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运用兽用B超仪检查奶牛卵泡、黄体和诊断卵巢疾病的体会

2018-03-14 3页 doc 14KB 15阅读

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运用兽用B超仪检查奶牛卵泡、黄体和诊断卵巢疾病的体会
运用兽用B超仪检查奶牛卵泡、黄体和诊断卵巢疾病的体会 运用兽用B超仪检查奶牛卵泡、黄体和诊断 卵巢疾病的体会 ?3O?中国奶牛?2007年第9期 BSA对牛结核抗体ELISA检测的影响 吴庆儒,郭定宗,张桂荣,李文波 (华中农业大学动物医学院,武汉430070) 中图分类号:$858.23.2文献标识码:B文章编号:1004—4264(2007)09—0030—03 摘要:分别研究了封闭液,血清稀释液及酶标二抗稀释液中BSA成分对牛结核抗体ELISA检测的影响.结果显示 酶标二抗稀释液中BSA的存在使ELISA检测值普遍偏低,且BSA的含量越高,检测值越低;结果提示,为了提高 ELISA检测值,使其达到理想检测效果,必须提高酶标二抗的使用浓度.结论:BSA中可能存在的牛血清抗体杂质 对酶标二抗起到了"中和"作用,降低了酶标二抗与目标抗体结合的实际浓度,使检测结果普遍偏低. 关键词:BSA;ELISA;酶标二抗 牛结核病是一种人畜共患传染病.不仅严重影响 奶业的健康发展.而且由于人类与奶牛间的密切关系. 也同时严重威胁着人类的健康因此对奶牛结核病的 诊断显得尤为重要.ELISA诊断方法具有方便,快捷, 灵敏等优点.自1976年Nassau等【lJ首次用ELISA方法 检测肺结核病人血清中结核抗体取得满意的效果以 来.此方法也在牛结核病的诊断中被推荐应用. 牛血清白蛋白fBSA)是ELISA检测中的常用试剂 组分.其主要作用是与抗体或酶标二抗形成竞争以降 低非特异性结合.在国内外已有的报道中.BSA也是 牛结核病ELISA检测方法中常被用到的试剂组分[2-6] 但值得注意的是.在牛结核的ELISA检测方面,一些 国外研究报道中不再提到BSA.而是使用了其它的替 代成分(.徐璐【10l等对8种不同厂家生产的BSA产品 进行比较后认为.BSA产品中杂质蛋白会严重干扰检 测牛血清抗体的ELISA结果本文对BSA在ELISA 检测奶牛结核病中的影响机制及改进方法进行了分 析探讨. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1结核菌素牛型结核菌素PPD购自中国兽医药 品监察所 收稿日期:2oo7一O2一O8 作者简介:吴庆儒(1979一),男,湖北大冶人,硕士,主要从事临床兽医学 研究. 1,1.2酶标板96孔聚苯乙烯微量反应板.购自深圳 市金灿华实业有限公司. 1.1.3血清检测用血清样本采自武汉郊区某奶牛 场;参考阳性血清.采自变态反应阳性,牛分枝杆菌分 离培养呈阳性的结核病牛;参考阴性血清.采自无结核 病史牛场中变态反应阴性.且多次采血ELISA检测 OD值较低的犊牛血清. 1.1.4酶标二抗辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗 牛IgGFc抗体.购自美国ROCKLAND公司. 1.1.5相关试剂牛血清白蛋白(BSA)购自Proliant公 司;卵清白蛋白(OVA)购自Sigma公司;脱脂乳(MILK) 购自光明公司 1.2方法 1.2.1封闭液中BSA成分对ELISA的影响 在洗涤液(PBST)中分别加入0.I%BSA,0.I%MILK 和0.1%OVA组分作为封闭液.同时设不封闭作为对 照,ELISA检测阴阳性参考血清,比较不同封闭液的 封闭效果.ELISA检测方法参照徐凤宇方法【l1J进行,以 下同. 1.2.2血清稀释液中BSA成分对ELISA的影响 分别用含0.1%BSA的PBST溶液.含0.1%OVA的 PBST溶液和PBST溶液稀释的包括阴阳性对照在内的 8份血清样品.分析BSA用于血清稀释液对ELISA的 影响. 1.2.3酶标二抗稀释液中BSA成分对ELISA的影响 通讯作者:郭定宗,教授.分别用含o.I%BSA的PBST溶浓,含o.I%OVA的 高质量的B超对于卵巢诊断的结果将起到决定性 的作用. 因作者应用B超的体会还不够全面,详细,深入, 也不系统,偏差,误解或不正确之处在所难免,还望前 辈,同行,老师们批评指正. 参考文献(略)口
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