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锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变化

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锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变化锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变化 锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变 化 第30卷第4期 2010年7月 热带地理 TR0PICALGEOGRAPHY VoI.30.NO.4 July,2010 锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变化 黄玲英,余克服,施祺,赵美霞,陈天然,严宏强 (1.中国科学院南海海洋研究所,边缘海地质重点实验室,广州510301;2.中国科学院海南热带海洋生物实验站,海南三亚572000) 摘要:以海南三亚鹿回头珊瑚礁区生长的花鹿角珊瑚(Acroporaflorida)和浪花...
锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变化
锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变化 锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变 化 第30卷第4期 2010年7月 热带地理 TR0PICALGEOGRAPHY VoI.30.NO.4 July,2010 锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变化 黄玲英,余克服,施祺,赵美霞,陈天然,严宏强 (1.中国科学院南海海洋研究所,边缘海地质重点实验室,广州510301;2.中国科学院海南热带海洋生物实验站,海南三亚572000) 摘要:以海南三亚鹿回头珊瑚礁区生长的花鹿角珊瑚(Acroporaflorida)和浪花鹿角珊瑚(Acroporacytherea) 为研究对象,通过实验室模拟金属锌的胁迫环境,利用叶绿素荧光仪测试两种珊瑚虫黄藻在不同浓度硫酸锌胁迫 下的叶绿素荧光参数.实验结果显示:(1)当珊瑚暴露在相对低浓度锌(105.6g/L)条件下,枝条较细的浪花鹿 角珊瑚的最大光化学产量(Fv/Fm)和最大电子传递速率(rETRmax)快速下降;较粗的花鹿角珊瑚前6天无明显反 应,但到第8天时其几,砌和rETRmax亦开始显着下降;(2)当珊瑚暴露在相对高浓度锌(599.4g/L)条件下 时,两种鹿角珊瑚颜色均快速变浅,第2天即大面积露出白色骨骼,Fv/Fm下降到0-3以下,不再对光强产生响 应,指示珊瑚已死亡.实验结果揭示了珊瑚虫黄藻光合作用对重金属胁迫的响应过程,表明锌污染对造礁珊瑚虫 黄藻光合能力有严重的抑制作用,从而影响到珊瑚生长,高浓度的锌使虫黄藻光合 作用快速衰减直至停止,导致 珊瑚短时间内死亡. 关键词:鹿角珊瑚;金属锌胁迫;叶绿素荧光;生理响应 中图分类号:X171.5文献标识码:A文章编号:1001—5221(2010)04—0357—06 金属锌对于大多数生物的生长健康有重要作 用.因为它是新陈代谢过程中多种酶如羧肽酶,碱 性磷酸酶,碳酸酐酶等和多种蛋白质的辅助因子. 锌等营养元素含量低,会限制珊瑚体内碳酸酐酶活 性,影响珊瑚从周围水体中吸收无机碳的能力,进而限制珊瑚共生虫黄藻光合作用速率及珊瑚骨骼的 钙化速率.但金属锌浓度超过一定量,就会产生 具有毒性的自由基,导致生物中毒,严重的能引起 珊瑚死亡.同时,金属锌还能影响珊瑚配子受精 的成功率.可见,金属锌与珊瑚健康生长紧密相 关.到目前为止,我国关于造礁珊瑚对金属胁迫响 应的研究几乎是空白,特别是在海洋环境污染日益 加剧的背景下,了解珊瑚对重金属锌的响应对于珊 瑚礁保护等具有重要科学和现实意义. 叶绿素荧光是指叶绿素分子吸收光量子后,由 受激发态通过再发射而产生的光信号.脉冲振幅 调制(Pulse—Amplitude—Modulation,PAM)I1f绿素荧光 仪原位测量叶绿素荧光参数的变化,已越来越多地 用于研究珊瑚虫黄藻的光合作用,如利用PAM观测 珊瑚虫黄藻光合作用的Et变化规律及珊瑚的白化机 制.研究发现珊瑚虫黄藻的非光化学淬灭是珊瑚 在遭遇高温高辐射白化条件时的重要保护机制删; 此外PAM也用于衡量各种因子如光照,重金属, 营养盐"叫等对珊瑚的影响. 本文通过实验室模拟重金属锌胁迫,利用叶绿 素荧光仪测量两种鹿角珊瑚共生虫黄藻在锌胁迫环 境下荧光参数的变化,从珊瑚虫黄藻叶绿素光合作 用这一全新的角度探讨珊瑚对锌胁迫的响应,期望 研究结果为珊瑚礁的保护与管理等提供理论依据. 1材料与方法 1.1珊瑚采集与水箱养殖 本实验研究在三亚中科院海南热带海洋生物实 验站"珊瑚礁环境监测一记录实验室"完成.鹿角 珊瑚科Acroporidae珊瑚是三亚鹿回头珊瑚群落的 优势科(33.53%)"".本实验采用花鹿角珊瑚 Acroporaflorida,浪花鹿角珊瑚Acroporaeytherea为 实验对象.珊瑚采回后将每种珊瑚分成大小近似的 3个小枝,分别放人3个珊瑚养殖箱驯养2周,珊 瑚生长情况基本稳定后开始实验.每个珊瑚养殖箱 尺寸为150×60×80(cm),水流6500L/h,控温为 26?,由金属卤素灯提供光源,光照时间统一为每 天12h.珊瑚养殖水直接抽取实验站外珊瑚礁区海 水.实验中将这3个珊瑚养殖箱为对照组,实 验组I和实验组?.在实验组I和实验组?加入不 同剂量的ZnSO?7H0,而对照组内不添加任何金 收稿13期:2009—12—28;修订日期:2010—05—24 基金项目:国家海洋局海洋公益性项目(200705026);国家自然科学基金项目 (40830852);国家重点基础研究发展973项目(2007CB815905) 作者简介:黄玲英(1984一),女,福建人,硕士研究生,主要研究珊瑚礁及其环境污染 记录,(E-mail)huangly@scsi0一ac一. 358热带地理3O卷 属元素,但与实验组保持相同的物理条件,养殖箱 内海水锌的背景质量浓度为19.3L.实验组I是 模拟三亚水体可能达到的锌污染环境下珊瑚的响 应;实验组?是模拟锌极端污染的条件下珊瑚的响 应.实验总历时为22d. 1.2珊瑚荧光参数的测量 珊瑚虫黄藻叶绿素荧光采用德国Walz公司生 产的超便携调制荧光仪(Mini—Pare)进行直接测量. (1)光系统?(photosystem?,PS?)的最大 光化学产量(Maximalphotochemicalyield,Fv/Fm) 将珊瑚样品经20min暗反应后测定几,涉 及局,和砌等3个参数.指初始荧光,是在 暗适应状态下,当PS?的所有反应中心处于完全开 放状态并且所有的非光化学过程处于最小时的荧光 产量;Fro(Maximalfluorescenceyield)指最大荧光, 是将饱和光照射到经过充分时问暗适应的样品的最 大荧光产量;指最大可变荧光(Maximalvariable fluorescence),Ft=Fm-Fo.砌值是开放的PS? 反应中心捕获光能的效率,是个稳定的研究植物胁 迫反应常用的参数.刀降低表示胁迫使Ps?受 到伤害,降低Ps?原初光能转换效率. 测量时将样品从养殖箱内取出放置在装有相应 养殖水的容器内,用尼龙黑布将容器遮住20min后, 将Mini—Pare光导纤维探头垂直距离珊瑚表面约3 mm,随机在不同珊瑚表面测量8次,仪器自动测量 初始荧光和最大荧光,并计算凡,砌,取8次测量 的平均结果. (2)快速光响应曲线(Rapidlightcurve,RLCs) 的测量 快速光响应曲线是一条相对光合电子传递速率 rETR随有效光合辐射PAR变化的曲线.其中相对 光合作用电子传递速率(relativeelectrontransport rate,rETR)的计算为:面7YieldxPAR×0.5× 0.84,Yield代表实际光化学产量;PAR代表入射 到样品的有效光合辐射,单位为molphotos/ms; 系数0.5是因为一个电子传递需要吸收2个量子, 而光合电子传递需要两个光系统的参与;0.84假定 入射光强吸收率为0.84.实验过程中,Mini—Pam可 自动记录测量数据,待测量完毕导入电脑处理.用 Mini—Pare仪器测量的快速光响应曲线,设置9个 PAR强度梯度,每个PAR持续时间为10s,由于测 量时间短,测量过程对光合状态影响小,基本反映 样品的自然光合状态.光响应曲线不仅能反映样品 当前的光合作用能力,且能反映样品在一定范围内 光照强度下光合作用的能力. 1.3珊瑚养殖水锌含量的测量 取3个养殖箱内水样各250mL,过滤后用硝酸 固定(pH<2),带回实验室用原子吸收光谱仪测定 重金属锌的含量. 1.4数据处理 实验所测得的初始荧光和最大荧光数据计算出 最大光化学产量,.相对光合作用电子传递速 率和有效光合辐射实验数据进行数值拟合,获得快 速光响应曲线,拟合方程为公式"(1): P=Pm×f1一e-(1×一(Pm)(1) rETRmax=尸(/【+】)(/【+】).(2) Jp为光合作用的速率,即相对电子传递速率 rETR. 经方程拟合后可得,,,其中Pm为潜 在的最大相对电子传递速率;为初始斜率;为 光抑制参数.通常光响应曲线包含3个不同区域: 光限制,光饱和,光抑制区域.在光限制区域,光 合速率随着光强的增大而提高,二者的关系可通过 初始斜率Ol来表示;之后继续增加光强,但光合作 用由于其自身电子传导链容量限制光合速率不再提 高,此时达到光饱和,可用最快电子传递速率 rETRmax表示【由公式(2)计算得出】.之后光强继 续增强但光合速率降低,二者关系可利用光抑制参 数表示. 2实验结果 2.1珊瑚对不同质量浓度Zn胁迫的反应 在整个实验过程中,对照组红褐色的花鹿角珊 瑚和绿色的浪花鹿角珊瑚生长状态一直良好,触手 伸出. 实验组I,水样测试锌质量浓度为105.6L. 在加入一定量的ZnS04?7H0,12h后浪花鹿角珊 瑚整体颜色明显变淡,周围因黏液大量分泌呈雾状; 24h颜色进一步变浅;48h浪花鹿角珊瑚的主干开 始呈斑驳状露出白色骨骼,末端也开始白化;第4 天白化严重;第7天几乎全部白化,肉眼判断该浪 花鹿角珊瑚死亡.同一组内花鹿角珊瑚的响应过程 为:1h内该珊瑚分泌大量黏液,之后黏液分泌逐渐 减少,珊瑚颜色变暗淡,第4天珊瑚局部出现肉体 组织和骨骼直接分离. 实验组?,为锌质量浓度较高(水样测试结果 锌浓度为599.5L)的环境,两种鹿角珊瑚均触 手紧缩,大量分泌黏液,水体出现浑浊;2天后整 4期黄玲英等:锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变化359 块珊瑚裸露出白色骨骼,判断其已死亡. 2-2不同质量浓度Zn作用下珊瑚虫黄藻叶绿素荧 光参数的变化 2.2.1光系统?fPs?)最大光化学产量2的变 化砌代表了叶绿体光系统?(Ps1/)的原初 光能转换效率,将珊瑚样品经20min暗反应后测定, 其时间变化规律如图1所示. 图l浪花鹿角和花鹿角珊瑚Fv/Fm在重金属锌胁迫的变化 Fig.1FvmofAcroporafloridaandAcroporacythereaunderthestressof di脓rentconcentrationofZinc 对照组:2种鹿角珊瑚的,在实验周期内 数值较稳定,波动于0.738,0.757之间. 实验组I:浪花鹿角珊瑚的砌初始值为 0.745,在低浓度硫酸锌胁迫12h后,砌下降到 0.728,24h后下降至0.677(降低了7%);第4天 降至0.481,降幅为35%;第6天砌降为0.11. 处于同一实验组内的花鹿角的变化幅度较 小,在前6天略微呈下降的趋势,第8天砌减 少到0.458,降幅为39%.此处刚砌的变化并未 完全与表观观察完全一致,其原因可能是此时表观 观察到的珊瑚白化时珊瑚并没有完全失去虫黄藻, 珊瑚仍能进行光合作用;第二是珊瑚白化不均匀, 测量时随机选取8个点测量取平均值,有可能选到 白化程度不那么明显的地方. 实验组?:在高浓度锌胁迫下,浪花鹿角珊瑚 和花鹿角珊瑚的几,,均迅速下降,未加硫酸锌前 两种珊瑚的均大于0.74,加入高浓度的硫酸 锌24h后,浪花鹿角珊瑚的下降为0.69,花 鹿角珊瑚的砌下降为0.692;说明2种珊瑚均 受到显着胁迫;第2天,两种鹿角珊瑚的急 剧下降至0.2附近(前者为0.256,后者为0.178), 表明珊瑚已基本死亡. 2.2.2珊瑚虫黄藻快速光响应曲线的变化 (1)浪花鹿角珊瑚在不同金属锌浓度下光响应曲 线的变化 对照组(zn19.3gg/L)浪花鹿角珊瑚的光响应曲 线(图2一a)显示,该珊瑚在整个实验过程中一直 比较稳定,共生虫黄藻的最大电子传递速率 刀ax平均值为37.06?1.05,初始斜率为0.22 ?0.013,即在光强继续增大,光合作用效率降低区 域,光抑制参数为0.01?0.005. 实验组I重金属锌浓度为105.6g/L,浪花鹿 角珊瑚受胁迫1d后,虫黄藻光合作用的最大电子 传递速率rETRmax(图2-b)由原来的35.42降低 到28.43,下降了19.7%,第2天下降40%,到第4 曼 暑 警 PAR/fItmolph~onsm.sa) PAR/(pmolphotonsm一s-1) 图2浪花鹿角珊瑚在不同质量浓度的锌胁迫下快速光响应 曲线的变化(a.对照组;b.实验组I;C.实验组?) Fig.2RLCsofAcroporafloridaunderthestressofdifferentconcen~ion ofZinc(a.control;b.105.6gg/L;c599.4) 热带地理30卷 天rETRmax降低至6.15,降幅为82.6%.此时珊瑚 对低强度光照有略微响应,随着光合有效辐射PAR 的增强,其电子传递速率几乎为零.第6天RLC曲 线几乎为一条直线,判断该浪花鹿角珊瑚已死亡. 实验组?重金属锌浓度上升至599.5gg/L,在 实验进行的第1天,其最大电子传递速率(图2一c) 由原来的44.21降到28.08,降幅为36.5%,第2天 该浪花鹿角珊瑚虫黄藻已不能对光做出适当响应, 其RLC接近水平.此时的最大光化学量子产量也降 为0.256.相比于实验组I浪花鹿角在第4天无法对 光强做出适当响应,而实验组?该珊瑚在第2天基 本死亡,说明重金属锌浓度越高对浪花鹿角珊瑚的 毒害作用越明显. (2)花鹿角珊瑚在不同金属锌浓度下光响应曲 线的变化 由图3-a对照组花鹿角的快速光响应曲线可以 看出该珊瑚比较稳定,其共生虫黄藻的最大电子传 递速率平均值为43.26?2.61,初始斜率为0.184? 0.021,光抑制参数为0.016?0.003. 实验组I(图3-b)花鹿角在重金属锌胁迫下 第2,4天虫黄藻光合最大电子传递速率rETRmax 降低,降幅为35.7%,第6天又有所升高,可能是 珊瑚虫黄藻受到扰动,但光合作用系统并未严重受 损,所以仍能进行光合作用.此时rETRmax比初始 值降低14.7%,第8天珊瑚局部出现组织脱落, rETRmax又显着下降,降幅为49.5%,说明该花鹿 角虫黄藻的光系统受到一定程度的破坏,光合作用 效率下降较为明显. 实验组?(图3-c)花鹿角珊瑚受到重金属锌 毒害作用显着,第1天最大电子传递速率rETRmax 降低35%,初始斜率Ot即对光的利用效率由0.215 降低到0.180,即在光限制区域,随着光强增大,电 子传递速率升高的速率变慢.而第2天花鹿角珊瑚 不能对光强做出响应,该珊瑚已死亡. 随着锌浓度升高,浪花鹿角珊瑚的rETRmax逐 渐降低(见图2o而花鹿角珊瑚在低浓度锌时最大 电子传导速率提高,光合效率上升,可能此时的锌 对珊瑚生长有促进作用,珊瑚光合效率提高.当锌 浓度升高到极端条件时,花鹿角珊瑚也失去耐受力 而表现为电子传导速率迅速降低(图3o 3讨论 重金属是海洋常见污染物之一,主要来源于陆 地工农业生产和生活污水以及港口和船舶的排放. e N 三 l 基 PAR/(Itm0lphotosmsa) PAR/molphotosm.s1) 图3花鹿角珊瑚在不同质量浓度的锌胁迫下快速光响应曲 线的变化(a.对照组;b.实验组I;c.实验组?) Fig.3RLCsofAcroporafloridaunderthestressofdifferentconcentration ofZinc(a.control;b.105.6gg/L;c.599.4g/L) 此外,风化侵蚀也会使陆地富集的重金属随河流流 人海洋.1999年的调查发现,三亚湾河口表层水 zn的质量浓度为19.94~g/L[",笔者于2009年调查 发现,三亚河口表层水中zn浓度达35.8,58.7L. 有研究显示三亚湾珊瑚骨骼重金属含量近30年来 呈显着上升趋势".珊瑚骨骼重金属来源于海水中 重金属的富集,表明三亚湾海水锌的含量呈不断增 加的趋势.海水金属含量的不断增加势必对珊瑚生 长造成威胁. 4期黄玲英等:锌胁迫下两种鹿角珊瑚虫黄藻荧光值的变化361 高等植物和藻类叶绿体的Ps?是对环境胁迫 较为敏感的部位.一般认为环境胁迫的第一个作用 位点就是Ps?复合体和Ps?的反应中心如重金 属能够通过影响集光复合体,水氧化复合体(oxygen evolutioncomplex),细胞色素复合体,质体琨(主 要负责光合电子传递),铁氧化还原蛋白,NADP 等物质,进而能降低光合效率,下降. 实验中两种鹿角珊瑚暴露在锌胁迫的环境中, 随着暴露时间和胁迫浓度的提高珊瑚释放出大量黏 液,而珊瑚黏液释放被认为是珊瑚的一种应激保护 机制,能够阻止部分金属进入珊瑚体内.已知 的珊瑚黏液释放,有过滤防污染,低潮时防干燥, 防沉积物覆盖等功能u.但珊瑚长时间释放黏液 会消耗大量能量,甚至超过珊瑚新陈代谢能力,对 珊瑚健康不利". 与对照组,砌较稳定相对应的是两种鹿角珊 瑚在光适应后测得的RLCs最大电子传递速率 rETRmax也较稳定,对照组浪花鹿角珊瑚的 rETt~ax为37.06?1.05,花鹿角的ax为43.26? 2.61,与鹿角珊瑚Aeroporanol_uTis表面光合作用能 力的结果相似[221o而在实验组I加入一定量的硫酸 锌(Zn,105.6~tg/L)后,粗枝的浪花鹿角珊瑚的荧 光参数下降比花鹿角的快,下降幅度也较大.说明 在相对低浓度时粗枝条的花鹿角比细枝条的浪花鹿 角珊瑚对锌的耐受性强,因为第6天浪花鹿角已不 能对光作出响应,基本死亡.但花鹿角的各参数与 之前比较无明显变化,到第8天时才有较明显的下 降.这也说明即使耐受性较好的花鹿角珊瑚,当胁 迫时间超过一定限度时,珊瑚最终也会造成组织脱 落直至裸露出白色骨骼死亡. 珊瑚对胁迫因子的耐受性可能与虫黄藻的密度 有关.不同珊瑚属种之间共生虫黄藻密度差异明显, 即使同一珊瑚属的不同种密度也不同.而珊瑚虫 黄藻的金属含量高于珊瑚组织和骨骼,适量排出虫 黄藻能够减少金属对活体组织的毒害作用,对于金 属的调节有重要作用.如海葵Anemom'aviridis是珊 瑚的近亲,在低金属铜浓度下海葵释放出虫黄藻从 而降低珊瑚体内金属含量,减少金属对肉体组织的 毒害作用,同时释放黏液,触手紧收,减少重金属 进入到珊瑚组织.但随着铜质量浓度提高,虫黄 藻因大量释放而密度降低,同时不再分泌黏液,最 终海葵死亡.此外,不同形态的珊瑚对温度胁迫的 响应不同,同一种形态,不同珊瑚个体的耐受性也 不完全相同.实验中两种鹿角珊瑚对相同胁迫环 境的不同响应可能也与二者的形态有关. 实验组?(Zn,599.4~tg/L),两种鹿角珊瑚触 手紧缩,分泌大量黏液,颜色很快变淡并在2天内 骨骼大量裸露而死亡.金属质量浓度提高会抑制生 物体内酶的潘l生,如金属的毒性会导致生物体内超 氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)活性降 低,此时机体内活性氧含量偏高而攻击生物大分子, 引发生物膜中的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化,对 细胞核机体产生毒害作用口. 本实验仅是利用叶绿素荧光仪研究珊瑚虫黄藻 对金属胁迫响应的一个初步结果,未来仍有许多工 作要深入开展,如比较不同金属对多种珊瑚的胁迫, 寻找导致珊瑚虫黄藻光合作用能力下降的重金属临 界浓度,并进一步研究金属对造礁石珊瑚产生胁迫 的机理等. 参考文献: [1]Ferrier-PagesC,HoulbrequeF,WyseE,eta1Bioaccumulationofzinc inthescleractiniancoralStylophorapistillata[J].Coralreefs,2005,24: 636—645. 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HeavyMetalZincStressonthePhotosynthesisofZooxanthellaeofTwoAeroporaCorals HUANGLingying'_,YUKefu,SHIQi,ZHAOMeixia,CHENTianran,YANHongqiang (1.KeyLaboratoryofMarginalSeaGeology,SouthChinaSeaInstituteofOceanology,CAS,Guangzhou510301,China 2.TropicalMarineBiologicalResearchStationinHainan,CAS,Sanya572000.China) Abstract:Chlorophyllfluorescenceparametersofzooxanthellaeofcora1AcorporafloridaandA.cytherea growingatindoortankenvironmentweremeasuredbyusingPAMfluorometrytoinvestigatetheirresponseto heavymetalZinc(Zn)stress.Bothcoralsarebranchspecies,butthebranchesofA.cythereaarethinnerthanthose ofA.florida.Inthisexperimentalstudy,theyweresubjectedtoZnconcentrationatlevelsof105.6gg/Land 599.4~tg/L,respectively,andtheresultsshowthat:(1)Whenthetwospeciesofcoralswereexposedtorelative lowerZnconcentration(105.6/ag/L)environment,thethin— branchcoralA.cythereaquicklyshowedobviously stressedsignals,withitsFv/FmandrETRmaxdecreasingrapidly;whilethesimilarrapiddeclineofthe fuorescenceparametersofthethick— branchcoralA.floridastartedfromtheseventhdayandtheyshowedonly sli曲 tlydeclinewithinthefirst6days.(2)WhenthetwospeciesofcoralswereexposedinhigherlevelofZn (599.4~tg/L)environment,bothcoralsdiscoloredsoonandmostpartoftheirsurfaceshowedwhiteskeleton (bleached)inthesecondday.Theynolongerhadanyresponsetolight,andtheirFv/Fmdroppedtobelow0.3, whichmeanscoralsweredead.ThisexperimentstudyindicatesthatheavymetalZincpollutionhasobviousstress onthephotosynthesisofcoralsymbioticalgaebyloweringtheirefficiencyofphotosynthesisofPSIIandeven killingthecorals. Keywords:Reefcoral;Zincpollution;Chlorophyllfluorescence;Physiologicalresponse
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