胆汗酸、βcatenin蛋白及MUC6与胃底腺息肉和增生性息内关系研究（可编辑）

胆汗酸、βcatenin蛋白及MUC6与胃底腺息肉和增生性息内关系研究（可编辑） 河北医科大学 学位使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师或指导小组的指导下,由本人独立完成。本学 位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医 科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要 内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验、原始数据、 申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则,承担相应的法律责 任。 ;‖瓮?。。。 研究生签名:丢撕导师签章:嘻触二级学院领簧:?一? ?垮,,强蹿?眵‖ ’一篡‖ 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中 特别加以标注等内容外,文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果,指 导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。 研究生签名: 导师嫜喜耐 伽 年月习日 目 录 中文摘要英文摘要研究论文胆汁酸、蛋白及与胃底腺息肉和胃增生性息 肉关系的研究 引言第一部分 胃底腺息肉和胃增生性息肉患者胃液值、胆汁酸的检测及 意义 ”“?“”“?“”?一““?““?““?“ 前言? 刖吾 材料与方法 结果? 附图 附表 讨念? 小结 参考文献第二部分.蛋白、在胃底腺息肉和胃增生性息肉中的表 达及意义 ““”””??一?“??一“?“??一?“?”一“??“一?“ 前言 月舌 材料与方法 结果附图 附表? 讨论??“??一“??一“?”??一” 小结 参考文献结论一? 综述 胃底腺息肉与胃增生性息肉的研究进展 致谢? 个人??.,.?‘中文摘要 胆汁酸、 蛋白及与胃底腺息肉 和胃增生性息肉关系的研究 摘 要 随着人民保健意识提高和电子胃镜检查的普及,胃息肉样病变的检出 率越来越高。这些病变可能包括真正的上皮息肉、组织异位、淋巴组织或 者间质病变【。胃息肉是指胃粘膜上皮组织局限性良性隆起病变。其中, 胃底腺息肉和胃增生性息肉是最常见的胃息肉类型。患者往往无特征性症 状,也可表现为不同程度消化道症状,如上腹不适、早饱、腹胀等,严重 者可出现消化道出血、梗阻等并发症【】,甚至有恶变可能吲。由于胃息肉 发病率越来越高,且各种并发症和恶变的风险引起大量学者的兴趣,国内 外进行了相应的研究,但对于胃底腺息肉和胃增生性息肉的发病机制尚无 统一意见。 本实验结合国内外报道,对患有胃底腺息肉者人、胃增生性息肉 者人以及正常对照组人进行胃液及息肉组织,探讨胃底腺息肉 和胃增生性息肉的可能发病机制。实验分为两部分: 第一部分:胃底腺息肉和增生性息肉患者胃液值、胆汁酸的检测 及其意义 目的:检测胃底腺息肉和增生性息肉患者胃液值及胃液中胆汁酸, 明确胃液的酸碱环境以及胆汁酸对胃底腺息肉和增生性息肉有无影响。 方法: 病例资料 收集年月至年月于河北医科大学附属人民医院内镜室 行胃镜检查时发现息肉样病变者,于胃底粘液湖处用一次性导管抽取胃液 .,然后取息肉组织送病理检查,筛出其中病理诊断为胃底腺息肉者 例和胃增生性息肉例的胃液,确定为实验组;另外取内镜 下阴性表现者例的胃液.作为对照组,所有胃液标本密封, 室温下冷却后置于.?冰箱冻存,待检。 指标检测 .所有胃液标本解冻至.?后,用精密仪检测每份胃液的值;主查塑兰 .所有胃液经/离心分钟后,取上清液用全自动生化分析仪 循环酶法检测胆汁酸含量。 统计方法 应用.统计软件进行数据分析,计量资料正态分布数据用均数 ?标准差夏?表示,非正态分布数据用四分位数表示;各组间两两 比较采用单因素方差分析或非参数检验,.认为有统计学意义。 结果: .所有入选者共例,男例,女例,年龄范围.岁,平均 年龄为.?.岁。胃底腺息肉组、增生性息肉组以及对照组性别及 年龄均无差别。 .胃底腺息肉组:值平均数..;胆汁酸值%百分位数为 . . /,中位数%百分位数为. /,%百分位数为 . /。 .增生性息肉组:值平均数.士.;胆汁酸值%百分位数为 ./,中位数%百分位数为. /,%百分位数为 . /。 .对照组:值平均数..;胆汁酸值%百分位数为. /,中位数%百分位数为. /,%百分位数为. /。 .胃底腺息肉组值比对照组低,两组进行统计学比较, ..,差异无统计学意义;胃底腺息肉组胆汁酸比对照组高,两 组进行统计学比较,..,差异无统计学意义。 .增生性息肉组值比对照组高,两组进行统计学比较, ..,差异无统计学意义;增生性息肉胆汁酸比对照组高,两组 进行统计学比较,..,差异无统计学意义。 .胃底腺息肉组胃液的值比增生性息肉组低,两组进行统计学比 较,..,差异无统计学意义;胃底腺息肉组胃液的胆汁酸含量 比增生性息肉组高,两组进行统计学比较,..,差异无统计学 意义。 小结: .胃底腺息肉组胃液中值低于对照组,而增生性息肉组胃液?查塑墨 值高于对照组,但统计学处理两组之间无差异。提示两种可能,一是样本 例数过少,影响结果;二是值确实对胃底腺息肉及增生性息肉形成没 有直接影响。 眉底腺息肉组和增生性息肉组胃液中胆汁酸的含量均高于对照组, 但统计学处理无差异,提示一是胃液中胆汁酸与息肉形成确实无直接关 系;二是由于样本例数过少影响检测结果。 .胆汁酸及胃液酸碱环境是否影响胃底腺息肉和增生性息肉形成和 生长尚无确切定论。 第二部分.蛋白、在胃底腺息肉和增生性息肉中的 表达及意义 目的:检测胃底腺息肉和增生性息肉组织中.蛋白及 在中表达水平,研究.蛋白及在胃底腺息肉和增生性息肉 形成中的意义。 方法: 病历资料入选者在胃液抽取完毕后,于息肉组织处取活检.块 作为实验组,并于其中典型息肉旁处取正常黏膜组织块作为对照 组,所有组织标本经过%福尔马林溶液固定后,石蜡包埋,常规处理后, 行染色,经病理诊断确定为胃底腺息肉、增生性息肉和正常胃粘膜上 皮组织者,留取标本蜡块,编号保存,待检。最终入选息肉组织标本:分 为三组,第一组为胃底腺息肉组共份;第二组为胃增生性息肉组共 例;第三组为对照组共份。 免疫组化所有息肉标本重新切片后行免疫组织化学方法检测组 织中.蛋白及的表达水平。免疫组化染色结果根据染色细 胞比例分为阴性阳性细胞%,散在%阳性细胞%,弥漫 阳性细胞%和染色程度轻,中,重进行综合评分。 统计方法应用.统计软件进行数据分析,计量资料正态分 布数据用均数?标准差又?表示;各组间两两比较采用单因素方差 分析或非参数检验,.认为有统计学意义。 结果: .胃底腺息肉者年龄平均值为..岁;增生性息肉患者年龄 平均值为..岁;对照组年龄平均值为..岁。三组患者中文摘要 性别比例分别为::,:,:。胃底腺息肉和增生性息肉组与对照组 性别及年龄均无差别。 .胃底腺息肉组息肉分布位置为胃窦例,胃体例,胃底例; 增生性息肉组息肉分布位置为胃窦例,胃体例,胃底例。 .胃底腺息肉组.蛋白表达水平比对照组降低,两组进行统 计学检验..,结果有统计学意义;胃底腺息肉组表达 水平比对照组降低,两组进行统计学检验..,结果有统计学意 义。 .增生性息肉组.蛋白表达水平比对照组降低,两组进行统 计学检验..,结果有统计学意义;增生性息肉组表达 水平比对照组降低,两组进行统计学检验..,结果有统计学意 义。 .胃底腺息肉组.蛋白表达水平比增生性息肉组高,两组进 行统计学检验..,结果有统计学意义;胃底腺息肉组 表达水平比增生性息肉组高,两组进行统计学检验..,结果有 统计学意义。 小结: .胃底腺息肉和增生性息肉好发于中年人;胃底腺息肉多见于胃底、 胃体,而增生性息肉绝大多数位于胃窦部。 .胃底腺息肉和增生性息肉的.蛋白表达水平较对照组均有 下降,可能是胃底腺息肉和增生性息肉形成的发生机制之一。 .胃底腺息肉和增生性息肉的表达水平较对照组降低,可能是 导致胃底腺息肉和增生性息肉形成的另一机制。 结论: .胆汁酸及胃液酸碱环境对胃底腺息肉和增生性息肉形成和生长影 响尚不明确。 .胃底腺息肉和增生性息肉的.蛋白及表达水平较对 照组降低,可能与息肉的形成有关。 关键词:胃底腺息肉;胃增生性息肉;胃液;值;胆汁酸;中文摘要 蛋白; 英文摘要 ?????????????????????????????????????????????????????????一一,, 晰 ’ , 一, .,, ., 。 ., , ,, , , . , , . . , , ,.’ 一一 一 : ,: , . : ‘英文摘要 ??????????????????????????????????????????????????一? . ,. ,. , . . . ?。. /, . 仃. . . ? ? . . .. : ? , , , ,. . . . % . .;: .. % /, . . “/,% . .; %:. /,.?/, % /. . % 一??????????????????????????????????????????????????????????一 美文摘要. .; % :.斗/,% .“/ % /. . , .., ;.., , . , .., ;.., , . ,,.., ;, .., . : ; , , , : ,, :? 。。 .,.:; :,英文摘要.. 一, : ?, ?, . : ’, . % , . , . , . : . , ,.%: %,% % , . ,, .. . 士 ? . 英文摘要 ??????????????????????????????????????????????一一 ... : . . ,.. ,.士, . 妣 :,: ,:.. , ; , .? . , ., ; , . ., . , .., ; , ..,.? ; .., ;. , ., . : ,? ; , . 英文摘要 ????????????????????????????????????????????????????一, 邛 ,. ,’. : ’. ? ,. : ; ; ; ; ;? ; ???????????????????????????????????????????????一。 研究论文 胆汁酸、 蛋白及与胃底腺息肉 和胃增生性肉关系的研究 胃底腺息肉是胃镜下最多见的胃息肉类型,多发予家族性息肉病患 者,但也可以散发于非家族性息肉病者,好发于中年人,男女比例约:。 其胃镜下典型表现为泌酸黏膜上皮生长出来的表面光滑、无蒂或带蒂、与 周围黏膜界限清楚的隆起,直径大小约...。如图。显微镜下表 现为一个或多个囊性扩张的泌酸腺,导致边缘细胞受压变形【。. 增生性息肉常发生在胃炎或者腺体萎缩的胃粘膜,胃窦部比其他部位 多见,且常为多发。内镜下一般表现为光滑、半球形,一般半径约 ...,但也可生长到以上,可有带蒂或表面分叶【。如图。 显微镜下表现为高度增生的胃小凹上皮及固有腺体构成的腺管。. 今年来对于胃底腺息肉和胃增生性息肉的研究不少,大量研究表明散 发胃底腺息肉好发于中年女性,发生于胃底及胃体胃粘膜上皮组织,常表 现为多发,不伴有胃炎、.、胃粘膜萎缩等,且几乎不发生癌变。 有个案报道及动物实验支持,散发胃底腺息肉的形成与类抑酸药物的 长期使用有关的观点;有学者也证实了散发胃底腺息肉的发生机制可能是 由于.基因突变影响了/.途径而导致的。 至于胃增生性息肉,好发于中老年女性,常位于胃窦部,可单发或多 发,其致病因素为长期慢性胃炎,胃粘膜肠上皮化生或萎缩,.感 染等;.和血管内皮因子促进息肉的持续生长;增生性息肉长期慢性 增长过程中可能会发生等基因的变异,可能进一步发展为胃癌等。研究论文 第一部分 胃底腺息肉和胃增生性息肉患者胃液 值、胆汁酸的检测及意义 “刍 刖 置 胃液包括水、电解质、脂类、蛋白质和多肽激素,主要成分是盐酸、 胃蛋白酶、内因子和粘液等,..,每日分泌量为..升,但 胃液值可受胃肠道动力、胃肠激素、胃肠生理结构的改变以及药物等 多种因素影响。 胆汁酸是由肝细胞合成,经胆囊浓缩后,进入十二指肠,成为十二指 肠液的一部分,当幽门关闭功能障碍或者腹压增高等因素存在时,含有胆 汁酸的肠液就会反流入胃,对酸性胃腔内环境造成影响。胆汁酸不仅影响 胃腔内正常生理环境,而且与消化道多种疾病均有密切关系。 现今,国内外对于胃底腺息肉和增生性息肉的研究不少,但发病机制 尚无统一意见,且二者与胃液中和胆汁酸是否有关尚缺乏报道,本试 验通过检测胃液值及胆汁酸含量,初步判定胃液酸碱环境与二者的发 生有无关联。 材料与方法 材料 一 .研究对象 收集 年月至年月于河北医科大学附属人民医院内镜室 行胃镜检查时发现息肉样病变者,于胃底粘液湖处用一次性导管抽取胃液 .,然后取息肉组织送病理检查,筛出其中病理诊断为胃底腺息肉者 例和胃增生性息肉例的胃液,确定为实验组;另外取内镜 下阴性表现者例的胃液.作为对照组。 .纳入标准 胃镜下示散在分布于胃窦、胃体、胃底的典型息肉,组织标本行染研究论文 色后,病理检查诊断为胃底腺息肉和增生性息肉者。胃底腺息肉及增生性 息肉患者的病理诊断标准依据病理诊断??刘彤华《诊断病理学》第二版。 .排除标准 胃液中混有血液及明显食物残渣者除外;操作过程中,由于患者恶心、 呕吐导致明显的胆汁返流者除外;合并其他系统严重疾病者除外;家族性 息肉病患者以及幼年性息肉病等特殊型息肉患者和息肉样病变者均除外。 标本采集 】的方法,所有入选者均于空腹. 胃液标本根据 小时后,行电子胃镜检查,凡发现胃息肉样病变者,立即退镜至胃底,于 取活检前,经胃镜活检孔插入一次性导管,在胃底粘液湖处抽取胃液 .,装于无菌塑料瓶内,密封,标注患者信息后,置于.?冰箱冻 存,待检。 方法 .实验仪器及试剂 .电子胃镜:日本公司 离心机:北京时代北利离心机有限公司白洋离心机 精密计:上海沐晨 全面自动生化分析仪:美国贝克曼公司贝克曼一 总胆汁酸测定试剂盒:上海荣盛生物技术有限公司 ’ .实验方法 .. 值检测 所有胃液标本解冻至.?后,分别用计检测值,检测过程 中,每次更换样本前后,确保计检测电极用蒸馏水冲洗干净,以免影 响其他标本的检测结果如图,。所有先后测量两次,取平均值,。 ..胆汁酸检测 所有入选胃液标本解冻完全后,于快速离心机/,离心 分 钟后取上清液,直接用全自动生化分析仪循环酶法检测胃液中胆汁酸含 量,直接读数后记录。结果如. ..循环酶法检测原理 胆汁酸 羟甾醇脱氢酶 .以及氧化型.硫代烟碱胺脲嘌 呤二核苷酸特异性氧化,生成.酮类固醇以及还原性.研究论文 硫代烟碱胺脲嘌呤二核苷酸.。生成的存在下, 再生成胆汁酸及氧化型.硫代烟碱胺脲嘌呤二核苷酸。如上所述 循环放大使测试敏感度提高。测定在单位时间内生成的在 处的吸光度改变,以求得胆汁酸的浓度。 统计学处理 .统计软件进行数据分析,计量资料正态分布数据用均数 应用 ?标准差 表示,非正态数据采用四分位数表示;各组间两两比 较采用单因素方差分析或非参数检验,.认为有统计学意义。 结 果 .所有入选者共例,男例,女例,年龄范围.岁,平均 年龄为..岁。胃底腺息肉组、增生性息肉组以及对照组性别及 年龄均无差别。如. 用底腺息肉组:值平均数..,胆汁酸值%百分位数为 . . /,中位数%百分位数为. /,%百分位数为 . /。 .增生性息肉组:值平均数..;胆汁酸值%百分位数为 . . /,中位数%百分位数为. /,%百分位数为 . /。 . .对照组:值平均数..;胆汁酸值%百分位数为. /,中位数%百分位数为. . /,%百分位数为. /。 .胃底腺息肉组值比对照组低,两组进行统计学比较, ..,差异无统计学意义;胃底腺息肉组胆汁酸比对照组高,两 组进行统计学比较,..,差异无统计学意义。 .增生性息肉组值比对照组高,两组进行统计学比较, ..,差异无统计学意义;增生性息肉胆汁酸比对照组高,两组 进行统计学比较,..,差异无统计学意义。 胃底腺息肉组胃液的值比增生性息肉组低,两组进行统计学比 较,..,差异无统计学意义;胃底腺息肉组胃液的胆汁酸含量研究论文 比增生性息肉组高,两组进行统计学比较,..,差异无统计学 立, 恳义。研究论文 附 图 图研究论文 附 表 . .士. 姗 . .士.. ... . . . .土. . . . 肿 .士. . . . .士. . . .. ? ? ? . .. . . . . . . .研究论文 讨 论 胃液成分主要有盐酸、胃蛋白酶、内因子和粘液等,在生理状态下 约在.一.之间,但胃液值可受胃肠道动力、胃肠激素、胃肠 生理结构的改变以及药物等多种因素影响。 年由 首次提出胃底腺息肉与酸抑制剂有关【】, 】报道一位岁女性患有慢性胃食管反流病患者,间断口服雷 等【 贝拉唑/,持续年,内镜检查发现出胃窦外,贲门、胃体、胃底 均布满息肉,病理示胃底腺息肉,且胃窦及胃体活检均未见感染,且 无息肉病家族史。等也报道了两例长期应用类药物治疗后 出现胃底腺息肉患者,还有 等【 】用个月的/ 雄性小鼠应用兰索拉唑皮下注射周制造胃底腺息肉动物模型,笔者认为 可能原因是类药物长期使用,促进水蛋白通道和钾离子 通道蛋白表达,使壁细胞增生;另一个可能解释是抑酸剂与 胃底腺息肉的关系的理论是,类药物可以升高血清胃泌素水平,而胃 泌素是促进泌酸腺生长的一个因素。类药物改变了胃腔内酸碱环 境,升高了值,刺激胃泌素的分泌,胃泌素的过度合成,促使腺体增 生,故胃液值可能对息肉的形成有一定影响。本研究结果示胃底腺息 肉组较对照组升高,但差异无统计学意义,可能是由于样本量小造成 的误差,有待扩大样本量后进一步研究。 近些年来,很多学者均发现胃增生性息肉与.感染、胃炎和胃 粘膜萎缩等有关。据,等】统计,增生性息肉病灶中% 有肠上皮化生,%有不典型增生,%患者病理显示有黏膜炎症,%存 在幽门螺杆菌感染,%存在胃粘膜自身免疫性化生性萎缩性胃炎。 】对名息肉直径至少,且均有幽门螺杆菌感染的增生性息 肉患者进行随机双盲对照试验。实验组服用、阿莫西林和克拉霉素, 对照组不服用药物,%幽门螺杆菌被清除,%的患者息肉在.月之 间消失,但对照组息肉无一例消失,证实根除后息肉体积缩小甚至消 失【、?。充分证明.感染与增生性息肉形成存在直接关系,而幽 门螺杆菌感染和胃窦炎症抑制胃酸分泌,提高胃液值,导致高胃泌素 血症,且根除.后胃酸分泌和血清胃泌素水平均可恢复正常,慢研究论文 性胃炎、萎缩性胃炎及肠上皮化生患者,是由于抗败血酸低和亚硝酸盐浓 】。 度高,而导致胃液升高【 慢性胃炎及.感染均可使胃液值升高,碱性增加酸性减弱, 增生性息肉的形成与胃炎及.感染有直接关系,因此酸碱环境的 改变可能影响胃增生性息肉。本研究结果示增生性息肉组值较对照组 高,与上述报道结果一致,但差异无统计学意义,可能是由于样本量小造 成的误差。 胆汁酸是由肝细胞合成,经胆囊浓缩后,进入十二指肠,成为十二指 肠液的一部分,当幽门关闭功能障碍或者腹压增高等因素存在时,含有胆 汁酸的肠液就会反流入胃。胆汁酸有细胞毒性作用,一般认为是通过破坏 细胞增生、分化、凋亡的正常平衡而致病甚至致癌的,而此平衡的破坏是 。 通过胆汁酸改变细胞内信号系统及基因表达来实现的【 很多报道均显示胃内胆汁反流与慢性糜烂性胃炎、萎缩性胃炎有关 】。胆汁酸不仅影响胃腔内正常生理环境,胆盐抑制正常食管黏膜上皮细 胞的生长并诱导其凋亡,因此胆汁酸反流可以造成食管甚至食管 癌。发现牛磺酸脱氧胆酸可引起胃粘膜肠化,诱发癌变【】,甚至 可能促进食管、肠上皮化生和胃癌的发生【 ,有确切报道,残胃 中胆汁酸的存在促使黏膜损伤,可能导致残胃癌【】。也有学者报道,胆汁 酸与肠道息肉和腺瘤的发生、发展可能有直接相关性【?。胆汁酸对整个消 化道包括肿瘤在内的各种疾病均有不同影响。长期胆汁反流作用可导致胃 炎,而增生性息肉患者多伴有慢性胃炎,或常出现在萎缩性胃炎【】患者, 那么息肉的形成可能与胆汁酸的影响有关。 等【”】在十二指肠 .等【】】进行大 反流的动物模型中观察到有胃腺瘤的生长。 样本研究,发现粪便胆汁酸是结肠腺瘤的危险因素,胆汁酸刺激结肠腺瘤 的形成及发展。 增生性息肉表现为胃小凹增生,长期以来胃小凹增生被认为是化学性 胃病的一个突出特点,而导致这些化学性胃病的原因无非是胆汁反流、 或者.相关性胃炎。本实验结果显示胃底腺息肉和增生 性息肉组胃液中胆汁酸含量均高于对照组,也提示了胃底腺息肉和增生性 息肉患者胃液的胆汁酸水平与正常人有差别,但差异无统计学意义,可能 与实验样本含量不够大以及胃液成分测定干扰因素较多有关,影响确切结研 究论文 论,故需进一步扩大样本含量,并进一步建立动物模型,排除干扰因素, 方可得出正确结论。 小 结 .胃底腺息肉组胃液中值低于对照组,而增生性息肉组胃液 值高于对照组,但统计学处理两组之间无差异。提示两种可能,一是样本 例数过少,影响结果;二是值确实对胃底腺息肉及增生性息肉形成没 有直接影响。 .胃底腺息肉组和增生性息肉组胃液中胆汁酸的含量均高于对照组, 但统计学处理无差异,提示一是胃液中胆汁酸与息肉形成确实无直接关 系;二是由于样本例数过少影响检测结果。 月旦汁酸及胃液酸碱环境是否影响胃底腺息肉和增生性息肉形成和 生长尚无确切定论。研究论文 参考文献 , , .. , , :?. , , , 。 ,: ., , , . 也. . ,:? . , , , .:. .,. : ?:? ,, . . , , ,. ,,:. , , , /一 : . ,,.. ,? ,,: .,.,... ,, , :? . ..,.,.., ,, ? ,. 研究论文 ? , , ,. ., ., , , . ,:? ., , , . ?. , ,:?. / ,,, 一? ? . ,, :. . , , , . ,,:? . , , , ,. ,:? ,.. ... ,,:?. , , , . , ,:? . , , , ., ,:? ,;,;,; . :. , , :.研究论文 . , , , :, , .. , , ,, .,:? , . , , . ,,:. 研究论文 第二部分蛋白、在胃底腺息肉和胃增生性息肉 中的表达及意义 .?上 刖 菁 国内外对于息肉的研究认为,胃底腺息肉与类抑酸药的长期应用 有关,而增生性息肉与胃炎、胃粘膜萎缩和感染有密切关系;而且有 学者发现二者有恶变可能,也有学者却认为胃癌与良性息肉无关。但对于 胃底腺息肉和增生性息肉的发生发展机制仍不明确。 .连锁蛋白基因啪位于【,是由条多肽链组成的分子 量为~ 的胞质内蛋白,在细胞:一是结合型.参与细 胞间黏附作用,.连环蛋白是一重要的细胞黏附分子;二是游离型。连 环蛋白是信号通路中的个重要组成部分,是其正向调节因素,这两 种作用均与肿瘤的发生发展有关。而多项研究表明.在细胞膜表 达减少都可使细胞失去黏附功能导致细胞分散日’。 是高分子量的糖蛋白,是构成粘液层的主要成分,基 因是等人于年从人胃文库中所克隆到的一种粘蛋白基 因,主要分布于胃腺的基底部,粘蛋白对胃粘膜起到保护作用,能保护 上皮细胞不被酸碱、机械损伤、酶类和致病菌所损害。是一种幽门 型粘蛋白,曾认为仅在正常胃和胆囊中有高水平表达但事实上,在食 管癌【,肺癌【,结肠癌【】,和乳腺癌【】中均有表达。 多年来,学者对.蛋白、与胃恶性肿瘤研究甚多,也 明确证实了.蛋白、异常表达确实与肿瘤的发生发展存在 直接关系,但是对于为胃底腺息肉和增生性息肉组织中.蛋白、 有无变化,对胃底腺息肉和胃增生性息肉有无影响,尚无确切报道, 本研究通过免疫组化方法检测.、在息肉中的表达水平, 来研究.蛋白、在胃底腺息肉和增生性息肉形成中的意义。研究论文 材料与方法 组织标本 所有入选息肉组患者行胃镜检查时咬取典型息肉组织块,其中 例息肉患者,于息肉旁处咬取正常粘膜组织块,作为对照组。标本 均置于%福尔马林溶液固定,石蜡包埋,经染色后行病理检查,确 定为胃底腺息肉和增生性息肉以及正常胃粘膜组织后,标明病例信息,将 蜡块常温保存,待检。如. 对照组组织入选标准:病理诊断为正常胃粘膜组织,伴有炎症、肠化、 萎缩、不典型增生者除外。 方法 .实验器材 .型病理切片机:湖北康龙电子科技有限责任公司 显微镜:日本公司 .高清晰度彩色图像采集系统:中国武汉 .主要试剂 鼠抗人.蛋白单克隆抗体:北京中衫金桥生物技术有限公司 鼠抗人单克隆抗体:北京中衫金桥生物技术有限公司 .免疫组化试剂盒:北京中衫金桥生物技术有限公司 磷酸盐缓冲液:北京中衫金桥生物技术有限公司 山羊血清工作液:北京中衫金桥生物技术有限公司 通用二抗工作液:北京中衫金桥生物技术有限公司 辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液:北京中衫金桥生物技术 有限公司 显色液:北京中衫金桥生物技术有限公司 .免疫组织化学法 采用.法检测息肉组织中.蛋白、的表达。 ..石蜡切片,常规脱蜡; ..水化:无水酒精、各分钟,%,%,%,%的酒精各 分钟,自来水浸泡分钟,磷酸盐缓冲液浸泡分钟。 ..抗原修复:切片浸入抗原修复液中,微波高火分钟,低火分钟,研究论文 室温冷却。 .. 冲洗分钟,洗遍; ..消除内源性过氧化物酶活性:%双氧水孵育分钟,冲洗 分钟,洗遍; ..滴加山羊血清工作液,室温孵育.分钟,倾去,勿洗; ..滴加一抗,在室温放置分钟,放入冰箱。过夜; ..第二天,室温下放置分钟,液冲洗分钟,洗遍; ..滴加通用二抗工作液,室温孵育.分钟,液冲洗分钟, 洗遍; ..滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液室温孵育.分 钟,液冲洗分钟,洗遍; ..显色:滴加新鲜配制的显色液,分钟,蒸馏水充分水洗。 ..复染:苏木素秒钟,过水次,盐酸酒精一过,过水次,氨 水分钟,过水,脱水依次%酒精、%酒精、无水酒精各分钟; 封片。 .结果判定 免疫组化完成后所有标本均在电子显微镜下观察,正常胃黏膜上皮细 胞.蛋白表达呈强阳性,表达部位相似,主要定位于细胞膜及细 胞间质,呈黄色网格状分布,均匀一致,细胞质和细胞核表达阴性。正常 胃粘膜中有的高表达,定位于细胞膜和细胞浆,阳性表现均成棕黄 色颗粒。 参照 刁的计数方法,根据阳性染色细胞比例评分为,分: %一%;分:%.%; 分:%;反应强度分为分:色浅:分: 色中;分:色深。评价胃底腺息肉组、增生性息肉组和对照组组织中 .蛋白及表达水平,根据免疫组织化学染色后的染色细胞比例 和染色细胞强度分别评分,将二者的乘积记录为每位研究对象的最后积 分,计算平均值,记录如.,并选取典型区域进行图像采集如 、 .?,。 统计学处理 应用.统计软件进行数据分析,计量资料正态分布数据用均数 ?标准差戈?表示;各组间两两比较采用单因素方差分析或非参数研究论文 检验,.认为有统计学意义。 结 果 .胃底腺息肉者年龄平均值为..岁;胃增生性息肉患者年 龄平均值为..岁;对照组年龄平均值为. .岁。三组男 女性别比例分别为::,:,:。两实验组与对照组性别及年龄均无 差别。 .胃底腺息肉组息肉分布位置为胃窦例,胃体例,胃底例; 增生性息肉组息肉分布位置为胃窦例,胃体例,胃底例。 屑底腺息肉组.蛋白表达水平比对照组降低,两组进行统 计学检验..,结果有统计学意义;胃底腺息肉组表达 水平比对照组降低,两组进行统计学检验..,结果有统计学意 义。 .增生性息肉组。蛋白表达水平比对照组降低,两组进行统 计学检验..,结果有统计学意义;增生性息肉组表达 水平比对照组降低,两组进行统计学检验..,结果有统计学意 义。 .胃底腺息肉组旦.蛋白表达水平比增生性息肉组高,两组进 行统计学检验..,结果有统计学意义;胃底腺息肉组 .,结果有 表达水平比增生性息肉组高,两组进行统计学检验. 统计学意义。 .增生性息肉组有息肉组织标本中个别细胞细胞质中出现. 蛋白阳性染色,属于异常表达。如.“研究论文 附 图.. 研究论文. 攀?瓷罄爹妻嚣 一 蒸黪乏翘一 研究论文 . ?一 . × 研究论文 一 . ×.×研究论文 .× . × 研究论文 . 一 .×、一. , 一 , 一一 一 一研究论文 千 .一 × .×研究论文. ×一??????????????????????????????????????????????????????一 研究论文 附 表,? 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