AVP-5060-01-1.0己酸羟孕酮残留溶剂方法验证方案

AVP-5060-01-1.0己酸羟孕酮残留溶剂验证 No: AVP-5060-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析2011.04.17 QC Dept Effective date: 方法验证方案 1 of 25 Page: 己酸羟孕酮残留溶剂分析方法验证方案 姓名Name 职务Title 签名Signature 日期Date 起草Prepared by QC QC 经理/ 主管 审核Checked by QC Manager / Derector QA经理 审核Checked by QA Manager QU总监 批准Approved by QU Derector QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 2 of 25 Page: 目 录 1. 目的 ............................................................................................................................ 3 2. 范围 ............................................................................................................................ 3 3. 验证人员及职责 ......................................................................................................... 4 3. 验证小组及培训 ......................................................................................................... 4 4. 仪器和试剂 ................................................................................................................. 4 6. 试验方法及依据 ......................................................................................................... 5 7. 验证项目与接受标准.................................................................................................. 7 8. 验证内容 8.1. 专属性 ................................................................................................................... 8 8.2. 系统适应性 ........................................................................................................... 9 8.3. 检测限及定量限 ................................................................................................... 9 8.4. 线性和范围 ......................................................................................................... 10 8.5. 准确度 ................................................................................................................. 11 8.6. 精密度 ................................................................................................................. 13 8.7. 溶液稳定性 ......................................................................................................... 14 8.8. 耐用性 ................................................................................................................. 14 8.9. 样品检测 ............................................................................................................. 14 9. 验证评论及结论....................................................................................................... 15 10. 偏差控制 ................................................................................................................... 15 11. 变更控制 ................................................................................................................... 15 12. 验证结论及批准 ....................................................................................................... 15 2 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 3 of 25 Page: 己酸羟孕酮残留溶剂分析方法验证方案 1、 目的: 通过对己酸羟孕酮中残留溶剂甲醇，乙醇，二氯甲烷，吡啶分析方法的验证，进一步确认此分析方法的适用性、确保分析结果可靠，准确。能够更好地控制产品质量。 2、 范围: 本方法适用于本公司生产的己酸羟孕酮残留溶剂甲醇，乙醇， 二氯甲烷，吡啶的检测。 3、 验证人员及职责 3.1验证小组组长: 部门 姓名 职务/职称 QU 蔡忠祥 质量总监 3.2证小组成员: 部门 姓名 职务/职称 QA QA 浦娴 QC 李学昌 QC经理 QC 徐冠华 化验员 3.3验证人员职责 3 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 4 of 25 Page: 3.3.1组长职责:验证工作的总体推进，验证方案、验证的批准，对验证过程中出现的问题进行控制与追踪，对产生偏差的批准与处理。 3.3.2组员:负责验证计划的编制，负责验证方案、验证报告的起 草、审核，其他验证文件的准备，参与验证人员的安排，培训， 验证的执行，对结果的确认，产生偏差的调查及采取的相关措施 等。 4、 验证小组及培训 4.1 验证小组 小组成员 部门 职位 主要职责 徐冠华 QC 化验员 验证方案起草，完成验证及报告 李学昌 QC QC经理 验证方案培训，方案，记录及报告 审核。 浦娴 QA QA 验证方案，报告审核 蔡钟祥 QU 质量总监 验证方案及报告的批准 4.2 培训 验证前由方案编写者对所有参与验证的人员培训本验证方案相 关内容，所有参与验证人员由该验证项目负责人进行培训，培 训检查记录应附在最终的验证方案中。 相关文件培训 文件 编号 培训人 己酸羟孕酮残留溶剂分析方法验证AVP-5260-01-所有参与验证人方案 1.0 员 4 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 5 of 25 Page: 分析方法验证管理规程 TF/2-0021-1.0 所有参与验证人 员 5、检验所需设备、仪器、试剂及规格要求 5.1设备、仪器及器材 仪器名称: 检测器: 检验设备、仪器必须经确认并校验合格并且在有效期内。 5.2试剂: 试剂参数见1 表 1 试剂参数表 限度标 溶剂名称 类别 批号 生产厂家 准, 0.3 无水甲醇 2类 0.5 无水乙醇 3类 0.5 二氯甲烷 2类 0.02 吡啶 2类 N、N-二甲 --- 溶剂 基甲酰胺 5 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 6 of 25 Page: 5.3样品 样品批号: 6、试验方法及依据 6.1试验依据 照中国药典2010年版附录 ? P残留溶剂测定法; ICHQ2A ICHQ2B ICHQ3 USP30 (1225) 6.2色谱条件 分离检测系统 色谱柱:DB-624，30m×0.530mm×3.00µm 温度:40?保持5min,以25?/min升温到200?，保持5min。 检测器类型:FID 检测器温度:250? 进样口温度:200? 载气:氮气 燃烧气:氢气 助燃气:空气 载气流速:5ml/min 分流比:1:1 进样系统: 顶空瓶温度:80? 定量环温度:90? 传输线温度:100? 平衡时间:30 min 加压时间:0.5 min 6 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 7 of 25 Page: 进样时间:1 min 进样体积:1ml 6.3溶液配制 6.3.1空白溶液 取2ml DMF于20ml顶空瓶中即得。 6.3.2对照品溶液的制备 分别精密称取溶剂对照品适量，用DMF定量稀释成每1ml含甲醇300 µg、乙醇500µg、二氯甲烷60µg、吡啶20µg的溶液，作为对照品溶液。 6.3.3样品溶液 取本品约1g，精密称定，置10ml量瓶中，加DMF使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 6.3.4测定法 精密量取空白溶液、供试品溶液及对照品溶液各2ml，分别置顶空瓶中，按程序进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中各残留溶剂的含量。 6.3.5限度要求 甲醇不得过0.3,、乙醇不得过0.5,、二氯甲烷不得过0.06,、吡啶不得过0.02%。 6.3.6程序 进样程序如下: 空白溶液 1针 对照溶液 5针 样品溶液1 1针 样品溶液2 1针 对照溶液 1针 6.3.7计算 7 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 8 of 25 Page: 按照下面公式计算 w=A/A×C SRR 式中:w—样品中各溶剂含量，ppm A—样品溶液中各溶剂峰面积; S A—对照溶液中各溶剂5针峰面积平均值; R C—对照溶液中相当样品中各溶剂含量。ppm R 7、方法验证的项目和可接受标准 表2 验证项目及可接受标准表 验证项目 可接受标准 1.溶剂(DMF)进样2针，确定对检测没有干扰; 专属性 2.各溶剂峰之间分离度不得小于1.5; 3(加标混合溶液各峰保留时间及峰面积正常。 系统适用性 峰面积重复性:对照溶液中己酸羟孕酮各残留溶剂峰 面积标准偏差不得超过10.0%。 检测限 各溶剂峰信噪比约为2:1或3:1 各溶剂峰信噪比约10时的浓度;在此浓度下，各溶定量限 剂峰面积(n=5)的相对标准偏差RSD?10.0%。 在线性范围内，要求各溶剂浓度与峰面积成线性关线性 系，R?0.99。 范围 定量限%?限度的150% 回收率试验，(三个水平/3份) 分别在5%，100%,200%准确度 处。三个浓度水平回收率在90%,110%范围内。 同一个样品，取6份样品配制样品溶液，并检测。6重复性 次残留量RSD?10.0% 精密不同分析人员不同时间在同一分析仪器上重复上述度 中间精密操作，6次残留量?10.0%，与另一分析人员所测6份度 数据进行比较,所得12个残留量RSD?10.0%。 溶液稳定性 放置0、2、4、6、8、12、24、小时检溶液稳定性 测 各溶剂峰面积RSD?10.0% 色谱条件 改变顶空平衡温度、流速、初始柱温、检耐用性 测器温度、进样口温度 样品测定 样品中各溶剂含量小于限度要求 8 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 9 of 25 Page: 8、验证内容 8.1 专属性 8.1.1 空白溶液 8.1.1.1 溶液配制 即溶剂HPLC级的DMF。吸取2ml于顶空瓶中，置于顶空进样器中。 8.1.1.2 程序 进空白溶液2针，按本方法测试，记录色谱图， 8.1.1.3 接收标准 空白溶液无干扰，无异常峰 8.1.2 相关溶剂定位 8.1.2.1 溶液配制 精密量取甲醇、乙醇、二氯甲烷、吡啶单一对照储备液各 1mL，分别置10mL量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀， 作为单一对照品溶液。 8.1.2.2 程序 取以上五种溶剂的单一对照品溶液各2针，按本方法测试，记录色谱图。 8.1.2.3 接收标准 以DMF为溶剂时，各溶剂都能正常出峰，与DMF能分离，结果见表3， 相关溶剂定位结果表。 表3 相关溶剂定位结果表 溶剂名称 甲醇 乙醇 二氯甲吡啶 DMF 烷 1 保留时间 (min) 2 8.1.3 混合溶液 8.1.3.1 溶液配制 分别精密量取甲醇、乙醇、二氯甲烷、吡啶对照品储备液各 5ml，置同一50ml量瓶中，加DMF溶解，稀释至刻度，摇 9 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 10 of 25 Page: 匀，作为对照品混合溶液。 8.1.3.2 程序 进混合溶液2针，按本方法测试，记录色谱图。 8.1.3.3 接收标准 各溶剂分离度不得小于1.5。试验结果见表4各溶剂混合定位表。 表4 各溶剂混合定位表 保留时间(min) 各分离度(?1.5) 序号 溶剂名称 1 2 1 2 1 甲醇 2 乙醇 3 二氯甲烷 5 吡啶 8.1.4 加标溶液 8.1.4.1 溶液配制 样品溶液: 加标溶液: 8.1.4.2 程序 分别进空白溶液，样品溶液，加标溶液各一针 8.1.4.3 接收标准 加标后各溶剂均能正常出峰，保留时间及峰面积正常。试验 结果见表5各溶剂加标定位表。 表5 各溶剂加标定位表 溶剂名称 甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶 DMF 保留时间 (min) 8.2 系统适用性试验 8.2.1 溶液配制 对照溶液配制见6.2.2 8.2.2 程序 10 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 11 of 25 Page: 连续进对照溶液5针，记录色谱图。 8.2.3 接收标准 重复性进样各溶剂峰面积RSD%(n=5)不得超过10.0%，试验结 果见表6系统适用性试验结果表。 表6 系统适用性试验结果表 峰面积 RSD% 溶剂名 1 2 3 4 5 ?平均 称 10.0% 值 甲醇 乙醇 二氯甲 烷 吡啶 8.3 检测限和定量限 8.3.1 检测限 8.3.1.1 溶液配制 11 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 12 of 25 Page: 将对照溶液逐步稀释成各浓度溶液。 8.3.1.2 程序 将各浓度稀释溶液各进样一针，记录色谱图，并计算出各溶剂 的信噪比。 8.3.1.3 接受标准 各溶剂信噪比约为2,3时为检测限。 8.3.2 定量限 8.3.2.1 溶液配制 将对照溶液逐步稀释成各浓度溶液。 8.3.2.2 程序 将各浓度稀释溶液各进样一针，记录色谱图，并计算出各溶剂 的信噪比。 8.3.2.3 接受标准 各溶剂信噪比约为10时为定量限。 试验结果见表7各溶剂检测限、定量限试验结果表。 表7 各溶剂检测限、定量限试验结果表 检测限 定量限 溶剂名称 mg/ml % mg/ml % 甲醇 12 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 13 of 25 Page: 乙醇 二氯甲烷 吡啶 8.4 线性和范围 8.4.1 溶液配制 储备液的配制: 分别精密甲醇，乙醇，二氯甲烷，吡啶各0.75g, 1.25g, 0.15g, 0.050g于50ml容量瓶中，作为储备液。 线性溶液配制: 线性溶液(L1):取储备液20ml于100ml容量瓶中，用DMF稀释至刻度。 线性溶液(L2):取储备液10ml于100ml容量瓶中，用DMF稀释至刻度。 线性溶液(L3):取储备液5ml于100ml容量瓶中，用DMF稀释至刻度。 线性溶液(L4):取储备液2ml于100ml容量瓶中，用DMF稀释至刻度。 线性溶液(L5):取储备液1ml于100ml容量瓶中，用DMF稀释至刻度。 线性溶液(L6):取储备液0.5ml于100ml容量瓶中，用DMF稀释至刻度。 线性溶液各浓度如下表 表8 线性溶液浓度表 L1 L2 L3 L4 L5 L6 溶剂 13 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 14 of 25 Page: (μg/mL) (μg/mL) (μg/mL) (μg/mL) (μg/mL) (μg/mL) 甲醇 3000 1500 750 300 150 75 125 乙醇 5000 2500 1250 500 250 二氯甲15 600 300 150 60 30 烷 5 吡啶 200 100 50 20 10 表9 甲醇线性试验结果表 75 浓度 3000 1500 750 300 150 ug/ml 峰面积1 峰面积2 平均峰面 积 相关系数 r 线性方程 表10 乙醇线性试验结果表 125 浓度 5000 2500 1250 500 250 ug/ml 峰面积1 14 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 15 of 25 Page: 峰面积2 平均峰面 积 相关系数 r 线性方程 表11 二氯甲烷线性试验结果表 15 浓度 600 300 150 60 30 ug/ml 峰面积1 峰面积2 平均峰面 积 相关系数 r 线性方程 表12 吡啶线性试验结果表 5 浓度200 100 50 20 10 15 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 16 of 25 Page: ug/ml 峰面积1 峰面积2 平均峰面 积 相关系数 r 线性方程 8.4.2 程序 取对照品溶液2ml与顶空瓶中进行系统适用性试验，连续进5 针，其他线性溶液L1,L6各2ml于顶空瓶中各进2针。记录色 谱图，以线性溶液浓度作为纵坐标，各溶剂峰面积作为横坐标 做曲线，进行线性回归，并求回归方程，计算相关系数。 8.4.3 接收标准 相关系数r不得低于0.99。 8.5 准确度(回收率) 8.5.1 溶液配制 空白溶液:见6.3.1。 对照溶液:见6.3.2。 样品溶液:取一批己酸羟孕酮样品1.0g于20ml顶空瓶中，加 16 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 17 of 25 Page: DMF2ml溶解。 加标溶液: 100%水平的加标溶液:准确称量同一批次的己酸羟孕酮1.0g 于20ml顶空瓶中，用8.4.1中线性溶液L2溶解并稀释至2ml。 平行配制3份。 5%水平的加标溶液:准确称量同一批次的己酸羟孕酮1.0g 于 20ml顶空瓶中，用8.4.1中线性溶液L6溶解并稀释至2ml。平 行配制3份。 200%水平的加标溶液:准确称量同一批次的己酸羟孕酮1.0g 于20ml顶空瓶中，用8.4.1中线性溶液L1溶解并稀释至2ml。 平行配制3份。 8.5.2 程序 按照本方法，检测一批样品及9批次的加标样品中各溶剂残留。 并计算各个浓度水平的回收率。 8.5.3 接收标准 回收率在90.0%,110.0%。 表13 回收率试验结果表 溶剂名称 甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶 5% 加入量 100% (mg) 200% 17 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 18 of 25 Page: 5%-1 5%-2 5%-3 100%-1 测得值 100%-2 (mg) 100%-3 200%-1 200%-2 200%-3 5%-1 5%-2 5%-3 100%-1 回收率 100%-2 (%) 100%-3 200%-1 200%-2 200%-3 平均回收率(%) 回收率RSD, 18 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 19 of 25 Page: 8.6 精密度 8.6.1 重复性 8.6.1.1 溶液配制 空白溶液:见6.3.1。 对照溶液:见6.3.2。 样品溶液:见6.3.3，配制6份样品溶液 8.6.1.2 程序 按照本分析方法检测6份样品各溶剂残留，记录色谱图，并计 算6份样品各溶剂残留的RSD%(n=6) 8.6.1.3 接受标准 6份样品各溶剂残留的RSD%(n=6)不得超过10% 表14 重复性试验结果表 溶剂 甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD(,) 8.6.2 中间精密度 另一具有相同资质的分析人员另取相同批次的己酸羟孕酮6 19 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 20 of 25 Page: 份，根据本方法检测残留溶剂。 8.6.2.1 溶液配制 同8.6.1.1 8.6.2.2 程序 同8.6.1.2.。 8.6.2.3 接受标准 该分析员6份样品各溶剂残留的RSD%(n=6)不得超过10%。 两分析员共12份样品各溶剂残留的RSD%(n=12)不得超过10%。 表15 中间精密度试验结果表 溶剂 甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD(,) RSD(,)12次 8.7 溶液稳定性 8.7.1 溶液配制 对照溶液液配制见6.3.1,6.3.2 20 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 21 of 25 Page: 8.7.2 程序 分别将对照溶液及样品溶液放置0小时、2小时、4小时、8小 时、12小时、24小时按照本方法检测，计算各残留溶剂色谱峰 相对标准偏差。 8.7.3 接受标准 各次检测对照溶液各溶剂峰面积RSD%(n=6)不得超过10.0%。 表16 溶液稳定性试验结果表 溶剂名称 甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶 0hr 2hr 4hr 8hr 12hr 24hr 平均值 RSD(,) 8.8 耐用性 8.8.1 溶液配制 空白及对照溶液配制见6.3.1,6.3.2。 8.8.2 程序 21 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 22 of 25 Page: 8.8.2.1 空白溶液 8.8.2.2 正常条件下进对照溶液一针。 8.8.2.3 起始柱温升高和降低2?条件下各进对照溶液一针。 8.8.2.4 流速增加和降低0.2ml/min. 条件下各进对照溶液一针。 8.8.2.5 平衡温度升高和降低5?条件下各进对照溶液一针。 8.8.3 接受标准 各条件下峰面积RSD%(n=7)不得 超过10.0% 表17 耐用性试验峰面积结果表 溶剂 甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶 正常条件 起始柱温+2? 起始柱温-2? 流速+0.2 流速-0.2 平衡温度+5? 平衡温度-5? 平均值 RSD(,)?10.0% 8.9 样品检测 8.9.1 溶液配制 空白溶液:及DMF(HPLC) 对照溶液:见6.3.2 样品溶液:见6.3.3。 22 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 23 of 25 Page: 8.9.2 程序 按照本方法检测不同批次的样品三批。计算三个样品中各杂质残留溶剂。 8.9.3 接受标准 系统适应性各峰面积RSD不的超过10.0%。 各溶剂残留量小于限度要求。 表18 三批样品残留溶剂检测结果表 样品批号 标准 溶剂名称 ?(ppm) 甲醇 3000 乙醇 5000 二氯甲烷 600 吡啶 200 结论 9、方法验证评价 根据验证目的，每一项目的验证结果，从方法的系统适用 性试验、专属性、精密度、线性范围、准确度、耐用性、检测 限和定量限等各方面与可接收标准相比较，对能否达到规定的 可接受标准进行评价，最后得出能否满足己酸羟孕酮产品残留 溶剂测定的准确性、灵敏度和可靠性的结论。 23 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 24 of 25 Page: 评价人: 日期: 年 月 日 10、偏差控制 验证过程中与本防范产生的偏差必须按程序进行调查处理，未 确认合理解释或会对产品质量造成影响时不得放行。并将调查 情况记录在验证总结报告里，说明其对重要指标的影响。 评价人: 日期: 年 月 日 11、变更控制 验证过程中如发生重大变更，尤其是对验证方案做了变更要重 新进行审批后方可进行验证。非重大变更则在验证报告中予以 说明或提出建议。 评价人: 日期: 年 月 日 12、验证结论及批准 24 QC Dept No: AVP-5260-01-1.0 己酸羟孕酮残留溶剂分析 2011.04.17 Effective date: 方法验证方案 25 of 25 Page: 批准人: 日期: 年 月 日 25