分析灵敏度与功能灵敏度的临床意义区别

分析灵敏度与功能灵敏度的临床意义区别 分析灵敏度(analytical sensitivity)与功能灵敏度(functional sensitivity)均可作为测定方 法检测某物质的灵敏度,但两者所适用的范围与达的临床意义有差异:分析灵敏度又称检测限 量(limit of detection),是基于零浓度基础上,用于区分从无到有的分析能力.该值的确定是通 过多点定标,并附加3个不同水平的质控品,经10次以上重复测定S0定标液,得到-x+2s为该测定方 法的分析灵敏度.功能灵敏度又称临床灵敏度(clinical sensitivity),是基于低浓度的基础上, 用于区分从有到无的分析能力[1,2].该值的确定是通过品(如S1)作梯度稀释,采用同一台仪 器,同一批号试剂,同一标准曲线,每天1次,每次3遍进行测定,共测 3周以上时间的数据,根据批 间变异系数(CV)?20%时的最大稀释管浓度作为功能灵敏度.最通俗的比喻为:飞机从遥远的地方 向你飞来,从看不见到看见这一点,是区分从无到有的分界点为"分析灵敏度";而你站在飞机场, 看着飞机由近到远飞去,从看得见到看不见,即从有到无的分界点为"功能灵敏度".一般分析灵敏 度比功能灵敏度高10倍左右. 分析灵敏度与功能灵敏度, 分析灵敏度与功能灵敏度 什么是分析灵敏度和功能灵敏度, 最低检测浓度/极限(Minimal detectable concentration/limit, MDC/MDL)是反映最低可区别于零值的浓度，又称分析灵敏度(Analytical sensitivity)。功能灵敏度(Functional sensitivity)为 分析灵敏度(检测限) 一、 分析灵敏度(检测限) 1( 检测的最低分析物浓度为检测系统的分析灵敏度或称检测限。这个浓度限值对毒检验在法庭上特别重要，希看通过检测知道样品中究竟有无药物，这是很关键的。另外，肿瘤标志物及很多特定蛋白应该有一个可检测的最低浓度或某个量;如:前列腺特异蛋白(PSA)，这是病人治疗后监视复发的重要信息;长期以来，临床对的前列腺特异蛋白有意义的最小量要求予以明确。核酸检测报告的阴、阳性也要求说明，能检出的最小拷贝的核酸量相当于多少病毒。因此，确定检测系统的可报告低限是重要的分析性能。 2( 当前，检测限术语混乱。厂商使用各种词语，如:灵敏度(sensitivity),分析灵敏度(analytical sensitivity),最小检测限(minimum detection limit)，功能灵敏度(functional sensitivity)，检测限度(limit of detction)定量限度(limit of quantitation)等。迄今尚无标准定义，所以有必要了解每个词语的实际含义和确定这个含义的实验方式，怎样处理数据，怎样由数据作出估计，以及这个估计对该检验的医学应用是否有用。以下先容的分析灵敏度分为具有定性含义的检测低限，和具有定量含义的生物检测限及功能灵敏度。 二、 检测低限(Lower Limit of Detection，LLD) 每次检测，总是做一个空缺样品。检测方法常以空缺响应量校准至零点，再检测各个检测样品的反应响应量。这些样品的反应响应量在扣除了空缺样品响应量后，是分析物的对应响应量。但是，空缺响应量也有波动。若重复多次作空缺检测，以空缺(响应量)均值和标准差表示这些空缺均值的离散程指标。在确定方法性能或绘制标准曲线时，经常以空缺均值表示空缺响应量大于或小于空缺均值，各有50%的可能性。当空缺响应量小于空缺均值，对同一个样品检测响应量(未扣除空缺响应量)，似乎反映分析物要多一点，检测方法好象灵敏些。当空缺响应量大于空缺均值，似乎原先可以检测出来的分析物现在测不出了。因此，检测方法必须说清楚:究竟怎样才算是可检测出来的分析物量,标准曲线从零开始，是不是报告的分析物量 可以从零开始,这就是检测低限要回答的目。统计说明，假如空缺响应量的波动服从正态分布规律:各个单次检测的空缺响应量x空缺有95%的可能性为: —2.s空缺?x空缺? —空缺 2.s空缺 即:?x空缺- 空缺??2.s空缺 其中较空缺均值小的一半会使分析物更易检测出来,这不是检测不出,不必考虑.若有一个检测响应量较空缺响应量均值大2s空缺，仍然以为是空缺响应量的可能性只有5%;有95%的可能性属于样品内有分析物形成的检测响应检测响应量;它较空缺均值差2s空缺 以上。同理，响应量较空缺均值相差3s空缺以上的，还以为是空缺响应量的可能性仅0.3;而有99.7%的可能性是样品内有分析物形成的响应量.所以若检测样品的反应响应量较空缺均值大的,但和空缺均值相差2s空缺或3s空缺以下的,只能说这些响应量是空缺样品单次检测的响应量,样品没有分析物,或者表示:分析物量为零.超过2s空缺或3s空缺的响应量才以为样品中真的含有分析物. 检测低限定义为样品单次检测可以达到的检测响应量对应的分析物量。检测系统或方法对小于或即是检测低限的分析物量只能报告“无分析物检出”。通常估计95%或99.7%的两种可能性: 95% 可能性:LLD= 空缺 2.s空缺 99.7% 可能性LD= 空缺 3.s空缺 要留意的是,直接读出浓度单位的检测系统对低于零的检测将报告零,其分布不是正态的,因此计算的均值和标准差不能如实表达检测低限的真实情况.若检测响应可以用初始值表示,如:吸光度、荧光、等，此时s空缺是有效的。所以应使用初始值来计算均值和标准差，然后再转换成浓度单位。 三、 生物检测限度(Biologic Limit of Detection，BLD) 大于检测低限的响应信号说明这个样品内有分析物，但是方法还不能正确报告定量结果。由于在这样低的浓度或其他量值范围内，单次检测样品的反应响应量重复性较差。那么在多少检测响应量时才能较好地报告定量结果呢,现先容两种方式:生物检测限度和功能灵敏度。原则上，对多个近于检测限浓度的样品(肯定不是空缺样品)作重复检测，对扣除了空缺响应量后的样品检测响应量以均值和标准差回纳。按正态分布规律，单次检测样品具有的响应量有95%或99.7%的可能性与不检测响应量均值相差2或3倍的响应量标准差。较均值还大的单次响应量肯定没题目;但是较均值小的那些单次响应量，若和检测低限(空缺响应量上限)交叉，说明检测方法还不能单凭一次检测区分出这是空缺还是有分析物。因此，这些样品检测响应量的95%或99.7%单次检丈量最低值也较检测低限(LLD)大,这样就可保证样品在任何情况下,单次检测响应量一定不是空缺的响应量;这个样品具有的分析物浓度可以定量地报告出来.在多个近于检测限的样品中,符合这样条件的最低分析物浓度(或其他量值)就是检测系统或方法的生物检测低限. 生物检测低限定义为:以检测低限加2或3倍检测限样品标准差的方式,确定检测系统或方法可定量报告分析物提取低浓度或其他量值的限值。 生物检测低限(BLD)的具体度量方式为: 95% 的可能性:BLD=LLD 2s检测限样品 99.7%的可能性: BLD=LLD 3.s检测限样品 本词语较完善地表示实际样品的检测限度,如什么浓度才是零值或没有分析物有差异.在证实厂商的BLD说明时，应使检测限样品和浓度的厂商的说明相同。 四、 功能灵敏度(Functional Sensitivity ，FS) 功能灵敏度定义为:以天间重复CV为20%时对应检测限样品具有的均匀浓度，确定检测系统或方法可定量报告分析物的最低浓度或其他量值的限值。为了估计FS，须用多个检测限浓度来确定在低浓度处的精密度表现，从中选择具20%CV的浓度。在证实厂商的FS的明时，使用的检测限样品浓度应和厂商的说明相同。 五、 实验须考虑的因素 一般制备两种不同类型的样品。一个是“空缺”样品，即不含有分析物，分析物浓度为零。另一个是“检测限”样品，即含有低浓度的分析物。在有些场合下，需要制备几份“检测限”样品。空缺和检测限样品由检验方法作重复检测。计算各自的均值和标准差。不同的检测限由空缺和检测限样品数据计算出来。 1( 空缺液:一份空缺液用作空缺，其他用于制备检测限样品。理想的空缺液应具有和检验的病人样品相同的基体。但是，常使用检测系统的系列标准品中的“零标准”作为空缺。对某些项目，可使用术后无某疾病的病人样品(如:前列腺肿瘤术后病人的无PSA血清)为空缺样品。 2( 检测限样品:在证实某方法的灵敏度性能时，对空缺液加进分析物配制成检测样品，。加进的分析物量应是厂商说明的检测浓度。在建立检测限度时，有必要制备几份检测限样品，它们的浓度应界于预期检测限度高低一些的范围内。重复检测数:没有具体规定，但常推荐做20次。符合临床检验对重复检测实验的要求。厂商常推荐10次，为减少开支实验室也常采纳作10次 3( 实验需要时间:假如主要从空缺液的重复性了解检测低限，经常就做批内或短期实验。假如主要从“检测限”样品的重复性了解定量的检测限，推荐作较长时间的实验，代表天间测定性能。实际就做10次检测(10d)。 计算示例: 某酶标法的甲状腺球蛋白试剂盒的分析灵敏度实验结果如下: 1( 用甲状腺切除后恢复健康的病人血清为无甲状腺球蛋白的空缺血清。将纯化的甲状腺球 蛋白加进该血清，并用空缺血清作系列稀释，组成0，0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0ug/L的甲状腺球蛋白样品. 2( 空缺血清作12次批内重复测定;对其它系列样品作天间重复测定,做了12d.记录所有结果,列表如下: 表1 甲状腺球蛋白分析灵敏度实验结果 1. 检测低限 空缺”0”组的均值为0.098,标准差为0.0137。这里采用99.7%的可能性来计算检测低限。如上所述: LLD= 0 3s0，现 0=0.098,SO=0.0137, ? LLD= 0 3s0=0.098 3×0.0137=0.139 实际上,若以空缺吸光度均值为检测的出发点0,那么有99.7%的可能性,每次只做一个空缺时,出现最高的空缺吸光度较该空缺吸光度均值高0.0137的3倍,即0.041A。这些吸光度相当于样品具有的甲状腺球蛋白即为本法的检测低限。 实在，上述的实验结果可以画出该检测系统在低浓度范围的标准曲线。将上面所有的吸光度减往空缺吸光度均值，然后求每组的均值和标准差。见表2。 现在0.25ug/L组减往空缺后的吸光度均值为0.07625A.假定这段范围内甲状腺球蛋白量和吸光度间呈线性.因此0.041A相当于 0.25× 0.041 =0.13ug/L 0. 07625 所以本法的检测低限为0.13ug.L 表2 甲状腺球蛋白由检测系统分析灵敏度计算 1、生物检测限 由前述,空缺血清如以现有的吸光度均值为准,有99.7%的可能性出现的空缺吸光度可高到0.139A.0.25ug/L甲状腺蛋白组减往空缺后的吸光度均值为0.07625A,标准差为0.0253A;可推测,有99.7%的可能性出现最小的吸光度为0.07625 -3×0.0253A,即0.0019A;而空缺吸光度减往空缺吸光度均值可能有的最高值为0.0411A.这0.0019A在空缺吸光度涉及的范围内.因此0.25ug/L不是本法的生物检测限。0.5ug/L的99.7%的最低吸光度0.025A(已减往空缺),也在空缺涉及的范围内.1.0ug/L的99.7%的最低吸光度为0.0518A(已减往空缺),在0.0411A之外,说明1.0ug/L的样品吸光度有99.7%的可能性,一定大于空缺的吸光度,能定量地报告结果。1.0ug/L为本法的生物检测限. 3、功能灵敏底 从上面的表中可知,1.0ug/L组的重复检测变异系数CV为19.3%,最接近20%.所以,本法的功能灵敏度为1.0ug/L.它也正好即是生物检测限估计的限值.