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交泰丸方药的半仿生提取法实验研究(可编辑)

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交泰丸方药的半仿生提取法实验研究(可编辑)交泰丸方药的半仿生提取法实验研究(可编辑) 山东中医药大学 硕士学位论文 交泰丸方药的半仿生提取法实验研究 姓名:张学兰 申请学位级别:硕士 专业:中药学 指导教师:张兆旺 20030420交泰丸方药的半仿生提取法实验研究 专 业: 中药学 孝 警: 强学兰 导 师: 张兆旺教授 单 位: 山东中医麴大学济南 提要 豳的:为交豢丸剂改研究优选提取工艺;进一步验证半仿生提取法简称 法的科学性和实用性。方法:先以小檗碱、肉桂酸、总生物碱、挥发油、干浸 膏含量为据稼,矮筠匀设计饶遥警交豢丸方药戆法工艺...
交泰丸方药的半仿生提取法实验研究(可编辑)
交泰丸方药的半仿生提取法实验研究(可编辑) 山东中医药大学 硕士学位 交泰丸方药的半仿生提取法实验研究 姓名:张学兰 学位级别:硕士 专业:中药学 指导教师:张兆旺 20030420交泰丸方药的半仿生提取法实验研究 专 业: 中药学 孝 警: 强学兰 导 师: 张兆旺教授 单 位: 山东中医麴大学济南 提要 豳的:为交豢丸剂改研究优选提取工艺;进一步验证半仿生提取法简称 法的科学性和实用性。方法:先以小檗碱、肉桂酸、总生物碱、挥发油、干浸 膏含量为据稼,矮筠匀设计饶遥警交豢丸方药戆法工艺条俘;再薅方药缝合藏 组,用半仿生提取法提取,提取液作指标成分的含量测定及甲醇精制液的薄层甑潜、 挥发油的气相色谱比较,优选出交泰丸方药药材的最佳组合方式;然后对该方药 最佳缝合熬滚佟不蘑黪漉浓度戆成分晓较,饶遮鏊半仿玺撬毅静沉法法 的最佳醇沉浓度:在此基础上作法、水提取法法、法、水提取醇沉法 法种方法提取液的成分比较及液与憾液的镇静作用比较。结果:交泰 丸方药戆工艺象释为:繁菸爱承以调至.,第、藏曩承蒙次以 谰至.,.;煎煮时间依次为,,;方药提取时阻黄连、 肉桂分别提取为佳;种方法提取液个指标成分的综合值为:液液 滚滚;滚较 滚戆镇静俸霭暖显增焱。结论:交娶丸方药戏分撵淑时 以法为俄。本研究进一步验证了法的科学性和实用性,完落了中药复方剂改 闱法的熬本研究模式,并为中药药对的研究提供了借鉴。 关键词交泰丸;半仿生提取法:综合指标 ?。 : ? : :. : : ? .: , , , , :, , , 儿 . . ‘ , ?. , . ,, 。, .: . ?: 【 .. . ,, ,..:. .: ., ,. ; :交泰九方药的半仿生提取法实验研究 交泰丸方药的半仿生提取法实验研究 引 言 失民为临床常见疾病。西药镇静催眠药虽有较好的疗效,但毒副 作用大,多服、 久服尚有依赖性。而具有养一安神的中成药远不能满足临床需要。 交泰丸为滋养安神名方,由黄连、肉桂组成。具有交通心肾的功能,主要用于 心’肾不交,怔忡无寐。临床用于治疗失眠、心率失常、口腔疾病等取得较好效果。 交泰丸的疗效肯定,但古今多以药材原粉直接制成大蜜丸,存在服用不便,挥发性 成分易损失,卫生难控制等缺点。目前,对交泰丸方药成分提取齐型改进方面的 研究报道甚少,为此,采用半仿生提取法? ,简称 法对其进行提取研究。 法是从生物药剂学的角度,模拟口服给药及药物经胃肠道转运的原理,为 经消化道给药的中药及复方药效物质提取设计的一种新技术。 多年来,中药及复方药效物质的提取主要存在“唯成分论”和“通则论”。 “唯成分沦”,即对中药及复方选择适宜的溶剂和方法提取单体成分,它不能体现 中药是多成分、多途径、多环节、多靶点的整体作用特点,更不符合中医临床用药 的综合成分作用特点。“通则论”即中药及复方药效物质的提取,一律用“水煎” 或“水煎醇沉”工艺,提取物为“有效部位”,有利于发挥其综合效能,符合中医 用药的特点。但若把此种方法视为中药及复方提取的“通则”就绝对化了。 法在提耿中孥持“有成分论,不睢成分论,重在机体的药效学反应”。以一 种或几种有效成分、总浸出物及不同极性部分等做指标和或主要药理作用为指 标,选择提取工艺。用选定的酸性水、中性水和碱性水依次连续提取,力求最大 限度地增加有效成分的提出率。法不拘泥于某化学成分或适合纯化学成分的药 理模型,而是考虑到综合成分的作用。这样既能充分发挥混合物成分的综合作用特 点,又有利于用单体成分控制制剂质量,同时也符合体内药物代谢、发挥药效的过 程。从对多种中药和制剂的研究结果表明,法优于水提法法,半仿生提取山东中医药大学届硕士学位论丈 醇沉法法优于水提醇沉法法。 本研究先以小檗碱、肉桂酸、总生物碱、挥发油、干浸膏含量为 指标,用均匀 设计优选出交泰丸方药的法工艺条件;再对该方药种组合的液作指标成 分的含量测定及甲醇精制液的薄层色谱、挥发油的气相色谱综合比较,综合评判优 选出法提取药材的最佳组合方式。然后对该方药最佳组合的液作不同醇沉 浓度的成分比较,综合评判优选出方药法的最佳醇沉浓度;在此基础上作 法、法、法、法种方法提取液的指标成分含量测定及甲醇精制液的薄 层色谱、挥发油的气相色谱综合比较,计算出种方法提取液的综合评价值,并对 液与液的镇静作用进行比较。旨在为交泰丸剂改研究优选提取工艺;同时以 交泰丸为例,进一步验证法的科学性和实用性,完善中药复方剂改用法的 基本研究模式,为中药药对的研究提供借鉴。交泰丸方药的半仿生提取法实验研究 研究 内 容 文献研究综述 .与交泰丸相关的研究进展情况 失眠为临床常见疾病。国内权威机构调查表明:%的成年人因工作紧张导致 睡眠障碍,%的学生因考试熬夜而有睡眠障碍,%的已婚妇女由于生育、更年期 等生理原因导致睡眠障碍,%的中老年人都不同程度地患有睡眠障碍。睡眠障碍使 患者头昏、乏力、无精打采、食欲不振,长期睡眠不足可导致体内免疫系统巨大损 伤,机体的抗病能力降低,缩短寿命。西药镇静催眠药虽有较好的疗效,但多有精 神萎靡、头晕、疲倦、记忆力减退等副作用,多服、久服尚有依赖性,且对肺、肝、 肾功能有损害者不宜用“。。而具有养心安神的中成药远不能满足临床需要。 交泰丸出自明韩懋《韩氏医通》,为中医临床常用的养心安神名方,由黄连、肉 桂组成。具有交通心肾的功能,主治心肾不交,心烦不安,下肢不温,难能入睡患 者。黄连与肉桂配伍属寒热配伍。黄连苦寒入心,清降心火以下交肾水;肉桂辛热 入肾,温肾通脉,引火归源,温升肾水以相济心火,心肾相交,则失眠自愈“。 临床观察表明,交泰丸用于治疗心肾不交、阴虚火旺、心脾两虚、痰热内扰、 胃气不和等多种类型的失眠均有较好效果。”?,对心率失常、舌生疮、溃疡,扁 桃体炎,咽炎等也有较好疗效”“。现代药理实验证明,交泰丸具有镇静、催眠、 抗惊厥作用,其作用优于单味黄连或肉桂,且无毒副作用“?。进一步研究表明,交 泰丸对心血管系统也有较好作用,可增加耐缺氧能力、降压、增加冠脉流量及改善急 性心肌缺血所致的心电图变化,其效果优于单昧黄连或肉桂?。 交泰丸的疗效肯定,但古今多以药材原粉直接制成大蜜丸,存在服用不便,挥 发性成分易损失,卫生难控制等缺点。剂型改进方面,仅有报道,以药材原粉装胶 囊“和制成外用膏剂“。目前,对交泰丸方药成分提取方面的研究报道甚少。黄连 主含小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱:巴马亭、药根碱等生物碱, 小檗碱为其主要有效成分。肉桂主含挥发油,油中主要成分为桂皮醛。尚含肉桂酸、 乙酸桂皮酯、乙酸苯丙酯等。小檗碱具有抑菌、中枢抑制、降压、 解热、抗心律失山东中医药大学届硕士学位论文 常、改善微循环作用,对心肌缺血及心肌梗死具有保护作用。肉桂油具有镇静、镇 痛、解热、抗惊厥作用。肉桂酸具有抗菌、升高白细胞、利胆作用。即黄连与肉桂 配伍可增强中枢抑制作用。用高效毛细管电泳法测定黄连配伍肉桎前后主要生物碱 的含量,结果表明,二者配伍后水煎液中小檗碱、黄连碱、巴马亭、药根碱含量均 明显降低”“。用高效液相色谱法测定黄连配伍肉桂前后肉桂酸的含量,结果黄连与 肉桂配伍后水煎液中肉桂酸含量明显下降”。 . 目前中药复方成分提取的现状 中药复方成分提取研究比较复杂,涉及到许多相关学科,探索科学的提取方法, 关系到中药制剂的稳定性、有效性、适用性和经济技术的合理性,是中药剂改研究 成败和水平高低的关键。多年来.由于受旧思维方式的影响,中药及复方药效物质 的提取没有走出自己的路,主要存在“唯成分论”和“通则论”。 .. “唯成分论” “唯成分论”即对中药复方成分的提取往往以单体成分的理化性质,选择适宜 的溶剂和方法进行提取。如某些生物碱、苷、挥发油、有机酸等。这种方法故然取 得了一定的成绩,对认识复方中某些药物的化学成分及其药理作用十分有利,也可 以从微观上说明复方制剂的某些药理作用机制,使制剂更精确化、量化,有利于走 人工合成的道路。但是它忽视了药物间各成分的层次性、联系性,不能体现复方的 整体作用,更不符合中医临床用药的综合成分作用特点。从思维方式看它是分析还 原思维,即把所要考察的对象还原为孤立的化学要素,只要对成分各要素进行分析, 弄清其特性或规律就可以进行综合,把握整体特性和规律。这种整体等于部分之和 的形而上学思维方式在中药制剂上依然统治着人们的头脑,必然背离中药制剂应有 的发展方向。必须指出,“中药现代化”绝不是“西药现代化”。 .. “通则论” 通则是普遍适用的原则。中药制剂提取工艺从五十年代后期起一直采用“水提 取醇沉法”,这种方法是以水为溶剂提取药物,再用一定浓度的乙醇沉淀,去除杂质。 它是根据多数药物成分在水和醇中的溶解度较大,水和醇价廉易得,使用安全而提 取的,提取物为“有效部位”,即混合物。应用有效部位在药理和临床上能够代表或 部分代表原方剂的疗效,有利于发挥其综合效能,符合中医用药的特点。但若把此 交泰丸方药的半仿生提取法实验研究 种方法视为中药提取的“通则”就绝对化了。实际上此种工艺对有些成分的提取不 一定适合,如多数游离生物碱一般不溶于水。再如“醇沉”处理除去的不一定都是 无效杂质,特别是一些对免疫功能有重要调节作用的多糖类可被除去,一些在水提 取液中含量本来就不高的成分经几次醇处理后,有一部分可被滤除。“通则论”从思 维方式看是形而上学的另一种表现形式。因为这种提耿法还是从纯化学的角度,不 是从生物药剂学的角度考虑问题。药物的疗效不仅取决于投入的 原型药物,而且也 包括药物的代谢物。有些化合物本身虽然没有生理活性或活性不强,但经代谢后变 得有活性或活性增强,更何况有些药物不一定溶解于中性水或乙醇中。观察问题的 片面性、表面性、孤立性束缚了中药制剂的新开拓,阻碍了制剂工艺向新的高度飞 跃。 .半仿生提取法的特色 半仿生提取法? ,简称法是由本校张兆 旺教授首先提出的,其是从生物药剂学的角度,模拟口服给药及药物经胃肠道转运 的原理,为经消化道给药的中药及复方药效物质提取设计的一种新技术““”。 .. 半仿生提取法是分析思维与系统思维的统一 中药及其复方的作用特点是多成分、多途径、多环节、多靶点。基于中药及其 复方中部分成分已知,大部分成分未知的现实,从生物药剂学的角度模拟口服给药, 以及药物经胃肠道转运原理,为经消化道给药的中药制剂设计的 “法”,既坚持 了近代科学分析的原则,又把整体与发展的思想包容于自身。对分析思维和系统思 维进行分析,看分析思维的长处是使构成物的成分精确化、量化,能够较为精 确地把握事物,较为深刻地认识事物:其短处是只看到了一个孤立的要素,而忘记 了多要素与整体的联系。系统思维强调的是构成事物要素的系统质,对局部的认识 是:精确的、模糊的。两种思维形式,我们取各自的长处,舍弃各自的短处,把它 们统一起来,形成观察问题的新思路。这一新思路概括起来是在中药提取中峰持了 “有成分论,不唯成分论,重在机体的药效学反应”。半仿生提取法以一种或几种 有效成分、总浸出物等做指标和或主要药理作用做指标,选择提取工艺,不拘 泥于某化学成分的药理模型,而是考虑到综合成分的作用。 半仿生提取法是单体成分与活性混合成分的统一 中药复方是一个多元、复杂体系。内在化学成分复杂,很难用其中某一成分的山东中医药大学届硕士学位论文 药效或药代参数来代表整个中药或复方的参数。法工艺条件的优 选,既考虑到 单体成分,又考虑到“活性混合成分”。以单体成分、总浸出物及不同极性部分等做 指标和或主要药理作用做指标,同时考虑各指标在工艺选择中的主次,给予不 同的加权系数,以化处理并加权求和后的数值为特征值,输入微机求得回归方 程,优选出法工艺参数。按所选的工艺参数进行提取的是“活性混合物包 括配位络合物和分子络合物单体”。这样既能充分发挥混合物成分的综合作用特点, 又有利于用单体成分控制制剂质量。 ..半仿生提取法是中医治病特点与口服给药特点的统一 辨证论治是中医的特点,方剂是调整体内系统平衡最优化的治疗系统,也是中 医临床用药的一大特点,中医用药绝不是单体成分,而是多种成分相互作用的综合 结果,这种综合作用从化学成分方面考虑,可能是同一种中药共存成分之间或和 多种中药成分之间的复合作用。口服给药的吸收受消化系统生理状态,药物理化性 质和食物等多种因素影响。经口服给药的丸剂、散剂和汤剂等之 所以有疗效,就说 明其药效成分能被胃肠吸收、代谢和利用。 另外,法的提取条件要适合工业化生产的实际,不可能与人体条件完全相 司,仅是“半仿生”而已。例如,法是在常压下提取,与体温差别很大;胃肠 道中有多种酶与细菌的作用,而法不另加酶等。因为煎煮温度下可使酶失活。 又因段方法是模仿口服药物在胃肠道的转运过程,采用选定的酸性水和碱性水依 次、连续提取,其目的是提耿含指标成分高的“活性混合物”,其与纯化学观点的“酸 碱法”不同,“酸碱法”是根掘单体成分的溶解度及与酸碱度有关的性的性质,用酸 或碱将药液调至~定的酸碱度,而使单体成分溶解或析出。 . 半仿尘提取法的研究进展情况 法,突破了几千年来中药及复方水煎工艺,以及近半个世纪水煎醇沉工艺 的旧框框,将中药口服给药的传统同现代生物药剂学理论相结合,提供了既符合中 医学重视中药及复方以综合成分发挥药效的传统理论与经验,又 同西医药学重视单 体有效成分和用动物试验指标评价药效与安全性的现代科技相接轨,同时考虑了工 业化生产的可行性和适用性。从对多种制剂及单昧药进行法的研究“结果表 明,法在增加有效成分的提取率,提高某些药效学指标方面明显优于水提法 法,半仿生提取醇沉法法也较水提醇沉法法提取的有效成分含量交蚕,乜方葵砖事镑主祷取法宴验研究 高。提示法有可能代替法,法有可能代替法。新版高等中医药类 规划教材教与学参考书《中药麴划学》,以及普通高等教育“十五”国家级规划教材 《中莸药裁学》,均蠢正式毂羧法。法可乍为中蕊嚣翔现代纯酶一条科学途 径,在推广使用中不断完善。 交泰丸方药半仿生提取法工慧条牛的优选 。仪器与菱晶 一型薄鼷扫描仪本岛津;高效液捆色谱仪美园; 一气楣色谱仪翻本岛津一型精密蹦计上海嚣磁仪器厂;一型 可觅分光光度诗;紫外分光光度诗上海;型电子分析天平上海第 二分析仪器厂;?型离心沉淀机上海第三分析仪嚣厂:一型医用超声 波漓洗器昆山市超声仪器有黻公司高效疆胶。薄瑟扳青岛海洋化工厂; 定羹毫缁管昂本。 的干燥根 药材经鉴定,黄连为毛茛科植物黄连 茎,裹桂为樟辩攘甥逸挂霉 豁予燥越疫。 麓酸小檗碱、国桂酸、程皮醛对照品中国药品生物制品检定所,供含量测定 用,批号分别为、?、~。.缓冲液按《中国药典》 年舨融录磷黢楚缓冲滚。法酝嚣;。%浚豢香草酚蓝溶渡蠲; 缓冲液配制;用乙腈、甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水;养血安神片广西纯正 掌制药厂,批号;其余试剂均为.。 ,方法与结累 ., 实验漫计 在药材粒度、煎提方法、煎提温度、煎提用水量、滤过等相同条件下,确定考 查嚣豢及承乎。逡臻氇。均匀设诗撅承乎表中鬣靛天总公司第三疆究所据 供安排实验,实验见表。 ..提取液的制备 游链方药耪分瓤羧薅,按楚方毪浚黄逡,爨挂稼敏蘩穗~霞凝糖 共,双提法提取,加热回流提取次加水量依次为药材量的,,倍,第 煎水值用玎?。豁酸调至规定值,第、煎水的值用..一,氢氧 乏镳滚滚谖至凝定缝,拳兹蛹缓及漫取融黼援表,提取渡瘸罄纱 在分羯滤过,山东中医药大学届硕士学位论文 离心?, ,合并上清液,水浴浓缩至,得~号提取液 每相当于原药材.。 表 。×均匀设计拟水平表 注:三煎提取时间比为::. ..供试液的制备 精取~号提取液各,水浴蒸至近干,拌硅藻土臣混匀, 。烘干, 用甲醇索氏回流,回收甲醇,甲醇定容至,得供试液,~。每相当 于原药材.。 精取~号提取液各,加重蒸馏水至,用乙酸乙酯萃取×, 回收乙酸乙酯,甲醇定容至,得供试液.。每相当于原药材.。 ..小檗碱的含量测定 ...对照液的制备 精密称取能酸小檗碱对照品.,加甲醇配制成.?~,即得。 ...薄层色谱及薄层扫描条件 硅胶一薄层板,将盐酸小檗碱对照液及供试液点样后.以苯一乙 酸乙酯一 甲醇一异丙醇一氨水::.:.:.为展不剂,另槽加入同体积的浓氨 试 液饱和,展开,取出,晾干,盐酸小檗碱呈黄色斑点。对斑点进行反 射法 锯齿扫描,测定峰面积,,产,。样品分离的薄层扫描图谱交泰九方 药的半仿生提取法实验研究 见图。 图 供试液、盐酸小檗碱对照液的薄层扫描图谱 供试液 .盐酸小檗碱对液 ...线性关系考察 精取盐酸小檗碱对照液,,,,, 点于同一薄层板上,依法展开, 扫描,测定峰面积。以点样量 为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,结 果盐酸小檗碱在.~. 范围内,其点样量 与峰面积呈良好线性关 系,回归方程为..,.,见表,图。 表盐酸小檗碱的标准曲线坐标值 点样域. .?阜咖移 山东中医药文学届硕士举值论丈 簿 遣 . . . . . . 点样爨 图盐酸小檗碱的标准曲线 ,..精密度试验 在阕一薄层板豹不弱位置,分别点慧酸,、檗躐对照液 ,共点个点, 依法 展开,扫描,测定峰面积,结果.%,表明仪器精密度良好,见表。 表糖密度试验结巢 ..。稳焱性试验 取供试液。 ,点于薄层扳上,依法展玎,扫描,测定蜂面积,每黼】测 定次,连续测定次,结果供试液在内稳定,.%,见表。 表稳定蠖试验续祭 时问 夏 % ?一???????????????????????????????????????? 一????????????????????????????????????????~ 峰面积 。: 。..襻蠡窘量测定 与豁酸小檗碱对照液, 精取供试液一各 ,点于同一薄层板上,依 法测定。小檗碱食量以赫酸小檗碱计算,结果见表。 交泰丸方药的半仿生提取法买验研究 表 种提取液中各指标成分的含量 小粟触 肉柞陵 序 总生物碱 挥发油 十浸膏 % 肯量% 古量% % 含量%% 含量%% 含量% . . . . . . . . . . .. . . . . .. .. . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . .. . . . . . . . . . .. . ... . . . . . ...加样回收率试验 精取已知含量的号提取液.份,分别精密加入对照液 .。,按供试液的制备方法制备并测定,结果见表。 表回收率试验结果 序号 样品中已知量 加入量 测得量 耳 回收率 % % % .. . . . . . . . . . . . . . ..肉桂酸的含量测定 ...对照液的制备 精密称取肉桂酸对照品.,加甲醇配制成..?,即得。 ...检测波长的选择 取肉桂酸对照液适量,加甲醇稀释,用紫外分光光度计于~波山东 中医药大学届硕士学位论文 长范围内扫描,结果肉桂酸最大吸收波长为,故选定检测波长为, 见图 。 图 肉桂酸的紫外吸收光谱图 ...色谱分析条件 色谱柱:。 ,.×;检测波长::灵敏度:.: 柱温:室温:流动相:甲醇一水一乙酸.:.:.,流速:?~,进样量: 。取肉桂酸对照品、供试液,分别进样,色谱图见图。在此条件下, 肉桂酸 与相邻峰的分离度为.,流出时间约为;以肉桂酸峰计色谱柱的理 论塔板 数为。 图供试液、肉桂酸对照液高效液相色谱图 .肉棒酸对《液 .供试液 .肉棒酸色谱峰交泰丸方药的半仿生提取法窑验研究 ...线性关系考察 精取肉桂酸对照液,,,,, ,加甲醇分别定容至,各 取 进样,测定峰面积,以进样量 为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准 曲线,结果肉桂酸在.~.“范围内,其进样量 与峰面积呈良好线性 关系,回归方程为.×. ,:.,见表,图。 表肉桂酸的标准曲线坐标值 进样量 . . . . . 峰面积 旧 鞋斗 ‘ . . . . . . 进样量 图肉桂酸的标准曲线 ...精密度实验 精取同一浓度肉桂酸对照液 ,重复进样次,测定峰面积,结果 .%,表明仪器精密度良好,见表。 表精密度试验结果 ,】了 夏 % ?????????????????????????????????????????一 峄向积 ...稳定性试验 取供试液在室温下自然放置,每隔测定次峰面积,连续测定次,结 果 .%,供试液在内稳定,见表。山东中医药太学届硕士学住论文 ?????????????????????????????????????????? ??????????????一一 表稳定性试验结果 ...样品含量测定 进样,结果见表 微孔滤膜滤过,精取滤液各 取供试液.?用....加样回收率试验 精取已知含量号提取液份,分别加入肉桂酸对照液.,按供试 液的制备方法制各并测定,结果见表。 表回收率试验结果 ..总生物碱的含量测定 ...对照液的制各 精密称取盐酸小檗碱对照品.,加.缓冲液配制成. ?~, 即得。 ...线性关系考察 精耿盐酸小檗碱对照液.,.,.,.,.,.。,分别置具塞三角瓶 中,均用.缓冲液稀释至,加入.%溴麝香草酚兰溶液,加入氯仿 ,盖好瓶塞,充分振摇,移入分液漏斗中,静置分层,分取氯仿层, 用干 燥滤纸滤过,滤液以相应的试剂为空白,在处测定吸收度。以浓 度? 为横坐标,吸收度为纵坐标绘制标准曲线,结果盐酸小檗碱 在.~.? 范围内其浓度与吸收度呈良好线性关系,回归方程::..,.,见 芟泰丸旁药的半仿生提取击实验姘瓷 . . . 蟋. 骤。 黎. . 。 . . . . . . 浓菠? 圈赫酸小檗碱的标准断线 。..精密度试验 精取同~浓度的盐酸小檗碱对照液,依法测定吸收崖,重复测定次, 结果 .%,液骥仪器精密度良好,觉表。 表精密度试验结聚 了峙 % ???????????????????~???????????????????? “???????????????????????????一 吸收度. . . , , . ,。。稳定经实验 精取供试液:在室澄自然敬黉,每隔测定次吸收度,连续测定次 结果.%,供试液至少在内稳定,见表。 表稳定性试验结粜 对闻舅% ????????????????????????? 一??????????????????????????????~ 驳投疫 . 。 . . , 。 .??????一????????????????????????????????一一 ...样鼎含量测定 如东中垂菇大学届礤垂学位毪文 精取供试液.,各,,置其塞三角瓶中,水浴蒸于,依法测定。总生物 碱含 量以盐酸小檗碱计算,结果见表。 ,..加样回收率试验 鬻取已超含量静号鼹取滚,徐,精密热入簸羧,、檗碱对照滚 .?,按趁试液的割备方法翻备并测定,结果觅表。 表回收率试骏结果 ..撵发油的含量测定 按《中国药典》附录挥发油测定法甲法测定,结果见表。 ..干浸膏量的测定 精敬提取滚盎一各,分澍置恒重豹蒸发疆孛,承渣蒸手,矮至洹 重, 计算子浚褊:得率,结莱觅表。 ..工艺条件的优化 将表中各指标成分的测定数据按下列公式进行标准化处理, ;?一盖』/,。式中墨为样品液中成分/的含量,零为个样品液中 成分 ,涎乎均德,,为成分的标准编差,郄,丽二了丽,弼为标准化 后的值。根据各指标在工艺选择中的主次,给与不同的加权系数, 以标准化后的值 加极后求和,即得综合评价德见表。将表及衰中值用软件经二 次多壤式逛步强归统诗楚毽,褥露爨方程: 一...~.?,.~.. .,。.,,。优化条件为:.,.,.. 。预测值.。芟泰丸方药的半仿生提取法实验研究 ?. . 吨四. 一 堇 ?. . ? 一. 。姗 ?. ?. , 薹 ?. 伽 . 书 ?. . . 邶四 一 . 一. . 加姗 一 ?. ?. . ?. 母四 一 帆 ?. 一. . 一. “ 耋 一 ;四 . . . 四 舢 ? ?. ?. . 龇 注:小檗碱肉桂酸×总生物碱挥发油×干浸膏× ,.验证优化条件 按照优化出的工艺条件,制备批样品,分别测定各指标成分的含 量,结果测 得小檗碱.%,.%;肉桂酸.%,.%;总生物碱.%, .%;挥发油.%,.%;干浸膏.%,.%:., 接近预测值。 .小结与讨论 .. 以小檗碱、肉桂酸、总生物碱、挥发油、干浸膏量为指标,采用 均匀设计优 选交泰丸方药的法工艺条件,结果:煎用水的值依次为.,., .;煎总计时问为.。预测值.。验证实验的综合评价值接近预 测值,说明优选条件可行。结合生产实际,确定其工艺条件为:采用双提法提取;第 煎用水以凋至.,第、煎用水依次以调至.,.;煎 煮时削依次为,,。 .. 小檗碱含量测定中,是以苯一乙酸乙酯一甲醇一异丙醇一氨水::.:.: .为展不剂,由于展开剂中的苯、乙酸乙酯在紫外下有吸收,因此,实验的关 键是层析展不后,层析板一定要用吹机吹干至无味,再进行扫描,否则测出的实 验结果不稳定。 .. 盐酸小檗碱微溶于冷水,较易溶于热水,硫酸盐的溶解度比较大蛳。以优山东中医药大学届硕士学位论文 化出的法工艺条件,在其它实验条件不变的情况下,以,调第煎用水的 值,依法提取,测定其提取液中各指标成分的含量。结果小檗碱.%, 肉桂酸.%,挥发油.%,干浸膏.%。该提取液中各指标成分含量与按 优化条件制备的批样品液中相应的各指标成分含量比较,均无明显差异。这主要 是因为土卜.酸小檗碱和硫酸小檗碱均易溶于热水的缘故。由于与的反应产物 是人体必需的,因此,第煎水的值以栽酸调节为佳。 ..试验结果经标准化处理,以消除各指标的单位和量纲的不同,以及各指标 变量范围相差悬殊所造成的影响,同时根据各指标在工艺选择中的主次,确定不同 的加权系数,以标准化处理加权求和后的值为综合指标,优选法工艺条件, 较各指标成分含量直接相加更加科学、合理。 交泰丸方药半仿生提取法提取药材组合方式的优选 .仪器与药品 见.项下。 .方法与结果 ..方中药材的组合方式 将处方中药材黄连、肉桂排列组合成组,即和,用项下优 选出的法工艺条件提取。为黄连、肉桂合煎、滤过、离心、,定容。 为黄连、肉桂分别单煎、滤过、离心、浓缩,合并种浓缩液,定容。 ..提取液的制各 按处方比例黄连,肉桂称取黄连~目粗粉 ,肉桂~目粗 粉,按..项下组合方式,用项下优选出的法工艺条件提取,分别滤 过,离心,合并上清液,水浴浓缩至每相当于原药材.。 ..供试液的制各 精取提取液各,按..项下方法制得供试液’每相当于原药材 .。 精取提取液各,加蒸馏水至.,按..项下方法制得供试液,每 相当于原药材.。 按 ?项下方法提取挥发油,用乙醚。萃取次,水浴挥去乙 醚,得供试液,。交秦丸方药的串仿生提取法宾赣研究 。.定性比较 ..。对羹曩液的毒釜 精密称取盐酸小檗碱对照品.,加甲醇配制成.?【。~。另取黄连 对 照药材,加甲醇超声提取,制成黄连对照液。 。..擎黪精裁液豹院较 ,盐酸小檗碱对照液、黄涟对照液各“【.,点于同一薄层 取供试液’各 板上,按...项下条件展开,挥干,于光及紫外灯下观察,色谱图 觅图。结祭耱组合籀敬液在与黄遴对照药睾孝色谱裙瘟豹整鬻上, 筠显楣嗣的黄 色荧光斑点;在与盐酸小隳碱对照品色谱相应的位鼹上,均显相 同的一个黄色荧光 斑点。 豳 种组合攥取液的薄爝色谱图 . . . 盐酸小檗碱对照液 ...挎发涟蕊气楣色漠魄较 色谱条件:色谱柱×..×.“ :检测器;载气: 氮气,流速?~;分流比::;柱温:起始。,以。?“升淞至 ’爨持;汽篷室澡窿:?;检溺器涅度:。;送撵萎:。。 驳桂皮酸对照品、供试液’,分别避样,色谱圈见图。结果从的挥发油 中检出个缀分,而检出个组分;累计峰西积总和:为, 为:主要畜效成分经皮醛懿鞠对酉分含量,为.%,勰为。%, 麒余各组分的相对含量也有明显改变:以桂皮醛对照品的相对保留时间为.,标 山袁中医药走学庙硕士学位论文 示了种提取液的挥发油图潜中个共有峰,种挥发油色谱中含有个共有峰 共有峰占总油的百分比,为.%,为.%。 ‘ ‘曩??十?: ‘,‘讣?囊尊.:,,’??计蕾,?日霸瞄?口.神’? 《? ?‘ 埔.?’ 静精曹骨比篁彝 一骨一小?:?一。鞭赫??钉‘; ? ? 口 ‘ 日 ?钟?十: 埘。’ 一计端飘茸和川??’鞠?薯哥一囊?舟馘赫翱: 图 种缀合方式提取的挥发油气桕色谱图 。捶皮懿对照渡 . .熊交泰丸方药的半访童提取鲁卖验研究 ..小檗碱的含量测定 ,..线性关祭考察 精取盐酸小黎碱对照滚,,,,,鼙,点予阉一薄层袄,按.., 项下方法展开,扫描,测定峰面积,结果热酸小檗碱在.~.?范围 内,其 点徉基 与蜂面积呈鼹好线性关系,回归方程。。, .。 ...含量测定 鞲敬供试液’蚤 与趣酸小檗碱对照滚,?,点予网一薄攫叛上,辱交 法测定,薄层扫描图见匿,鳐莱见表。 , “,一一 “”“‘一日。 】 臻 嘶 ?,一 ,:一 。,。一。、。一 .。.。。~..?。, 照?. ? 一图 种组台提取液的薄层扫描图 . .盐酸小繁碱对照液 . 表 种组禽提取液中各指标成分的含爨 挺驭液 小檗碱 肉桂陂 总生物碱 挥发油 干浸营 禽量甏 ?‰ 食釜器?% 袁釜篱 《甏 蠢羹辩 。茂 盘曩篙 黯楚 ???????????????????????一????????????????????????????一 ~ . . , .. . 兰 繁 一山拳孛垂薅太学屉硪士学位论文 ,. 肉桂酸的含量测定? ,..】对照品溶液的制备 精密称取蠢拣酸对照品。,热零黪攀铡盛。 ?~。 ...色谱分析条件 色谱柱: :。斟,.×;检测器: 谨鼬‘ ;检测波长:;麦薹溢:室溢;灵敏度:.;流魂疆:乙 脯一.%磷酸:;流速:?~;进样量: 。在此条件下,肉棱酸 与棚邻的峰达到麟线分离,分隅度,色谱躅见图。 。葛蓊 甚~?、 ??鞋八 。:冷八 。。“几 .北状 囊妒摊 《匙 一 图 种组合提取液的高效液桐色谱图 . .爨挂酸对粼渡 . .痰撞驻色谱峰 。..线幢关系考察 精墩肉桂酸对照液.,.,.,.,.,.,.,分别加甲醇定 容至一,按...顼下条件依法测定,缨栗凌挂酸在。~,范墨癌,獒 述样精 与峰面积呈良好线性关系,回蜩方程.,.。 ...含量测定 皴试滚’,建徽手 滤貘滤过,取滤滚菝法溅定,缝皋趸表。 .,总生物碱的含量测定 精取供试液’各.。,簧其塞三角瓶中,水浴蒸干,按,.项下方法测定, 缝爱楚。表。交泰丸方药趣丰谤生提取涪实验研究 ..挥发油的含量测定 按..项下方法测定,结果见表。 。.干浸膏蘩戆测定 按..项下方法测定,结果见表。 .小结与讨论 。, 壤交泰丸方药中黄连、岗挂缀合癜缌,鬻魏匀设计馥选密懿法工艺条 件进行提取,掇嫩液作小檗碱、肉桂酸、总生物碱、挥发油及干浸膏的含量测定及 甲醇精制液的薄滕色谱、挥发油的气相色谱比较。结果单煎混合液中备指标成分的 食爨鹎显离予浸藤滚。静缀台提取滚懿薄瀑色谱无稠蒜差暴,毽铎发溜的气程琶 谱有差异。气相色谱表明,种组合提取液的挥发油主成分相同, 但备组分的相对 含擞有明显差异;油中主要有效成分桂皮醛艉相对含量,较明驻驿低。综合 以上实验结采,认为交泰丸方药成分提取融珏黄连、岗穰分溺提取为稳。 ..黄连与肉楗配伍,属寒热药性相反的配伍。实验结果表明,种组合水提取 液中个指标成分的含量,较甥显降低。此与文献“。埘报道的黄连与肉桂配 伍嚣承煎滚中生物城、岗桂酸的含量鹱显降低的实验结鬃楚一致酶。实验中发臻, 黄谶单煎液与肉襁单煎液分别离心后合并,仍有较多的沉淀生成,遮可能是由于黄 连中的生物碱与肉桂中豹酚酸类成分反应产生沉淀掰致,说麓传统将焚连与肉桂配 伍稍成丸帮入药感肖箕科学道璐靛。 ..称取肉校粗粉,分别加倍量的中性水、.水、.水提取, 结果得挥发油分剔为。,.和,,,承提褥的挥发涟量 嘲霜离子.求和中性东,遨与文献”汜载的肉柱浦翳溶于冰醋酸怒~致的。冀 原因分析主要是出于肉桂中挥发油以游离态和结合态两种形式存在,在酸性条件下 加热,可使结合悉敬搀发油水艇转纯残游离态,两易子淤趱辑致。 蜜泰丸方药半俯生提取醇沉法醇沉浓度的优选 .仪器与药品 见.项下。 .方法与结聚 ..提取液的制备 按处方比铡黉连魄,爽挂嚣段黄连~疆凝粉,凌德~嚣凝山东中医药大学届硕士学位论文 粉,按项下优选出的药材组合方式,即黄连与肉桂单煎后混合的方式,用 项下优选出的法工艺条件提取黄连采用煎煮法,肉桂采用双提法;双提法提 取的挥发油单独存放,不参与后面的操作,滤过,离心,合并上清液,水浴浓缩至 .。取共份,加入%乙醇调至醇浓度分别为%、%、%、、 、%、%,冷藏放置,离心,上清液回收乙醇至无醇昧后,分别用蒸馏水 定容至每相当于原药材.。 ..供试液的制备 精取提取液各,加硅藻土,拌匀,水浴蒸至近干,。烘干,研细,用甲 醇索氏回流,回收甲醇,残渣用甲醇定容至,得供试液每 。相 当于原药材.。 精取提取液各,加蒸馏水至,用乙酸乙酯萃取×,回收乙 酸乙酯,残渣用甲醇定容至,得供试液每相当于原药材。 ..小檗碱的含量测定 精取供试液各 与盐酸小檗碱对照液, ,点于同一薄层板上,按.. 项下方法测定,结果见表。 表 种醇沉浓度液中各指标成分的含量 . . . , . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .. .. . . .. . . . . . . . . . . ..肉桂酸的含量测定 取供试液,按..项下方法测定,结果见表。 ,.总生物碱的含量测定曼泰丸方药酌丰留生提取浓蒜验研咒 精取供试液’各.,器具塞三角瓶中,水浴蒸干,按..颁下方法测 定, 结果见表。 ..干浸膏的含量测定 按.,疆下方法测定,绥采凳袁。 ..综合评判方法与结巢 将袭中各指标成分的测定数据,按..项下方法进行标准化处理,并求出 综合评价值,结果见表。 表 种醇滚滚度滚审各据檬成分会霪豹标准纯僮疑练禽译徐蓬 注: ,、蒙簸寅搓酸斗罄生兹碱予浚膏× .小缀与讨论 水提醇沉法为中药制荆的常用提取方法,经过乙醇处理可减少制荆体积,并可 进一步制备熟他剂型。在优选出交泰丸方药法工艺条件及药材娥佳组合方式的 基礁上,终合生产实际,对该方药最往组合静滚乍不同醇淀浓发链~% 翡措标藏分含量娆较,结聚以%豹醇沉浓度各掇标的综合评价馥觳蕊。因此,交 泰丸方药时以%的醇沉浓度为佳。本研究为交泰丸新剂型的制备提供了可靠 的实验数掘。 交泰丸方药种提取方法的跑较 。 秘方法提取滚夔成分魄较 .,仪器与药品 见.项。 。,撼嫩液的制各山东串垂药走擎磊磺士孝位论文 ... 淑 拔处方比例黄连,肉棱分别称瞰黄连~目粳粉,肉桂~ 嚣糖羧,按壤优选出熬药材缀合方式,郢蓑逡与褒桂单蒸蜃瀣合 夔方式, 用项下优选出的法工艺条件提取黄连采用煎煮法,肉桂采用双提 法;双提 法提取的挥发浊单独存放,不参与后面的操作,滤过,离心,合并 上清液,水浴浓 缩至每藏稳当予蘸药褥.。 ... 波 段液,水浴浓缩至,加乙醇使含黔擞达%,冷藏教嚣, 离心,一清液圈牧乞醇至无酸睬蓐,藤蒸馏承定容至。 ... 液 按.,.颂下方法,只改用.的中性水作为裁用水,依法制褥。 ... 液 取液,水浴浓缩至,拔...颈下方法,依法制得。 .,供试液的臻萤 精取提取液各,按《..项下方法,剃得供试液每翔稽当于原药材 . 精取提取液各,按.。项下方法,割褥擞试渡每殖糕当予嚣药材 .。 按..项下方法提取挥发油,用乙醚萃取次,水浴。挥去乙 醚,得供试液。 ..定性跑较 ...对照液的制备 糖密豫取靛黢小繁酸对照燕。,鑫葵攀簿醒裁或.?瞧~。舅取黄连 聪 照嚣材,加甲醇趟声提取,制成黄连对照液。 ..,甲醇精制液的比较 取毒姿试渡鑫 ,盐酸小檗酸对照渡、黄连对照滚各驻,点予阉一薄层投 上,按...项下条件展丁,挥干,于同光及紫外灯下观浆,色谱图见 图。结果种方法提取液在与黄连对照药材色谱相应的位置上均最 相同的黄色荧 ?乜爨点,在。;鼗酸枣檗碱对照爨篷港藤瘦熬位置上,均嚣嚣糖 嚣筑黄惫荧光褒点。交泰丸方药的半仿生提取法实验研究 图 种方法提取液的薄层色谱图. . . .黄连 .盐酸小檗碱 ,,. 法与法提取的挥发油气相色谱比较 色谱条件同...项下。取桂皮醛对照品、供试液,分别进样,色谱 图见 图。结果从液的挥发油中检出个组分,而液的挥发油中检出个组 分;以桂皮醛对照品的相对保留时问为.,标示了种方法提取液的 挥发油色谱 中个共有峰,共有峰占总油的百分比,为.%,为.%;油中主要有 效成分桂皮醛的相对含量,为.%,而为.%。 ..小檗碱的含量测定 精取供试液各 与盐酸小檗碱对照液, ,点于同一薄层板上,按 ..项下方法测定,结果见表。山东中医药走学届硕士学位论文 文 四?四?? 二.』叫??....嵋?斗。 吖 驰 柏 蚰 拍 .。 .从.。 叭 ; ~ 九 四 ? 哪 图 法与法提取的挥发油气相色谱比较 . .棒皮醛对照液 .交秦丸方药的半仿生提取法实验研究 ..肉桂酸的含量测定 取供试液,按..项下方法测定,结果见表,色谱图见图。 妣越 燃.如一 图 种方法提取液的高效液相色谱图 . 肉棒酸对照液 . 山东中医药大学届硕士学位论文 .总生物碱的含量测定 精取供试液各.,置具塞三角瓶中,水浴蒸干,按..项方法测定, 结果见表。 ..挥发油的含量测定 按..项下方法测定,结果见表。 ..干浸膏量的测定 按..项下方法测定,结果见表。 ..综合评判方法与结果 将表中各指标成分的测定数据,按.,项下方法进行标准化处理, 并求出 综合评价值,结果见表。将综合评价值用直方图表示,见图。 表 种方法提取液中各指标成分含量的标准化值及综合评价值 注:小檗碱十肉桂酸×总生物碱挥发油珊× ??? 加蛐伸 提取涟 图 种方法提取液中各指标成分的综合评价直方图 ..转移率实验 精密称取黄连粉.,按《中国药典》年版黄连项下方法提取,按.. 交爨丸方药辑半嚣童提取法实验研究 项下方法测得其小檗碱含量为.%,按。.项下方法测得其总生物碱 含量为 .%。精密称取肉挂粗粉.,用甲醇索氏嬲流提取,水浴回收甲醇, 残渣掰甲醇定容鬣,按..项下方法溺得其逮桂酸含量为。%。男称取岗 桂粗粉,加水,按..项下方法测得其挥发油含量为,%。称取肉挂 糖粉,按优选如的法二【:艺条件提取,测碍其挥发矗含量为。%。出于 法爨褥的挥发漓黧,明显高于药典水蒸汽蒸馏法,故以法测得的撵发油含量为 %,计算提取液中挥发油的转移率。将农中小檗碱、肉桂酸、总生物碱、挥发 浊【搀含量按方中黄连、寓撞的豢辑冀,求穗蒸转移率,结果见表。 表转移率实验结果 . 静提取渡鼹镇羚终援魄鞍 ..药品见.项。 ..动物 怒唆葺孛毽滚,、鬣,蛙雄蚤半,落重~,本浚实黢劫魏室提供。 ..提取液的制各 分别按..项下方法,依法制得液和液,“双提法”提取的挥发油混 入莠挺取滚。鹰辐当予强魏耪。。 ..对小鼠戊融比妥钠睡眠时间的影响 取小鼠只,随机分为组,每组只,将种方法提取液分别以, .’ 灌霹,爱零对照缝给予弱薅歌黪生理裁求,粥茬对照缀给予养盘安静片承混悬液 ?.。. .一,每天次,遇续给药天,末次给药 后,腹腔 注射戊巴比妥钠.~,记泶小鼠反】卜殷舯消失至恢复时间,结果见表。山求中艟旃托擘届硕士学位论文 表 对小聚戊跫毙妥镳霪蓑露滴豹影璃夏? 注:与组比较”.:与液组比较。.。 .小结与讨论 以小繁碱、爨挂酸、总生物碱、撵发油、于浸衡为指标,在药材裁艘、溶裁量、 藏提溢凄、滤过、浓缩等条传鞠嗣戆静撵下,霹交泰兔方药静方法撵取渡进行疆 较,结果个指标综合评价德为:液液液液,液中小 檗碱、总生物碱、挥发油的转移率均大于%。种方法提取液与黄连对照药材层析 行为基本一致。但液与液中挥发油的气相色落有差异。气相色谱袋明。 滚与娆滚中簿发洼主藏势稳翅,毽各缀努戆露对窘豢骞差要;涵 中主要窍教袋分程 皮醛的稻对含爨,液为.%,.为.%。法与法提取液均有较好 的镇静作用,均可明显延长戊巴比妥钠对小鼠的隧眠时间,与生理盐水组比较,具 有显著差异;液的镇静作用较液明显增强。综合分析认为,交赛丸方药提取 时以法为毽。法符台鄹激蕊物经薅胃肠遴转运暇羲约嚣理,飘蠢效瘦分 含量轰,药效好,生产成本低。罄欲爵减少鼹罱量,滋~步去除杂获,露采用 法,其较法提取的成分含量黼。甏泰丸方药罅串傍童提取岳赛验磅党 结语 本研究先以小檗碱、肉橇酸、总生物碱、挥发油、于漫膏含量为指标,用均匀 设诗优选交泰丸方药鲍法工艺条牛,结渠交泰丸方莼鲍工艺祭牛为:繁 煎掰水醛调至.,第、煎餍水依次以调至.,.;煎煮 时间依次为,,。 在我逸爨工艺条串约基础上,对该方药蕈孛缝合方式豹滚箨定性秽 定艇眈较,结暴单煎混合液中各指标成分的含量明显离于混煎 液。种组合提取液 的薄层色谱无明湿差异,但撵发油的气相德谱有差异。综合考察的结果,认为交臻 丸方嚣袋分提取时,强黄逡、囊桂分剐撬联为建,繇荧逶采窝藏煮法,爨挂采璃双 掇法。 进一步对该方药最佳组合的液作不同醇沉浓度的成分比较,结果以%的 酶沉没凄为毽。凌迓基疆土,嚣该方菱传秘方法提取滚翡成分愆较及滚与轷 液的镇静作用比较。结果各指标成分的综合评价值为:液液液 液,液中小襞碱、总生物碱、挥发油的转移率均大于%;种方法提取液的层 掇?于为基本一致,毽撂发滔泌气籀色港鸯麓舜;滚豹镶黪季筝矮秘鼹强予滚。 综合评判认为,交泰丸方药掇取以法为佳。法符合口服药物经人体胃肠邋 转运吸收的原理,且有效成分含量高,药效好,生产成本低。本研究再次证实 法在璞荔有数残分夔提取率,疆毫菱效方疆璜显铙予娓法。法誉为中菱撬致工 艺的一项重大改革,具有广阔的应用前景。 本研究进一步验证了法的科学性日实用性,完簿了中药复方剂改用法 瓣黎本谚究模式,为交泰丸裁潋磅究饶遥如了提取工艺,并为中药药对静研究撬供 了借鉴。山表中垂药走学届巅士学位镑炙 参考文献 张坤瑞.刘耀,高军.交泰丸疗失眠证例临床研究.实坩中噬封杂志, :. 高绉妥,交泰蔻嚣名 舅。光鹳串篷杂志,,:. 附属第一医院中医科.交泰丸治疗例神经官能症的疗效观察】.北京医学院学报, : . 藩元拳。交器丸派疗炎酝证镪 弱。实臻中舞篷结台杂志,,:. 张坤瑞,刘耀,高军.交寨丸治疗失眠证例临床研究.实用中医黝杂志,, : . 瞄 姜静斌,豁黼键.安酝努融灵瓣疆廉鬟察醪】。中国中医蘩勰薤学杂志壤刊,,: . 何永田,边可胸,袁祸茹.交泰丸加昧治疗快速型心律失常捌浙江 中医杂志,, :。 张文华.交豢丸加味治疗室性早搏例.广碟中医药,,:. 蝴兆满。黄迄伍肉挂治疗口腔疾病。中联杂志.,:. 】 莓朝三,李新华,诲最云,簿.交泰丸对中枢神经系统静澎璃叮】,中药药疆与瞌床,, :. 许风云,孙曙光,茧明三,簿。交泰丸对心血管系统的影响.河南中蹉,,: 】 桶洪喾,熬璐雪,辆永耨,等.高媛毛缎静电泳法测定焚迄国释配伍虢衙主妥生物碱的禽 鼙.中豳中约杂志,,:. 徐恐春,戳璐雷,于弧丽.离散液相色谱法测定黄连配缎肉棒蔚质肉棣酝的禽碹.巾翅 中药杂志,,:. 张兆旺,孙芬梅.试沦“、”仿生提取法”制备中药口服制荆中国中药杂志,, :, 】 张璃亭,张张睚,孙秀梅.思维方式的转换与中药一待生提取法’’ 门.中国中药杂志, ,:. 孙秀梅,张兆蛙,雾姥,锋.舒辛:虢鬏毂謦 手孛提取方法的成分比较.中藏势,, 交泰丸方药的半仿生提取法实验研充 :. 孙秀梅,张兆旺,菊英,等.寒定泡腾冲刘种提取方法的比较中国中药杂志.. :. 孙秀梅.张兆旺,张学兰,等四神茶荆种提取方法的成分比较中国中药杂志,, :. 张学兰,张兆旺,孙秀梅,等.四叶茶剂种提取方法的药效学比较.中国中药杂忐,, 增?:. 呦
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