【doc】 尿蛋白电泳及尿β2微球蛋白联合检测在肾小管间质损伤中的诊断价值

【doc】 尿蛋白电泳及尿β2微球蛋白联合检测在肾小管间质损伤中的诊断价值 尿蛋白电泳及尿β2微球蛋白联合检测在肾 小管间质损伤中的诊断价值 旦夕卜医堕床生物化学与检验学分册2005年12月第26卷第12期SectGinBioehem&LabMedForeignMedSci,December2005,Vol26,N o.12?885? 尿蛋白电泳及尿l32微球蛋白联合检测 在肾小管间质损伤中的诊断价值 牛广华孙旭王莹张春明 【摘要】目的探讨尿蛋白电泳和尿p微球蛋白(p一M)联合检测在.肾小管间质损伤中的诊断 价值.应用十二烷基硫酸钠一琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)测定尿蛋白,放射免疫法测定尿B一 M.结果肾小管间质损伤组尿蛋白电泳出现管性蛋白明显多于正常对照组,尿B一M显着高于正常 对照组.7O例肾小管间质损伤患者尿蛋白电泳出现管性蛋白44例,尿B一M升高4l例,两种指标联 合检测出肾小管间质性损害53例.结论尿蛋白电泳和尿B一M联合检测,可作为.肾小管间质损伤 早期诊断敏感的实验指标. 【关键词】电泳;Bz微球蛋白;.肾炎,间质性;实验技术和方法 DiagnosticvalueofthecombinativemeasuringofproteinuriaelectrophoresisandurinaryP2-microgiobulin inrenaltubularinterstitialdamageN 儿,Guang—hua,SUNXu,WANGYing,eta1.Department ofLaboratory,theAffiliatedHospitalofLiaoningCollegeofTraditionalChineseMedicine,Shen— yang110032,China [Abstract]ObjectiveTostudythediagnosticvalueofthecombinativemeasuringofproteinuria electrophoresisandurinaryB2一 Minrenaltubularinterstitialdamage.MethodsTheproteinuriadetec— tedwithsodiumdodecylsu1fatargarosegele1ectrophoresis(SDS—AGE)a ndtheurinaryB2一Mdetected withradioimmunoassaywereusedtoanalyze70urinesamplesfrompatientswithrenaltubularinter— stitialdamage.ResultsThetubularproteinuriaintherenaltubularinterstitialdamagegroupwassig— nificantmorethanthatinthenormalgroup.TheurinaryB2一 Mintherenaltubularinterstitialdamages groupweresignificanthigherthanthatinthenormalgroup.Therewere44casesoftubularproteinuia and41casesofurinaryB2一 Mincreasingin70urinesamplesfrompatientswiththerenaltubularinter— stitialdamage.Therewere53urinesamplesdiagnosedrenaltubularinterstitialdamagecombinalively measuredwiththetwomethods.ConclusionThecombinativemeasuringofproteinuriae1ectrophoresis andurinaryB2一 Mcanbeusedassensitiveindexesfortheearlydiagnosisoftherenaltubularinterstitial damage. [Keywords]E1ectrophoresis;Beta2-microglobulin;Nephritis,interstitial;Laboratory techniquesandprocedures 近年来,肾脏疾病的早期诊断已成为医学界关注 的焦点之一,蛋白尿是肾脏疾病最常见的临床现. 尿液成分分析,尤其是尿蛋白成分分析(根据各组分 的出现与否判断肾脏损伤的部位和程度)已成为肾脏 疾病的早期诊断方法l1j.本文应用十二烷基磺酸钠一 琼脂糖凝胶电泳(sodiumdodecylsulfate—argarose gelelectrophoresis,SDS—AGE)技术对蛋白尿进行分 类,并结合尿2微球蛋白(2一microglobulin,82-M)测 定进行对照分析,探讨尿蛋白电泳和尿82-M联合检 测在肾小管间质损伤中的诊断价值. 作者单位:110032沈阳,辽宁中医学院附属医院检验科(牛广华,张 春明);110034沈阳,武警辽宁总队医院检验科(孙旭);116027大连医科 大学检验系(王莹) 资料与方法 ? 论着? 1.研究对象:正常对照组30例,其中男18例,女 12例,年龄13,71岁,平均(46?5.47)岁,均为健康 体检者,无肾脏疾病病史及临床表现,常规实验室检 查无肾脏疾病.肾小管间质损伤组70例,为辽宁中 医学院附属医院因各种肾脏疾病收治入院行肾穿刺 活检术诊断为有肾小管间质损伤的肾内科住院患者 (无其他原因导致血,尿0.一M增高的疾病),其中男41 例,女29例,年龄12,80岁,平均(49.3?9.98)岁. 2.仪器:尿蛋白电泳采用HYDRASYS全自动电 泳仪(法国Sebia);尿0.一M用SN-695B型智能放射免 疫测量仪(上海原子核研究所). 3.试剂:HYDRASYS全自动电泳仪配套试剂 盒;82-M放射免疫定量检测试剂盒(北方生物制品研 ? 886?国外医学临床生物化学与检验学分册2005年12月第26卷第 12期 SectClinBiochem&LabMedForeignMedSd,December2005,Vol26,N o.12 究所). 4.方法:先用尿液分析试纸条对30例正常对照 组和70例肾小管间质损伤组患者尿液进行尿蛋白定 性检测,再应用SDS—AGE法测定尿蛋白电泳及放射 免疫法测定尿J3.一M.两项测定均按照试剂盒 操作. 5.结果判定:(1)尿蛋白电泳:参照与标本同时电 泳的蛋白标准及尿蛋白电泳图谱,尿蛋白结果可分为 4种:尿液经电泳后凝胶片上未出现区带或仅见少量 淡染白蛋白(相对分子质量约70×10.)区带,其他大, 小分子区带均未出现,称为生理性蛋白尿电泳;若除 白蛋白区带外,在加样点与白蛋白之间出现其他电泳 区带,称为肾小球性蛋白尿;若除白蛋白lx=带外,在凝 胶片阳极与白蛋白之间出现其他电泳坩.fJ!lJ为肾小 管性蛋白尿,即出现管性蛋白;若上述区j:1lfI;出现,则 为混合性蛋白尿.(2)尿J3.一M:其正常值为23, 160t~g/L. 6.统计学处理:尿J3一M数据用--+-S表示,组间 比较采用配对t检验. 结果 1.正常对照组与肾小管间质损伤组尿蛋白电泳 结果:(1)正常对照组尿蛋白电泳结果:用尿液分析试 纸条对30例正常人作尿蛋白定性,其中27例为阴 性,尿蛋白电泳无任何区带显示;3例为阳性,尿蛋白 电泳图形特征为仅见少量白蛋白淡染区带.30例正 常对照组尿液样本进行尿蛋白电泳测定均未出现管 性蛋白.(2)肾小管间质损伤组尿蛋白电泳检测结 果:用尿液分析试纸条对70例肾小管间质损伤组患 者作尿蛋白定性,结果(--+-),(++++),再进行尿 蛋白电泳,结果44例出现管性蛋白,占62.9;26例 未出现管性蛋白,占37.19/6. 2.正常对照组与肾小管间质损伤组尿8.,M检测 结果:见表1. 表1正常对照组与肾小管间质损伤组尿0z—M检测结果 注:与正常对照组比较,P<O.05. 3.肾小管间质损伤组尿蛋白电泳与尿J3.一M检测 结果:见表2. 表2肾小管间质损伤组尿蛋白电泳与尿0z—M检测结果(例) 讨论 自Risdon等首次发现肾小球滤过率(glomerular filtrationrate,GFR)下降与肾小管萎缩呈正相关,而 与肾小球损害无明显相关性以来,越来越多的研究表 明,肾功能损害与肾小管间质病理改变的程度密切相 关.在肾脏疾病发生,发展中,肾小管间质病变起 着比肾小球病变更为重要的作用,并决定着肾脏疾病 的预后和转归].目前,肾小管间质损伤的重要性已 为越来越多的国内外学者所重视. SDS—AGE尿蛋白电泳是利用琼脂糖凝胶的选择 性成分及多孔性,并根据蛋白质的相对分子质量区分 尿中不同蛋白组分,在早期肾损伤的诊断和疾病治疗 过程中对病情的动态分析有很大价值].但由于技 术所限,实验结果各蛋白组分仅凭分子量判断,因此 其特异性较差[.本文30例正常对照组中,27例尿 蛋白电泳无任何区带,说明正常范围尿蛋白采用电泳 方法不能被检出,仅3例见少量白蛋白淡染区带,为 生理性蛋白尿.70例肾小管间质损伤患者尿蛋白电 泳44例出现管性蛋白,为各种原因导致肾小管间质 损伤患者.26例未出现管性蛋白,可能是由于肾小管 间质损伤较轻,肾脏仅排出少量白蛋白或微量肾小管 性蛋白而未被检出,也可能是由于尿中蛋白量,RBC 及检测者主观判断的影响而未被检出. J3.一M相对分子质量约为l1.8×10.,是I型人白 细胞抗原(humanleukocyteantigen,HIA)抗原轻链 蛋白.正常人J3.一M产生量恒定,因其分子量较小,几 乎全部从肾小球滤过,滤过的J3:一M约99.99/6被近曲 小管重吸收并分解.因此,正常人尿液中J3:一M含量 很低.有文献报道,尿J3一M水平是评价近端肾小管 功能的敏感指标,并且能反映近端肾小管损伤的程 度.本文70例肾小管间质损伤组尿J3:一M水平显着 高于正常对照组(P<0.05),可见当肾小管间质损伤 时,尿B一M排出量增加,故尿B一M水平是评价肾小 管间质损伤的敏感指标.但尿J3:一M受血浓度的影 响,许多全身性疾病,如类风湿关节炎,系统性红斑狼 疮(systemiclupuserythematosus,SIE),获得性免疫 缺陷综合征(acquiredimmunedeficiencysyndrome, AIDS)等J3:一M的产生均增加,此时尿液浓度的增加 并不反映肾小管间质的损害.而且尿J3一M浓度还 受尿pH值的影响,在酸性尿中易分解,因此,有时肾 小管间质损伤患者尿J3.一M测定结果在正常范围内. 由于两种检验方法中仅尿蛋白电泳出现管性蛋 白或仅尿J3:一M升高就可以反映肾小管间质性损害, 70例肾脏疾病患者尿蛋白电泳出现管性蛋白者44 例,占62.9,尿J3:一M升高41例,占58.6%.尿蛋 白电泳出现管性蛋白尿且尿J3:一M升高32例,加上仅 尿蛋白电泳出现管性蛋白12例和仅尿(下转第888页) ? 888?国外医学临床生物化学与检验学分册2005年l;多26卷第;塑!i 堕!生堕!坠翌!!!!!堑!: 表1甲,乙两组乙肝大三阳患者血清免疫球蛋白测定结果[g/I,(孑?)] 注:甲组与乙组比较,P<O.05;一P>O.05. 讨论 研究认为,HBV感染导致的肝细胞损伤不是病 毒复制的直接结果,而是针对附着在肝细胞表面的 HBV抗原的细胞免疫和体液免疫应答.前者研究较 多,后者报道甚少.关于肝细胞损伤的体液免疫机 制,有人作了患者和健康人多项血清免疫指标对比研 究,但未涉及到这些指标在评价肝细胞损伤程度中的 意义,本文就此作初步探讨. 本文检测结果显示,两组血清IgG,IgA和CRP 检测水平具有统计学意义,即AIT>200IU/I患者 高于AIT<40IU/I患者检测水平,提示该3种免疫 球蛋白在肝细胞损伤机制中起重要作用.这是由于 IgG在后期体液免疫中占主导地位,IgA对携带HBV 的肝细胞亦有一定的破坏力,而血清CRP是在某些 病理情况下产生的一种糖蛋白,它在肝脏内合成,健 康人血清中含量极微,当肝脏受损时,肝细胞可出现 不同程度坏死,汇管区炎性细胞浸润程度也不同,肝 脏合成CRP也伴随着相应变化,致使肝脏合成CRP 增加,大量释放入血[. 在体液免疫过程中,IgM出现最早,但消失也快, 故对携带HBV的肝细胞损伤小,其浓度在HBV感 染所致的肝损伤过程中无明显变化.补体系统广泛 参与机体抗微生物防御反应以及免疫调节,也可介导 免疫病理的损伤性反应,是人体内具有重要生物学意 义的效应系统和效应放大系统.但本文发现,c.和 C检测水平在乙肝大三阳肝细胞损伤不同程度的两 组间无统计学意义(P>0.05),提示这两种补体对携 带乙肝病毒的肝细胞免疫应答无直接促进作用. 参考文献 (收稿日期:2005—06—22) (本文编辑:张卡琳) (上接第886页) G一M升高9例,两种指标联合检测出肾小管间质性损 害53例,占75.79/6,提高了检出率.这是因为尿蛋白 电泳中出现的管性蛋白可包括a微球蛋白(a.一m卜 eroglobulin,a1-M),视黄醇结合蛋白(retinalbinding protein,RBP),溶菌酶等其他小分子量蛋白,可以弥 补尿B一M在酸性尿中易分解,受尿pH值的影响. 而尿G一M也可以弥补尿蛋白电泳结果判断受尿中蛋 白量,RBC及检测者主观判断的影响,因此,两者联合 检测提高了检出率. 尿蛋白电泳和尿B一M检测用尿液作标本,对患 者本身无任何损伤,且取材方便,报告快速,准确.因 此,开展尿蛋白电泳和尿B一M联合检测,可作为肾小 管间质损伤诊断敏感的实验室指标,有助于临床对肾 小管间质损伤的早期诊断,控制疾病发展,疗效判断, 提高治愈率,为临床提供全面的实验室信息. 参考文献 1钟月华,黄之虎,谭建荣,等.非浓缩尿蛋白电泳及其在肾 脏疾病诊断中的应用.广西医科大学,2004,21(1): 75—76. 2BohleA,Mackensen—HaenS,von—GiseH,eta1.Thecon— sequencesoftubulo—interstitialchangesforrenalfunctionin glomerulopathie.~.Amorphometricandcytologicalanaly— sis.PatholResPract,1990,186(1):135—144. 3孙伟,曾安平,王钢,等.肾小管问质病变与进行性肾小球 损害.医学综述,1998,4(10):532—535. 4VangelistaA,FrascaGM.SeveriB,eta1.Clinicalfactors inprogressiverenaldamage:theroleofinterstitialfibrosis. 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