RP-HPLC法同时测定人血清咪哒唑仑、阿普唑仑与氯硝安定药物浓度

RP-HPLC法同时测定人血清咪哒唑仑、阿普唑仑与氯硝安定药物浓度 RP-HPLC法同时测定人血清咪哒唑仑、阿 普唑仑与氯硝安定药物浓度 医学临床研究2010年4月第27卷第4期JClinRes,Apr.2010,Vol27,No4?653? ? 论着? RP—HPLC法同时测定人血清咪哒唑仑,阿普唑仑与氯硝 安定药物浓度 吴学军 (湖南省脑科医院药剂科,湖南长沙410015) [摘要]【目的】建立一高效液相色谱法同时测定人血清中咪哒唑仑(MZ),阿普唑仑(AZ),氯硝安定(CZ) 药物浓度,为临床用药及治疗提供依据.【方法】采用反相高效液相色谱法,色谱柱为依利特KromasilC18柱 (250mm×4.6mm,5ptm);柱温4O?;流动相为甲醇一水(65:35,v/v),流速1.0mL/min;波长220nm. 血液样品采用1O高氯酸沉淀蛋白后,直接进样2OL,测定,采用内标法定量【结果】.MDZ,AZ,CZ在 0.025,10.00/~g/mL浓度范围内线性关系好,相关系数分别为r一0.9994,0.9993,0.9991,最低检测限均为 5.0ng/mL,三种物质的平均方法回收率均大于92.0,相对标准偏差(RSD)<4.1.【结论】本法测定MZ, AZ,CZ的血药浓度方法简便,快速准确,可用于临床的常规监测. [关键词]咪达唑仑/分析;阿普唑仑/分析;氯硝西泮/分析;色谱法,高压液相 SimultaneousMeasurementofHumanSerumConcentrationofMidazolam,Alprazolaman d ClonazepamwithRP—HPLCXue—Jun(DepartmentofPharmacy,HunanProvincialBrain Hospital,Changsha410015,China) [Abstract][Objective]Todevelopareversephasehighperformanceliquidchromatography(RPHPLC) forsimultaneousdeterminationofhumanserumconcentrationofmidazolam(MZ).alprazolam(AZ)andclonaz— epam(CZ)andmonitortheuseageofthesecompounds. 【Methods]KromasilC18columnwasusedandthecol umntemperaturewas40?.Themobilephasewasmethanol/water(65:35,V/V).Theflowratewas1.0 mL/min.Thedetectionwavelengthwas220nm.Twenty/*Isamplewasinjectedaftertheplasmaproteinwas precipitatedwithl0perchloricacid.Internalstandardwasusedforquantitation.[Results]Thelinearrela— tionofMZ,AZandCZwasintherangeof0.025, lO.00/*g/mI.TheminimumdetectionlimitofMZ,AZ andCZwas5.0ng/mL.Theaveragecoefficientofrecoveryofthreedrugswasmorethan92.0%andtherela— tivestandarddeviation(RSD)waslessthan4.1.[Conclusion]RP— HPLCmethodisarapid,accurateand simpleassaytOmeasureMZ,AZandCZconcentrationinhumanserumanditcanbeappliedroutinelytOmoni— torthe. concentrationofthesethreedrugs. [Keywords]midazolam/AN;alprazolam/AN;clonazepam/AN;chromatography,highpressureliquid [中图分类号]R971.4[文献标识码]A[文章编号]167卜7l71(2010)04065303 咪哒唑仑(Midazolam,MZ)阿普唑仑(A1 prazolam,AZ)和氯硝安定(Clonazepam,CZ)为临床 常见的镇静催眠药物.患者常因超量,误服而造成 急性中毒,因而在抢救的同时,快速准确的鉴定和检 测中毒药物已成为临床重要的手段口].本文拟建 立一RP—HPIC方法同时分析人血清中MZ,AZ和 CZ浓度,为临床药物监测提供灵敏,快速,可靠的检 测方法. 1仪器与试剂' 1.1仪器Agilent1100系列高效液相色谱仪:包 括一组四元泵,在线脱气装置,二极管阵列(DAD)检 测器,Agilent1100化学工作站.Eppendorf高速离 心机(德国Eppendorf公司),MaxiMixII漩涡混合 器(美国,BarnsteadThermolyne). 1.2试剂MZ(批号:171250—200401),AZ(批号: 171218—200603),CZ(批号:l71227-20O3O2)和苯巴 比妥(Phenobarhital,PB,批号:171222—200504)由中 国药品生物制品检定所提供,甲醇,乙腈为色谱纯, 购于Sigma公司,水为本院自制二重蒸馏水. 1.3对照品溶液的配制分别精密称取MZ,AZ, CZ和PB对照品适量,置于100mL容量瓶,用甲醇 稀释配成浓度分别为100.0/~g/mL,100.0/~g/mL ,100.0/~g/mL,96.0/~g/mL的溶液,于4?冰箱中 医学』临床研究2o1O年4月第27卷第4期JClinRes,Apt.2010,Vol27,No4 保存.使用时用甲醇稀释至所需浓度. 2方法与结果 2.1血样处理取血清0.5mL于1.5mLEP管 中,加入内标PB溶液30L,加10高氯酸100 /*L,漩涡震荡30S,12000r/rain离心lomin,取上 清液20/*L进样. (250 2.2色谱条件及色谱行为KromasilC18柱 mm×4.6mm,5m);流动相比例:甲醇:水一 (65:35,v/v),经0.45/*m微孔滤膜过滤;流速 1.0mL/min;检测波长:220nm;柱温40?,灵敏度 0.05AUFS. 取健康人空白血清3mI_,分成四份,一份作为 空白对照,另外三份分别加入MZ,AZ,CZ标准工 作溶液,配成体积为0.5mL,浓度分别为0.5,0.5, 0.5/~g/mL溶液,再将上述三种物质与内标溶液混 合配制成浓度分别为0.5,0.5,0.5,0.5/*g/mL的 "2.1"项下操作得空白血清加对照 混合血清溶液,按 品色谱图(图1)及空白血清加四种对照品溶液色谱 图(图2),在上述色谱条件下,血清内源性物质不影 响各目标物的分离测定,各物质峰形对称,分离良 好,保留时间分别为CZ5.4rain,MZ6.3min,AZ 7.2min,内标苯巴比妥的保留时间为12.4min. 2.3标准曲线的制备取上述各药物标准溶液加 入空白血清,精密配成CZ0.025,0.10,0.50, 1.00,2.50,5.00,10.00/*g/mE,,MZ0.025,0.10, 0.50,1.00,2.50,5.00,10.00/*g/mI,AZ0.025, 0.10,0.50,1.00,2.50,5.00,10.00/*g/mL的系 列标准溶液,按样本处理及色谱条件测定.以内标 法定量,作标准曲线.得回归方程,见表1. A ……….一…………;……一一…F………'i………一一一'i B 图1各物质标准溶液色谱图(A:CZ5.4minB:MZ6.3minC AZ7.2minD:PB12.4min)一 ^4't… 图2各物质血清色谱图(A:CZ5.4minB:MZ6.3minC:AZ7 2minD:PB12.4min) 表1各药物的直线方程 2.4方法回收率和精密度取药物标准溶液加入 空白血清配制成高,中,低三种浓度的溶液,分别作 相对回收率和精密度测定,结果方法回收率大于 92,相对标准偏差(RSD)<4.1(见表2). 表2各药物不同浓度时回收率与精密度("一5) CZ0.025 1.000 10.O0 MZ0.025 1.000 10.OO AZ0.O25 1.000 1O.OO 2.5临床样品测定1例患者在服用未知药物后 昏迷,经测定为CZ中毒,血药浓度为4.95/*g/mL; 1例患者在服用未知药物自杀后约1h送本院治 疗,立即洗胃,测得为MZ中毒,血药浓度为5.13 n二_-I 一 九-)=I=_ B, . A ^ , 医学临床研究2010年4月第27卷第4期Jc1inRes,Apr.2010,Vol27,No4 /,g/mL;另有1例患者昏迷时采血经本方法测定为 CZ中毒,浓度为4.10/~g/mI. 3讨论 3.1有文献.报道了气一质联用测定血液中CZ, AZ和MZ,此法虽然准确,快速,灵敏度高,但很多 医院没有条件配置气相色谱一质谱仪.因此不太具 有普遍性.现在很多医院都配置了HPLC仪,因此 本法在具有较高准确性,快速分析样品的基础上,具 有更好的普遍性. 3.2在样品处理过程中,有文献"报道用SPE 法提取血清中的目标化合物,此方法提取的样品具 有干扰物少等优点,但此方法的成本相对较高,对常 规的血药浓度监测不适合.本方法采用l0高氯 酸直接沉淀血清中蛋白,具有处理样品快,成本低, 杂质少等优点,适合于快速,准确分析.也有文献报 道了用萘作内标物,虽然方法准确,可靠,干扰少,但 萘的毒性Nx,/较大,对操作人员的身体健康有一定 危害. [参考文献] [1]滑艳,周爱华.高效液相色谱法同时测定血液中安定,舒乐安 定和氯硝安定的浓度r门.临床检验学杂志,2000,18(4):223 E23 [3] E4] E5] [6] [7] [8] [9] [1o] [11] ? 655? 224. 李焕德,许树梧,朱运贵,等.急性中毒毒物检测与诊疗[M]. 湖南:湖南科技出版社,2000:300. 刘有才,李军利,刘鹏.咪哒唑仑在小儿硬膜外腔阻滞麻醉中 的应用EJ3.新乡医院,2002,19(4):297298. 郭胜才,邹晓华,张玉荣,等.高效液相色谱法同时测定血浆中 艾司唑仑,三唑仑和阿普唑仑浓度[J].中国医院药学杂志, 2003.23(10):599601. 雷艳青,李新中.反相高效液相色谱法检测药物依赖患者血清 中氯硝安定EJ3.中南药学,2005,3(6):358—359. 毛名扬,李顺炜.RPHP1C法同时测定人血浆中5种镇静催 眠药物浓度EJ3.安徽医药,2004,8(4):282—283. 张郁葱,张毕奎,程泽能,等.高效液相色谱电喷雾质谱法同 时测定人血浆中咖啡因,咪哒唑仑和代谢产物及其在药物代 谢研究中的应用EJ].药物分析,2004,24(1):63—67. GuanF,SenoH,IshiiA,eta1.Solidphaseinicroextraction andGCECDofbenz0phen0nesforbenzodlazepinesinurine EJ3.JAnalToxicol,1999,23(1):5461. 谢秀红,李勇勤.气相色谱质谱联用法测定血液中艾司唑仑, 阿普唑仑和三唑仑EJ3.华南预防医学,2006,32(5):51-53. 邢若葵,温锦峰,王松才,等.自动固相萃取法(SPE)提取常见 安眠镇静药EJ3.刑事技术,2003,3:12—15.. 董伟林,洪燕敏,井连平,等.固相萃取及高效液相色谱法测定 血液中三唑仑的浓度EJ3.药物分析杂志,1998(18):276278. (本文编辑:詹道友)[收稿日期]2010-01-08 (上接652贝) 防根尖牙周的继发感染.?折裂时间不宜太长 (?1周).?牙齿制备完成后,印模制作全冠,在戴 全冠之前给制备好的牙做暂时冠修复,同时调整咬 殆,减少咬殆力. 3.3磨牙发生正中折裂治疗影响因素分析患牙 折裂后治疗时间与治疗效果有重要的相关性,就诊 越及时,对牙周及根尖组织的损伤越小,患牙治疗效 果越满意.主要是因为牙齿折裂后因进食食物易进 入裂隙,易引起牙周,髓底牙周组织的感染,同时牙 折片的移动对牙周组织的刺激,引起炎症反应.时 问太长有牙龈组织增生,并进入牙裂隙内,会影响裂 隙的复位关闭.本组l0例折裂1个后月进行治 疗的,仅有2例治疗成功.而患牙位置,颌位,折裂 方向及有无根管治疗与成功率无明显相关. 综上所述,磨牙正中的折裂保守治疗要严格掌 握适应证和良好的复位固定,把握治疗时机,根管治 疗后再用全冠进行修复,大多数牙可以保存并行使 咀嚼功能. [参考文献] 马明东.44例折裂牙保存治疗疗效分析[J].牙体牙髓牙周病 学杂志,2005,l5(8):459. 周磊,符大勇,孙德刚.带环固定后牙折裂的疗效观察EJ].广西 医学,2007,3(3):361—362. 梁洁,董毅,杨小练."日"字形全冠修复完全纵裂磨牙的疗效分 析EJ].广东牙病防治,2008(3):134135. 朱建中.55例磨牙纵裂的保存治疗及分析[J].临床口腔医学 杂志,2005,21(1):52—55. 卢国泽.磨牙折裂的金属烤瓷牙全冠修复EJ].广西医学,2003, 25(8):l362—1363. 刘侠,王文梅,魏文佳,等.纵折磨牙的保存修复[J].口腔颌 面修复学杂志,2007,8(1):3133. PohlY,FilippiA,KirschnerH.Resultsafterreplantationof avulsedpermanentteeth.1I.Periodontalhealingandtherole ofphysiologicstorageandantiresorptive—regenerativetherapy EJ].DentTraumatol,2005,21(2):93—101. 黄伟安,郭冰后.牙纵折的临床研究_J].中山大学(医学科 学版),2005,26(3S):185—186. (本文编辑:王沪湘)[收稿日期]2010—01-08 ??嘲嘲