺研究中,取酸碱湿颗粒,置于37,42, 45,50,56?的鼓风干燥箱中,在0,2,4,6,8h取样测定水分 和干扰素生物学活性.结果表明,42,45?干燥4,6h颗粒水 分在0.5%,1.0%之间.而干扰素的生物学活性损失了67%. 本文利用微粉硅胶比表面积大,吸湿性能强[81的特点,用微粉 硅胶吸附干扰素原液.有利于干扰素生物活性的保持,微粉 硅胶作为干扰素吸附剂的同时又是良好的助流剂,在压片过 2009年5月第6卷第14期 四君子汤总多糖的提取研究 刘玉红 (山东中医药大学药学院药物化学系,山东济南250355) ? 制剂与技术? [摘要】目的:研究四君子汤总多糖提取的最佳工艺条件.方法:采用蒽酮一硫酸法测定总多糖的含量,以提取温度,提 取时间,提取次数,溶剂用量为4个因素,分别设计3个水平进行正交实验.结果:最佳工艺为15倍量水,95~C提取 3h.共提取4次.结论:提取条件对四君子多糖的得率具有影响. 【关键词】四君子汤;多糖;正交实验 [中图分类号】R284.2【文献标识码】B【文章编号】1673—7210(2009)05(b)-067—02 Studyontheextractiontechnology0fpolysaccharide0fSijunziDecoction LlUYuhong fSchoolofPharmaceuticalScience,ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jin”an250355,China) 【Abstract]Objective:TooptimizetheconditionsofextractionforpolysaccharideofSijunziDecoction. Methods:Total carbohydratecontentwasdeterminedbyanthrone—sulfuricacidmethod,theextractiontemperature,e xtractiontime.extrac. tiontimesandsolventvolumeweredesignedbyaJ1orthogonaltestmethod.Results:Itwasoptimalcondi tionsthatSijunzi DecoctionwasextractedwithhotwaterfW/Vof1:151at95?every3hoursfor3times.Conclusion:Theyieldofpolysac. eharideisinfluencedbyextractionconditions. 【KeywordslSijunziDecoction;Polysaecharide;Orthogonaltest 四君子汤出自宋代《太平惠民和剂局方》,由人参,白术, 茯苓,炙甘草组成,具有益气健脾之功效,主治脾胃气虚证. 研究报道四君子多糖具有显着的免疫调节作用.可用于肿瘤 等的辅助治疗『l-31.因此,本文采用正交实验设计对四君子多 糖的提取工艺进行了研究. 1仪器与试药 1.1仪器 WFZ—UV一2102PC型紫外一可见分光光度计(尤尼柯中 国上海仪器有限公司),RE一52C旋转蒸发器(河南巩义市英 峪予华仪器厂),LXJ—II离心沉淀机(上海医用分析仪器厂), ZKXF一1型电热真空干燥箱(上海树立仪器仪表有限公司). 1.2试药 人参(批号为20061123),白术(批号为20060809),茯苓 f批号为20060524),甘草(批号为20061016),均购自济南建联 中药有限公司.葡聚糖4万(中国医药集团上海化学试剂公 司,批号为F20021219),蒽酮(上海五联化工厂,批号为 20051lO2),硫酸(北京益利精细化学品有限公司,批号为 2006121~,无水乙醇(济南华联试剂公司,批号为20060325), 均为分析纯. 2方法与结果 2.1正交实验设计 为确定最佳提取条件,笔者以提取温度fA),提取时间 (B),提取次数(C),溶剂用量(D)为4个因素,分别设计3个水 平进行正交实验L9(43).依法提取后.用蒽酮一硫酸法测定多 糖的含量.考察多糖的收率.因素水平表见表1. 2.2四君子汤总多糖的提取 精密称取四君子汤34g(A参10g,白术9茯苓9g, 甘草6g),共9份,按照Lg(43)JE交设计表的实验条件进行提 程中能够保证物料充填均匀,使片剂成型更好,重量差异更 小,含量更加均匀. 上述重组人干扰素et2b阴道泡腾片的制备工艺简单,合 理可行,可以有效保护干扰素生物学活性不受损失,操作性 强,成本低.适合工业大生产. 【参考文献】 [1]林玳.干扰素的非注射途径给药及临床应用【J].综合临床医学,1997,13 (2):115—116. [2】颜芬,陈静.妇科外用药门诊住院使用情况分析.安徽医药,2005,9(9): 703. 【3】邵为荣,张雪涛,李凡,等.PCR和免疫组化SP法评价重组人干扰素 ct2b阴道泡腾片治疗宫颈糜烂患者相关病毒感染的疗效【J】.中国妇 幼保健,2007,22(36):5185—5187. [4】中华人民共和国药典委员会.中国药典【S】.三部.北京:化学工业出版 社.2005:附录56—57. [5]5王淑华,林勇强.泡腾片的常用辅料及制备方法[J].现代食品与药品, 2006,8(3):70-72. [6】李俊杰,刘永琼,祝宏,等.复合维生素B泡腾片制备工艺的研究册.今 日药学,2008,18(2):42—44,54. [71王秀,刘金毅,牛晓霞,等.干扰素a2bHis89/His159的分子获得及性能 分析叨.中国生物工程杂志,2008,28(12):18-23. [8】古一雯.微粉硅胶在制剂工艺中的应用fJ1.安徽医药,2008,12(10):981— 982. (收稿日期:2009—03—25) CHINAMEDICALHERALD巾胃医药导报67