网织红细胞计数的参考方法（可编辑）

网织红细胞计数的参考（可编辑） ICs 11.020 C50 卫 中华人民共和国 生 业 行 标准 Ws/T346? 2011 红 网织 细胞计数 的参考方法 Reference method For reticulocyte counting 2011-09-30 犭 2012-04-01 犭 乏肓 实施 卫 中华人民共和国 生 部 发 布Ws/T346-2011 目 刂舀 GB/T1.1? zO09给 照 。 本标准按 出的起草 本标准由卫生部临床检验标准 业委员会提出。 专 :卫 本标准主要起草单位 生部临床检验中心。 :彭 、 、 、臣 本标准主要起草人 明婷谷小林施丽飞李 宾、申子瑜。Ws/T 346-ˉ 2011 织红 网 细胞计数的 考方法 参 1 范围 红 本标准规定了网织 细胞计数参考方法的 。 技术要求 本标准适用于建立 运 网 红 并 行 织 细胞计数参考方法的实验室。 2 术语和定义 下 列术语和定义适用于本文件。 2.1 考方法 refere? ce method 参 一种可清楚和准确描述的用于特定检测 ,该 的技术 技术要有依据 ,可提供是 和 够准确 精密的实验数 以 据 评价其他实验方法检测结果的有效性。若有决定性方法 ,参 考方法的准确性必须与决定性方法进 行比较 ,并且须标示不准确度和不 。 精密度 3 总则 为了 证 ,建 保 参考方法检测结果的准确性 立参考方法的实验室必 须与其他参考实验室进行结果 。 比对 4 原理 红 RNA物 网织 细胞是未完全成熟的红细胞 ,其胞质中含有嗜碱性的 ,经 质 碱性染料活体染色后 , 明 形成蓝色点粒状或丝网状结 。 ,采 显 构 参考方法中 用 微镜 场或相差对新亚甲 蓝活体染色后制备的 ICSH,1994计 血涂 红 ,确 红 片进行网织 细胞计数 定网织 细胞与红细胞的比 后 ,使 值 用参考方法 数红细 ,网 红 胞 织 细胞比值乘以红细胞计数结果 ,即为网 红 织 细胞的绝对数。网织红细胞绝对数的达方 式为 全血 红 每升 中含有网织 细胞的数量。 5 血 液标本的要求 5.1 血液标本的采集应 用真空 血 血 使 采 管或注射器采 后注人含抗凝剂的洁 试 ,要 意 净 管中 注 防止 血。 溶 5.2 EDTA? K2抗 使用 凝剂 ,加人血液后抗 3.7umol/mL~5.4umol/mL1.5mg/ 凝剂的终浓度为 mL~2.2mg/mL。 5.3 4h内 标本采集后要求在 进 染 。 行 色 试 5.4 8次 检测前应先轻柔地颠倒试管以混匀标本 ,颠倒次数至少为 管的最佳颠倒次数取决于试管 的种类和容积大小 。 血液加人抗 后 ,管 ? 凝管 内剩余空间应至少占试管体积的 %。 5.5 不 能使用旋涡混匀器和滚轴混匀器。Ws/T346-2011 6 料和 配 染 染液 制 6.1 推荐使用的染 亚 料为新 甲蓝。 染 6.2 1。 Og新 染液的配制方法 :将 亚 100mL pH为 甲蓝 料应干燥溶解于 7。 4的 磷酸盐 等渗 缓冲 150mmol/L的 NaH2P0418mL,15o mmol/L的 液 N饧HP0482mL中 。 6.3 ~8? 待染料溶解后 ,必须充 混 ,然 分 匀并过滤 后将其装人干 的 ,避 2? 净 棕色瓶中 光保存于 条 件 ,染 1个 下 液可稳定 月。 要 6.4 使用前取适 的 11um再 量 染液用过滤器或滤纸 求孔径 为 次进行过滤 ,以去除沉淀的染料和 其 他颗粒物质。 7 实验器具 7.1 巴 斯德移液管。 7.2 75mm× 1omm的 玻璃试管。 经 7.3 。 载玻片 酸处理 8 操作过程 8.1 100uL过 将 滤后 75mm×10mm的 的染液加至 试 ,再 100uL的 管中 将约 全血加至该试 ,加 管中 盖并充分混 后 ,在 3min~5min。 匀 室温条件下染色 8.2 将细胞悬 ,在 液重新混匀 载玻片上推成薄血膜。血 2.5cm,血 膜长度至少有 膜末端离玻片的末 端 1cm的 至少有 距 ,且 离 整个血膜周边应留有光滑连 的 区 续 空白 。可用热吹风等方 血 式使 膜快速干燥 避 免温度 。 过高或时间过长 总 8.3 在 下 100倍 低倍镜 的放大倍数为 先浏览血膜的 细胞分布情况 ,以确认细胞均匀地 于 分布 适当 的 区 ,然 女 计数 域内 后在油镜下计数血膜上的红细胞 ,如出 口 H?nz小 现任何干扰因素 疟原虫、 ,则 体 不 适 用于参考方法。 9 计数 9.1 要获得准 的 ,就 确 计数结果 必须把每个视野中的成熟红细胞和网织红 区 。 细胞准确地 分开来 要求 由两位经验 丰富的检验技术人员通过视频监测器或者两人共 用一台双头双筒的显微镜同时计数。 9.2 每份检测 3张 标本都应选用 血涂片进行计数。 9.3 计 1所 数过程中视野的移动顺序如图 示。Ws/T346-2011 区 计效 域 1 囡 网织红 胞 细 计数视野移动倾序示意图 θ4 见 。 计 红 胞 以 数 细 的数量应 能够获得满意的精密 D。 度为标准 表 9.5 'p可 1计 成 红 和 红 熟 细胞 网织 细胞要分别,网织红 比 细胞的 值 用公式 算 :? O 矽 9.6 红 网织 细胞绝对数为每升全血中所含的 红 网织 细胞数。该值等于用参考方法 出 红 计数 的 细胞总 以 红 数乘 网织 细胞比值。 g。 7 2: 网织红细胞 对 绝 数检测结果变异系数的计算方法见公 式 2+CV巾 2 CI斌 ? 式中 : ? Cl气 c? 计数所得的红细胞 的 数 变异系数 ; g? ?? 网织红细胞比值的变异 。 系数 10 精密度要求 3: 10.1 检测结果 密度的理 精 论见公式?????3 式中 : ? sE? 标准差 ; ? P? 网织红细胞 红 占成熟 细胞和计数所得网织红细胞的比值 ; ?? 饣 成熟红细胞数加上网织红 胞 。 细 数 10.2 3中 已 CVSE/P× 100,可 SE的 CV/100],因 知 得到 值为 SE, ESEP× 此在公式 可替换 “ ” 〃 4 最后得到 的 ,该 值 值代表要获得满意的网织红细胞 红 ,见 计数精密度需要计数的 细胞总数 公式 如下 : 〃 砗 × ? 夥 所得结果就是理论上需要计数的红 胞总 。 细 数 10.3 CV值 2%、5%和 10%时 当 分别为 ,对 不 红 1 于 同的网织 细胞比值 ,要求计数的红细胞 如 数 表 所示。Ws/T346-2011 1 CV分 表 2%、5%和 10%时 当 别为 要求计数的红细胞数 要求计效的红 细腮数 网织红细胞比 值 2% 5% 109亻 247500 89600 9900 122500 19600 o.05 47500 22500 o。 20 10000 在00 2500 lOo