[doc格式] 复方菌灵芝合剂中多糖含量的测定

[doc格式] 复方菌灵芝合剂中多糖含量的测定 复方菌灵芝合剂中多糖含量的测定 ?1712?中国医院药学杂志2O08年第28卷第19期ChinHospPharmJ,2008Oct,Vol28,No.19 mL量瓶中,加稀乙醇稀释至刻度,摇匀,No.45_um的微孔 滤膜滤过,取续滤液,即得. 1回收率试验结果(=2) Tab1Theresultofrecoverytest(=2) 2.7.3测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 20,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,即得.3批样 品含量测定结果见表2. 表2样品含量测定结果(标示量/%,7”/=2) Tab2Theresultofcontentdetermination(1abeledamount .=2) 批号盐酸小檗碱含量g?I 050901 050927 O51210 0.67 0.7(J 0.64 3讨论 在色谱条件的选择中,对多种流动相的不同比例,不同 的检测波长,不同的柱温进行了筛选一”一,以流动相为乙腈一 0.033mol?L磷酸二氢钾溶液(40:60),检测波长345nm, 柱温30?的色谱条件为好,因为只有在此条件下才可排除 其他成分的干扰;用甲醇作为溶剂时对照品的峰形较理想; 用稀乙醇的处理杂质峰较少且对盐酸小檗碱主峰无干 扰;由于妇科洗剂与洁阴灵洗剂属同一剂型,且两者每毫 升中含黄柏生药量与制备方法基本一致,故参考洁阴灵洗剂 含量测定中对照品浓度及样品的取样量,经样品的含量测定 证明拟定的方案可行. 参考文献: E1]中国药典.一部[s].2000:248,322,371.418,592,594. E2]宿沽,孙立华,李成果.高效液相色谱法测定利胆排石合剂中盐 酸小檗碱的含量[J].山东医药工业,2002,21(5):12. [3]余南才,胡克菲,张介眉,等.皮疹清颗粒制备工艺研究_J].中 成药,2000,22(7):12. [4]林幸华,刘卓妍.反相高效液相色谱法测定金龙舒胆冲剂中盐 酸小檗碱的含量[J].中国医院药学杂志,l999,19(6):342. [收稿日期]2008—08—23 复方菌灵芝合剂中多糖含量的测定 钱青,张枯,宋毅,张志勇(1.四川大学华西医院 药剂科,四川成都610041;2.四川大学华西药学院,四川成 都610041) [摘要]目的:建立复方菌灵芝合剂总多糖相对含量的测定 方法.方法:采用苯酚一硫酸比色法以葡萄糖为对照品在490 nrn处测定复方菌灵芝合剂中总多糖相对含量.结果:葡萄 糖质量浓度在3.303,11.010mg?L内线性良好(r= 0.9998).平均回收率为98.76.RSD为1.11.结论:该 方法简便易行,准确,适用于对该产品的快速分析. [关键词]多糖;苯酚一硫酸比色法;复方茵灵芝合剂;含量 测定 [中图分类号]R927.2[文献标识码]A[文章编号]1001— 5213(2008)19—1712—02 复方菌灵芝合剂为本院制剂[(川I)卫药制证字第0384 号],是由灵芝,首乌藤,茯苓,五味子,党参5味药组成,具有 利水健脾,补中益气,补肾宁心,安神镇静功效,复方菌灵芝 合剂中灵芝,茯苓,五味子,党参中多糖具有抗病毒,提高机 体免疫力等活性I1.其主要有效成分为多糖,其药理作用与 多糖相关,为确保疗效,本实验采用苯酚一浓硫酸比色法对复 方菌灵芝合剂中的多糖进行含量测定. 1材料 UV一2401分光光度计(SHIMADZU);葡萄糖(华北制 药康欣有限公司,批号060554,旋光度符合中国药典2005年 版);试剂均为分析纯;复方菌灵芝合剂(批号070104, 070314,070611,070226,070929,070930). 2方法与结果 2.1样品溶液的制备精密量取复方菌灵芝合剂6.0mL, 加无水乙醇使其质量分数达到8O,4?醇沉24h,倾去上 清液,挥尽乙醇,沉淀以80乙醇反复洗涤,用少量纯化水超 声溶解,定容至50mI,精密吸取0.20mL置50mL量瓶中, 定容,作为供试品溶液. 2.2葡萄糖对照品溶液以及显色剂的制备 2.2.1葡萄糖对照品溶液制备精密称取105?干燥至恒 重的葡萄糖25.1mg,用纯化水溶解并定容至250mL,摇匀, 得100.4rng?L的对照品溶液. 2.2.2显色剂的制备称取苯酚5g,少量纯化水溶解并定 容至100mL,4?棕色瓶储藏,即得5苯酚溶液. 2.3最大吸收波长的选择取对照品溶液及供试品溶液, 按”2.4”项下方法显色,分别在波长400~800nlTl进行扫描, 结果在490nm处有最大吸收,故选择490nm作为测定波 长. 2.4测定方法精密吸取对照品溶液和供试品溶液1.0 mL,分别置干燥的具塞试管中,加入5苯酚溶液1.2mL, 浓硫酸7mL,摇匀,25?水浴下反应40rain,取出后冷却至 室温,以相应试剂为空白,490nnl处测定吸收度. 2.5方法学考察 2.5.1曲线绘制精密量取对照品溶液0.3,0.4,0.5, 0.6,0.7,0.8,0.9,1.0mL,置干燥的具塞试管中,分别加纯 化水至1.0mL,按”2.4”项下方法操作测得吸收度分别为 0.0147,0.1047,0.1837,0.2700,0.3550,0.4290,0.5180, 0.6100,以吸光度A为纵坐标,葡萄糖对照品溶液浓度(C, mg?L)为横坐标,得回归方程:A=0.0763C一0.2355(r =0.9998,=8),表明葡萄糖溶液在3.303,11.010mg? [作者简介]钱青,女,硕士研究生,电话:028—85423475,E-mail:merryqian@yah.o.con.cn[通讯作者]张志勇,男,主任药师,电话:028— 85422667,E-mail:asg-yong@163.com 中国医院药学杂志2(108年第28卷第19期ChinHospPhamJ,2008Oct,Vol2,!.!! L.范围内其浓度与吸光度线性关系良好. 2.5.2干扰试验取糖浆适量,加入无水乙醇使醇浓度达 到80,无沉淀产生.说明合剂中糖浆对多糖的含量测定无 影响. 2.5.3精密度试验取对照品溶液和同一供试样品溶液, 按”2.4”项下方法分别测定6次,RSD分别为0.84, 1.21. 2.5.4稳定性试验取对照品溶液和同一供试样品溶液, 按”2.4”项下方法每10min测定一次吸收度,1h内的RSD 分别为(1.28,0.06(“=6). 2.5.5重复性试验取同一批号的复方灵芝合剂按”2.1” 项方法处理.按”2.4”项下方法测定6份样品的吸收度.RSD 为1.30. 2.5.6加样回收率试验取批号为071015的复方灵芝合 剂按”2.1”项下方法处理,测得质量浓度为45.[)197mg? L,,精密量取1.0mL样品溶液,分成3组,分别加入对照品 溶液0.33,0.45,0.54mI,按”2.4”项下方法测定吸收度,计 算回收率,结果见表1. 表1加样回收率试验结果(,9) Tab1Theresultofrecoverytest(=9) 2.5.7含量测定取6个批次的复方菌灵芝合剂,按”2.1” 项方法处理.分别取1.(】mI置干燥的具塞试管巾,按”2.4” 项下方法测定吸收度,多糖含量以葡萄糖计.结果其平均质 量浓度为1.45{}g?I.RSD为!.11. 3讨论 3..色条什的选择通过分别加入5苯酚0.6,0.8, 1.0,1.2,1.4,1.6mL,浓硫酸4,5,6,7,8mL,在25,50,75, 1()0?水浴下,显色反应10,20,3O,4(],50,60rain后测定溶 液吸收度,经过实验优选显色条件为5苯酚体积为1.2 mL,浓硫酸体积为7mL,反应温度为25?水浴,反应时间 为40rain. 3.2多糖纯化条件的选择复方菌灵芝合剂中加入无水乙 醇分别使醇浓度达到70,75%,80H,85.90%,低温醇沉 24h后倾去上清液,沉淀加适量水超声溶解,定容至5OmL, 测定含量,结果表明8O醇沉条件下,多糖含量最高,干扰最 少. 3.3多糖吸收度的计算多糖溶液显色后以苯酚一硫酸为 空白在490nm下测得其吸收度A;以水为空白,在490nm 处测得多糖溶液的吸收度Az,A=At—A.这样能避免复 方中其他成分的干扰.多糖含量测定方法有很多种,主要有 蒽酮一硫酸法,苯酚一硫酸法等,这2种方法在测定混合糖 及未知糖时,可以以葡萄糖为对照品,测得的样品中多糖的 相对含量,产生的偏差小,其原理均为己糖在硫酸的作用下 失水形成糠醛,分别与苯酚或蒽酮形成有色配合物.从而可 在一定波长处有最大吸收.该制剂中由于多糖成分复杂,难 以测定单一成分含量,故本实验采用苯酚一硫酸比色法以葡 萄糖作为对照品,对复方菌灵芝合剂中总多糖的相对含量进 行测定,取得了较好的结果,方法灵敏度高,显色稳定,可作 为其质量控制的方法. 参考文献: :1:张晓云,杨春清.灵芝的化学成分和药理作用:J:.国外医药?植 物药分册,20()6,21(4):152—155. [2-戚雁飞.灵芝中灵芝多糖的含量测定研究_j-.中国中药杂志, 2006,31(10):852-853. [3Z李炳奇,汪河滨,谷新利,等.中药复方免疫增强剂中多糖的超 声提取及含量测定:J].西北农业,2005,14(3):134—136. [4:刘龙先,杨哗,梁旭霞.灵芝软胶囊中灵芝多糖含量测定方法的 验证LJ一.中药材,2O04,27(1I)):778—779. [收稿日期]2007一II一21 lineandclarithromycin[J” (4):460—3. :12:谭蓉,郑志昌,王培民,等.从细胞色素P450酶角度归纳2005 年版《中国药典》收载中成药与其他药物不合理配伍使用情况 :J].中国药房,2006,17(19):1516. 13’HellumBH.HuZ,NilsenOG.TheInductionofCYPlA2, CYP2D6andCYP3A4bySixTradeHerbalProductsinCul— turedPrimaryHumanHepatocytes:J:.BasicClinPharmacol Toxicol,2O07.100(1):23—3【】. [14_-StedmanC.Herbalhepatotoxy:J:.SeminLiverDis,2()02; 22(2):195—2()6. 15_ - YinOQ,TomlinsonB,WayeMM,eta1.Pharmacogenetics andherb—druginteractions:experiencewithGinkgobilobaand omeprazole[J~.Pharmacogenetics,2004,I4(12):84I50. [收稿日期]2007—12-30 中物.小l小一一,一=薹一一一一一.一一一一一一一一一,一一一 一一,,,一一一一,一一一一一,,一一一一一一一一一一一一, 一一,一一,一一,一,一一一一一一一一一,一一一