虎杖苷对实验性急性胃黏膜损伤的保护作用

虎杖苷对实验性急性胃黏膜损伤的保护作用 虎杖苷对实验性急性胃黏膜损伤的保护作 用         &nb sp;     作者:郭洁云～ 朱文庆～ 赵维中～ 汪琳 【关键词】  胃黏膜损伤,,,虎杖苷,,,无水乙醇,,,吲哚美辛,,,束缚-冷冻应激 摘要:目的研究虎杖苷,polydatin,PD,对实验性急性胃黏膜损伤的保护作用及其与抗氧化的关系。方法制备小鼠无水乙醇型、吲哚美辛,消炎痛,型、大鼠束缚-冷冻,restraint-cold stress,RCS,应激型胃黏膜损伤模型～测定胃黏膜损伤指数,测定大鼠血清 SOD活性和 MDA含量。结果PD可剂量依赖性地抑制实验性急性胃黏膜损伤。PD可使大鼠束缚冷冻应激型胃黏膜损伤过程中血清中升高的 MDA含量降低～可使降低的 SOD水平回升。结论PD对实验性急性胃黏膜损伤具有保护作用～其作用机制与 PD抗氧化有关。 关键词:胃黏膜损伤,  虎杖苷,  无水乙醇,  吲哚美辛,  束缚-冷冻应激 Abstract:ObjectiveTo study the protective effect of polydatin(PD) on experimental gastric mucosal lesion in rats and relationship of antioxidative effect.MethodsMake the model of gastric mucosal lesion in rats induced by ethanol absoute ,RCS and indomethacin;the index of gastric mucosal lesion in rats was determined;the contents of MDA and SOD of serum  were measured.ResultsThe index of experimental gastric mucosal lesion in rats was inhibited after administration of PD,the decrease of SOD of serum was elevated to normal level .ConclusionPD can possess protective effect on experimental gastric mucosal lesion in rats .Its mechanism may be related to antioxidative effect . Key words:Gastric mucosal lesion;  Polydatin;  Ethanol absolute;  Indomethacin;  Restraint-cold stress(RCS)     虎杖苷,polydatin,PD,为蓼科蓼属多年生草本植物 虎杖,Polygonum cuspidatumSieb.et Zucc.,的干燥根和 茎中提取的一种单体～也称白藜芦醇苷。虎杖性味苦寒～归肝、肺、胆经。主要功效有祛风利湿～祛痰止咳～清热解毒～活血化瘀。中医临床用于治疗湿热黄疸、肺热咳嗽、疮痈肿毒、关节痹痛、经闭经痛、水火烫伤、跌打损伤等。现代研究已证实 PD具有保护心肌细胞、改善微循环、抑制血小板聚集、抵抗内毒素休克、降血脂、抗脂质过氧化、保肝利胆、镇咳、平喘～抗病原微生物多种药理作用,1,～现有文献报道虎杖口服液有抗溃疡作用,2,～但有关 PD对急性胃黏膜损伤的影响尚未见报道。本文应用小鼠无水乙醇型、吲哚美辛型和大鼠束缚-冷冻应激型胃黏膜损伤模型研究 PD对实验性急性胃黏膜损伤的保护作用与抗氧化的关系。 1  与方法 1.1  材料 1.1.1  动物昆明种小鼠～,24〒2,g,SD大鼠～,200〒30,g～??兼用安徽医科大学实验动物中心,皖医实动准字第01号,提供。实验前适应性饲养1周。 1.1.2  仪器752 MC紫外分光光度计,上海精密科学仪器有限公司,、TDZ4-W低速台式离心机,长沙湘仪 离心仪器有限公司,、AT250十万分之一电子天平,瑞士 METTLER公司,。 1.1.3  药品试剂PD:西安冠宇生物技术有限公司产品～虎杖苷含量为99.12%～批号 GY050518～临用前用生理水,NS,配制,无水乙醇,ethanol absolute,:上海试剂一厂综合经营公司～批号20050608,吲哚美辛,indomethacin,:上海辛帕斯制药有限公司～批号050101,西咪替丁,cimetidine,Cim,:常州康普药业有限公司～批号0503024,MDA试剂盒:南京建成生物工程研究所～批号20051128,SOD试剂盒:南京建成生物工程研究所～批号20051202。 1.2  方法 1.2.1  分组与给药昆明种小鼠60只～随机分为6组:空白对照组～模型对照组～PD大、中、小剂量组,240～120～60 mg/kg,～Cim阳性药对照组,200 mg/kg,。药物均用 NS配制～临用前充分混匀后灌胃,ig,给药～连续5 d。空白对照组～模型对照组给予 NS～给药容积均为0.1 ml/10 g。SD大鼠48只～随机分为6组:空白对照组～模型对照组～PD大、中、小剂量组,180～90～45 mg/kg,～Cim阳性药对 照组,140 mg/kg,。连续 ig给药5 d。空白对照组～模型对照组给予 NS～给药容积均为1 ml/100 g。 1.2.2  无水乙醇诱发的小鼠胃黏膜损伤模型制备,3,昆明种小鼠实验前禁食24 h～自由饮水。在最后一次 ig给药1 h后～除正常对照组外～每只均 ig无水乙醇0.1 ml～引起胃黏膜损伤～1 h后处死动物。 1.2.3  吲哚美辛诱发的小鼠胃黏膜损伤模型制备,4,昆明种小鼠实验前禁食24 h～自由饮水。在最后一次 ig给药1 h后～小鼠 ig吲哚美辛溶液,64 mg/kg,～2 h后处死动物。 1.2.4  大鼠 RCS应激型黏膜损伤模型制备,5,SD大鼠实验前禁食24 h～自由饮水。在最后一次 ig给药1 h后～在乙醚轻度麻醉下～将大鼠缚于铁栅上～待动物清醒后放入4?冰箱中应激～3 h后从冰箱中取出腹动脉放血处死取胃。 1.2.5&nb 1sp; 观察指标和方法 1.2.5.1  小鼠胃黏膜损伤面积的测定动物处死后～取出胃～并向胃内注入10%甲醛2 ml～置于同浓度甲醛中充分固定。20 min后～沿胃大弯剪开胃～展平并置于双目体式镜下观察胃出血性病灶～用测微尺计算胃黏膜损伤面积～以每只小鼠胃黏膜损伤面积,mm2,的总和作为其损伤指数～并计算胃黏膜损伤抑制率。 1.2.5.2  大鼠胃黏膜损伤指数测定,6,动物处死后～取出胃～并向胃内注入10%甲醛10 ml～置于同浓度甲醛中充分固定～30 min后～沿胃大弯将胃剪开展平～可见局限于胃黏膜的点状或条索状出血性病灶～按 Guth标准改良评分:其中病灶长度,1 mm为1分～病灶长度,2 mm为2分～病灶长度, 3 mm为3分～病灶长度,4 mm为4分～若病灶长度?4 mm～则分段计分～病灶宽度?2 mm时～分数乘以2～最后以全胃病灶分数总和作为该动物胃黏膜损伤指数～并计算损伤抑制率。 1.2.5.3  大鼠血清中 MDA含量测定腹主动脉采血～静置2 h后3 000 r/min离心15 min。取血清-20?冷冻保存。采用硫代巴比妥法,TBA法,～操作按试剂盒说明进行～单位 nmol/ml。 1.2.5.4  大鼠血清中 SOD活性测定按 SOD测定试剂盒说明书进行～单位 nmol/ml。 1.2.5.5  数据处理数据以〒s表示～两组间数据比较采用 t检验。 2  结果 2.1  PD对无水乙醇致小鼠胃黏膜损伤的影响表1表示～PD剂量组胃黏膜损伤指数与模型组对照组比较～大、中剂量组均具有显著性差异～PD小剂量组胃黏膜损伤指数虽较模型组有所降低～但统计学检验差异无显著性。各剂量组损伤抑制率分别为模型对照组统计学检验差异无显著性。各剂量组损伤抑制率分别为模型对照组的43.04%～29.84%～18.51%～说明PD大、中剂量可明显减轻无水乙醇所致的实验性急性胃黏膜损伤。 表1  PD对无水乙醇致小鼠急性胃黏膜损伤的影响(略) 与模型对照组比较～*P,0.05～**P,0.01～n=10 2.2  PD对吲哚美辛致小鼠胃黏膜损伤的影响由表2可见～PD60、120、240 mg/kg组小鼠胃黏膜损伤指数与模型对照组比较～差异均具有显著性意义～表明 PD对小鼠吲哚美辛致急性胃黏膜损伤的模型也具有明显的保护作用。 表2  PD对吲哚美辛致小鼠胃黏膜损伤的影响(略) 与模型对照组比较～*P,0.05～**P,0.01～n=10 2.3  PD对大鼠 RCS应激型胃黏膜损伤的影响大鼠束缚-冷冻应激后～镜下可见鼠胃黏膜表面出现广泛点状或条索状损伤。各组胃黏膜损伤情况见表3～结果显示不同剂量的 PD对大鼠 RCS应激型胃黏膜损伤均具有明显的抑制作用。 表3  PD对大鼠束缚-冷冻应激型胃黏膜损伤的影响(略) 与模型对照组比较～*P,0.05～**P,0.01～n=8 2.4  PD对大鼠血清中 MDA含量和 SOD活性的 影响表4显示～模型对照组大鼠血清中和 SOD较正常对照组明显升高～SOD含量明显降低。而用药组经给予 PD后～血清中 MDA含量较模型对照组明显降低～SOD明显升高。 3  讨论 本研究通过采用大鼠束缚-冷冻应激和小鼠无水乙醇、吲哚美辛灌胃3种动物模型～发现预先给予 PD灌胃～连续5 d可以剂量依赖性地抑制由上述3种模型所引起的急性胃黏膜损伤～表明 PD对急性胃黏膜损伤具有明显的保护作用。 表4  PD对大鼠血清中的 MDA和 SOD活性的影响(略) 与模型对照组比较～*P,0.05～**P,0.01,与空白对照组比较～#P,0.01～n=8 研究表明多种类型的急性胃黏膜损伤都与氧自由基有关,7~9,。氧自由基在整体和细胞水平都可以引起胃黏膜或黏膜细胞的脂质过氧气化～引发胃黏膜损伤。MDA作为羟基自由基,诱导脂质过氧化反应,的一个指标～可以间接地 反映羟自由基形成的数量。已经乙醇诱发的急性胃黏膜损伤与氧自由基和胃黏膜的血流量减少有关。虎杖口服液对无水乙醇诱发的胃黏膜损伤与氧自由基和胃黏膜的血流量减少有关～而虎杖口服液对无水乙醇诱发的胃黏膜损伤有保护作用～PD能改善微循环～抗脂质过氧化。本实验中也发现 PD大、中剂量对无水乙醇诱发的胃黏膜损伤有保护作用～可能是与 PD的抗氧化有关～具体机制有待研究。束缚-冷冻应激性胃黏膜损伤与胃黏膜血流量减少有关外～还有氧自由基参与,10,。本实验中也发现PD能有效拮抗大鼠束缚-冷冻应激所致 SOD活性降低～并抑制脂质过氧气化产物 MDA升高～具有较强的清除氧气自由基作用。提示 PD的这种胃黏膜保护作用可能与其抗氧化作用有关。吲哚美辛属于非甾体抗炎药～作为环氧化酶抑制剂～其作用结果是抑制胃内前列腺素,PG,的合成～从而使胃黏膜的防御能力降低。文献报道虎杖对吲哚美辛致大鼠胃溃疡有保护作用,11,～其机制与抗氧化有关。本研究中 PD可使小鼠吲哚美辛苦型胃黏膜损伤减轻～提示 PD对胃黏膜保护作用可能与促进胃组织中 PG的生物合成有关～或与 PD的抗氧化相关。另有文献报道应激所致急性胃黏膜损伤与缺血再灌注有关～PD是否有抗胃黏膜缺血再灌注损伤作用～将有待进一步探讨。 参考文献: ,1,  冯  雷.虎杖研究新进展,J,.医药论坛杂志～2003～24,9,:78. ,2,  傅志泉～雍定国～周智林～等.虎杖口服液抗胃出血及抗胃溃疡作用的实验研究,J,.浙江中医学院学报～2004～28,4,:60. ,3,  马  燕～胡  强～赵维中.栀子总苷对小鼠实验性胃黏膜损伤的保护作用,J,.时珍国医国药～2005～16,2,:386. ,4,  梁心平～杨素娟.消炎痛致胃黏膜操作时胃组织胺含量变化及甲氰咪呱的影响,J,.中国应用生理学杂志～1990～6,1,:55. ,5,  赵维中～王宇翎～陈志武～等.芸香甙的胃黏膜保护作用研究,J,.安徽医科大学学报～1998～33,2,:93. ,6,  Guth PH,Paulsen G,Nagata H et al.Histologic and microcirculatory changs in alcohol-induced gastric lesions in the rat:Effect of prostaglandin cytoprotection,J,. J Gastroenterology,1984,87(5):1083. ,7,  IZgüt-Uysal VN,Arzu Ag ac,Narin Derin .Effect of carnitine on stress-induced lipid perxidation in rat gastric mucosa.,J,.J Gastroenterol 2001,36(4):231. ,8,  K wiecien S,Brzozowski T,Kontuek SJ.Effects of reactive oxygen species action on gastric mucosa in various models of mucosal injury,J,.J Physiol Pharmacol～2002,53(1):39. ,9,  Li-Hong Zhang ,Chang-Bai Yao,Ming-Qi Gao.Gastric mucosal injury due to hemorrhagic reperfusion and efficacy of Salvia miltiorrhizae extract F and cimetidine,J,.World J Gastroenterol.2005,11(18):2830. ,10,  Bo-Sheng Qui ,Qi-Bing Mei ,Li Liu ,Kam-Meng Tchou-Wong,EFFects of nitric oxide on gastric ulceration induced by nicotine and cold-restraint stress,J,.World J Gastroenterol～ 2004;10(4):594. ,11,  王桂英,李振彬,石建喜.等.虎杖对消 炎痛致大鼠胃溃疡的保护作用,J,.河北中医药学报,2001～ 16(1):35.