抗凝剂[资料]

抗凝剂[] 抗凝剂 抗凝剂 掌握 抗凝剂种类很多，性质各异，必须根据检验止的适当选择，才能获得预期的结果。现将实验常用抗凝剂及其使用方法简述如下: 1、乙二胺四乙酸(EDTA)盐 EDTA有二钠、二钾和三钾盐。均可与钙离子结全成螯合物，从而阻止血液凝固。 EDTA盐对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学公委员会(International committee standard of hematology ,ICSH)1993年文件建议，血细胞计数用EDTA二钾作抗凝剂，用量为EDTA-K2-2H2O1.5-2.2MG (4.45?0.85μmol)/ml血液。EDTA-NA与EDTA-K2对血细胞计数影响均较小，但二钠溶解度明显低于二钾，有时影响抗凝效果，其他抗凝剂不适合于血细胞计数。1-1是几种抗凝剂对白细胞计数的影响，EDTA影响小板聚集，不适合于作凝血象检查和血小板功能试验。 2(草酸钠(sodium oxalate)草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。 3(肝素(heparin)肝素广泛在于肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和暑碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的粘多糖，是分散物质，平均分子量为15000(2000-40000)。肝素可加强抗凝血酶?(AT-?)灭活丝氨酸蛋白酶，从而具有阻止凝血酶形成，对抗凝血酶和阻止血小板聚集等多种作用。每毫升血液抗凝需要持素15?2.5IU 。尽管肝素可以保持红细胞的自然形态，但由于其常可引起白细胞聚集关使用涂片在罗氏()染色时产生蓝色背景，因此肝素 抗凝血不适全血液学一般检查。肝素是红细胞透渗脆性试验理想的抗凝剂。 4.枸椽酸钠(trisodium citrate)枸椽酸盐可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。 枸椽酸钠有2Na3C6H5O7。和2Na3C6H5。11H2O等多种晶体。通常用前者配成109mmol/l(32g/l)水溶液(也有用106mmol/l浓度)，与血液按1:9或1:4比例使用。枸椽钠对凝血V因子有较好的保护作用，使其活性减低缓，故常用于凝血象的检查，也用于红细胞沉降率的测定。因毒性小，是输积压保养中的成分之一。 附录四 常用抗凝剂的配制及用法 在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。对抗凝剂的要求是:用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。 一、肝素 (1)肝素抗凝作用原理 肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。 (2)配制和用量 纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液计)。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1,肝素生理盐溶液，用时取0(1毫升于试管内，100?烘干，每管能抗凝5,10ml血液。也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为:大白鼠2(5,3(0mg/200,300g体质量，兔10mg,kg体质量，狗5,10mg,kg体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。 二、草酸盐合剂 (1)原理 草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3:2比例配置，可使血细胞体积保持不变;加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。 (2)配制方法及用量 草酸铵1(2g、草酸钾0(8g、福尔马林1(0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0(1ml(即相当草酸铵1(2mg，草酸钾0(8mg)。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。如取0(5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。 (3)注意事项 草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的 制取。不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。 三、枸櫞酸钠 常配成3,5%水溶液。也可直接加粉剂，每毫升血加3,5mg，即可达到抗凝目的。 枸櫞酸钠可使钙失去活性，防止凝血。但其抗凝作用较差，碱性较强，不宜作化学检验之用。仅可用于红细胞沉降速度测定。急性血压测定实验所用枸櫞酸钠为5,6,溶液。 四、草酸钾 (一)原理和注意事项 草酸钾为最常用的抗凝剂。其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合，形成不溶解的草酸钙，使血液不凝固。常用于非蛋白氮测定，但不适用于测定钾和钙。草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故应注意。 (二)配制及使用方法 取草酸钾10g，加蒸馏水少许使溶解，再加蒸馏水至100ml。配制成10,水溶液，如每管加0.1ml则可使5~10ml血不凝。一般如作微量检验，用血量较少，可配制成2,溶液，如每管加0(1ml可使1~2ml血液不凝。 五、乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA) EDTA对血液中钙离子有很大的亲和力，能与钙离子络合而使血液抗 凝。每0.8mg可抗凝1ml血液。除不能用于血浆中钙、钠及含氮物质之测定外，适用于多种抗凝。 附录五 常用血液抗凝剂的配制及用法 作者:佚名 转贴自:NET/DXZM 点击数:11 (一)肝素(Heparin) 肝素的抗凝血作用很强，常用来作为全身抗凝剂，特别是在进行微循环方面动物实验时的肝素应用更有重要意义。 纯的肝素10mg能抗凝100ml血液(按1mg等于100个国际单位，10个国际单位能抗凝1ml血液计)。如果肝素的纯度不高，或过期，所用的剂量应增大2,3倍。用于试管内抗凝时，一般可配成1,肝素生理盐水溶液，取0.1ml加入试管内，加热l00?烘干，每管能使5-10ml血液不凝固。于动物全身抗凝血时，一般剂量为: 大白鼠:2.5,3.0mg/200,300g体重 兔:lOmg/kg 狗:5,lOmg/kg (二)草酸盐合剂 配方: 草酸铵 1.2g 草酸钾 0.8g 福尔马林 1.0ml 蒸馏水加至 100ml 配成2%溶液，每毫升血加草酸盐2mg(相当于草酸铵1.2mg，草酸钾0.8mg)。用前根据取血量将计算好的量加入玻璃容器内烤干备用。如取0.5ml于试管中，烘干后每管可使5ml血不凝固。此抗凝剂量适于作红细胞比容测定。能使血凝过程中所必须的钙离子沉淀达到抗凝的目的。 (三)枸橼酸钠 常配成3,,5,水溶液，也可直接用粉剂。每毫升血加3,5mg，即可达到抗凝的目的。 枸橼酸钠可使钙失去活性，故能防止血凝。但其抗凝作用较差，其碱性较强，不适作化学检验之用。可用于红细胞沉降速度测定。急性血压实验中所用的枸橼酸钠为5,,6,溶液。 (四)草酸钾 每毫升血需加1,2mg草酸钾。如配制10,水溶液，每管加0.1m1则可使5,10ml血不凝固。