弓形虫感染鼠血清中弓形虫循环抗原的检测

弓形虫感染鼠血清中弓形虫循环抗原的检测 弓形虫感染鼠血清中弓形虫循环抗原的检 测 f一7ff中国寄生虫学与寄生虫病杂志1999}17(2)t117,118ChineseJournalofParasitologyandParasiticDiseases?117? 弓形虫感染鼠血清中弓形虫循环抗原的检测 金武官李云珠俞善昌杨惠珍钱宗立__———,?—————, 1上海第二医科大学附属瑞金医院儿科上海200025 2上海第二医科大学寄生虫学教研室上海200025 R|. 提要耳的:探索弓形虫感染早期诊断.方法:用快速ELISA检测弓形虫感染鼠血清中弓形虫循环抗 原结果:在轻,中,重3个感染组,分别于感染后d4,d4及d3检测到弓形虫循环抗原.结论:感染虫体数量 越多则弓形虫循环抗原测出时阿越早,OD值亦越高检测弓形虫循环抗原具有早期诊断价值. 弓件话弓形虫病缺乏典型的临床症状,诊断主要靠实 验室检查.1975年前,其诊断主要用血清学检测抗 体的方法,但往往难以区分早期急性感染和慢性感 染.在有些情况下,如患先天性弓形虫病的新生儿, 弓形虫感染并伴有严重免疫抑制的患者,就不能根 据抗体的检测作出诊断.Raizman等(1975)首次在 实验感染弓形虫的兔和鼠血清中测到弓形虫循环抗 原,证实具有早期诊断价值而引起关注Van Knapen[1:和Axaujo等0用ELISA检测急性弓形虫 病患者,进一步发现人血清中弓形虫循环抗原的存 在.Brooks口对检测到的弓形虫循环抗原作定量研 究,用dot—ELISA测定血清中循环抗原,灵敏度达 4O一130pg/ml.我国弓形虫病研究起步较晚,仅少 数单位开展了弓形虫循环抗原的研究.本文用快速 ELISA检测实验感染弓形虫小鼠血清中的弓形虫 循环抗原,以期为临床早期诊断弓形虫病提供有效 方法. . 材料与方法 鼠抗弓形虫镛环抗原的制备实验分为轻,中, 重3个感染组,每组小鼠2O只,每只小鼠腹腔接种 RH株弓形虫速殖子依次为1×1O',1×1O及1X 1O个,另3O只正常小鼠平行对照.各感染组接种 弓形虫后分别于24,蚰,72,96,12O及144h采 集外周血,离心后取血清,一2O?保存.每次取5 只正常小鼠外周血作对照 兔抗弓形虫IgG的制备按多点免疫法人工 获高价血清后,用LKB层析柱DE一52提 感染家兔, 取弓形虫IgG(效价1t40000). 兔抗弓形虫醵结舍物的制备参照郭春祥方 法进行. 快速ELISA参照Araujo法加以改进.分别取 兔抗弓形虫8O,4O,2O,10,5~g/ml作为包被抗 体,取兔抗弓形虫IgG酶结合物,以1:200,1: 800,11600,1;3200浓度作棋盘滴定,加底物 后分别于37"C或室温下放置5,10,15,20rain作 比较,确定的ELISA最适条件:抗体包被浓度为2O ~g/ml,结合物浓度为1:400,室温下15min中止 反应,血清样本用PBS稀释,以1:10稀释度加样. 操作步骤为:抗体包被后置冰箱过夜,PBS冲洗后, 每孔加5Ol样本后即加入5O酶结合物,于 37"C孵育1h,冲洗后加底物于室温下放置15rain, 用硫酸中止反应,在酶标仪上读数.结果判读:待 测样本OD值/阴性样本OD值(P/N)>2.1判为 阳性. 结果 实验结果显示,轻感染组小鼠于感染后96h, 有1只小鼠血清弓形虫抗原阳性(1/5),120h有2 只阳性(2/5),144h有2只阳性(2/3).中感染组 于感染后96h,有2只阳性(2/5),120h有5只 阳性(5/5),144h有2只阳性,余均死亡.重感染 组于感染后96h,有5只阳性(5/5),120h后小 鼠全部死亡.正常对照组全部阴性(1). 讨论 本文用EuSA法检溯RH株弓形虫速殖子感 染小鼠血清,检测到弓形虫循环抗原.检测结果表 明:轻,中,重不同感染组,感染的虫数越多则循环 抗原测出的时间越早,OD值亦越高.观察发现感染 鼠于d3出现竖毛及不活泼等症状,轻感染组与中 感染组d4症状加重,d6全部死亡;重感染组d5全 部死亡循环抗原测出的时间及浓度梯度与小鼠急 性发病时f可及症状轻重相平行,表明检测血清中弓 形虫循环抗原具有反映宿主急性感染期的价值.不 同弓形虫株感染鼠血清,弓形虫循环抗原出现的 ?118? 丧1ELISA捡测感集弓I瞽虫鼍囊子后不同时闻小?血清中循环抗原结暴 Table1ResgltsotELISAdt4ec~~~culztln8a?m'ceInfectedwlthTo.t~plaam 阳性鼠披/检测鼠披No.miceB?t/o.exammed 时间早晚不同.eYH等研究表明,RH抹感染后 弓形虫循环抗原出现较早,于感染后d2即可测出. 而Beverley株感染后弓形虫循环抗原出现较晚,于 感染后dlO测出.弓形虫循环抗原在血清中的消长 有一定规律.郭小华等1观察到,在实验动物中 64.7在感染后dl血清中测出弓形虫循环抗原, 在dl0—13达到高峰,d60—90消失.进一步证实 了弓形虫循环抗原出现在感染的早期.Aeebes等一 分别检测弓形虫抗体IgM,IgG,弓形虫循环抗原 (cA),免疫复合物(Ic),以区分急性和慢性弓形虫 病.结果,在高抗体滴度IgM组可以i00测到 CA和Ic,在亚急性和慢性感染组,IgG占优势为 100.结果显示,CA是急性弓形虫病的一个主要 标志 参考文献 1VanKnapenF.Detectionofcirculatingantig皿duringacuteinfec— donswithTozopZarnsagondiibyenzym~llnkedimmunc~orbentas- say.JCfinMiezoKol1977I6I545 2AxaujoFG,R曲?nJslAmignemiain/e~entlyacquir~l~tCUte tcatoplasmc6is.JInleztDis1980I141I144 3BrooksRG,Sharm8SD,RemingtonJslDetecti~aofT删 ge~dl/,JCbnMicrobiol1985'21I113 4郭春祥,郭镥琼.舟绍一种简单快速,高效的辣根过氧化物酶标 记抗体的过碑酸钠法.上海免疫学杂志1983I897 3LeeYH,KinKY,MS.DetectionofT"砷andgem 州~Jbodlean?'efe:withdiffexe~ts口ainsofT0.h",,砒 哪.KoreanJparasitol1995'33'2O1 6郭小华t陈观今,毛扣秉锟,等.弓形虫摩染的循环抗原检测的研 究.中国寄生虫学和寄生虫病杂志1991I9178 7AcebeBMV,1)ie~B,M~rtlnMT,eta1.S~'o/ogicMpa|a眦t盯sfor then0舶andfoIl1.w-upoftoxopiasmc*is.Experimentalmod— els.EafermlnfectMkrobiolClin1994Mal*I12(3)t141—145 1998年l2月4日收稿1999年3月10日恪回 (编辑:庄兆农) DETECToNoFCIRCULATINGANTIGENINSERAFRoM MICEINFECTEDWITH嬲DPLc4_SMAAC日yzD乃'醪 JWuguan,LIYunzhu,YUShaneang,YANGHuizhen,QIANZong~ 1砷哺删.~dlatricMedldr~,R畦H坤,Sgs6c帆dMedicalUtdz~rslty,Shanghai200025 2DelAcr'On*r~.P辩?畦.g,,Sb~ghm'SeamdMedlcalU一,,Sgt200025 ABSIlRACT AIM:ToexploreanassaymethodfortheearlydiagnosisofToxoplasmainfection.METHODS:Serum samplescollectedfromthreegroupsofmiceinfectedexperimentaUywithdifferentdosesofToxoplasmatropho- 砌 weredetectedforthepresenceofToxoplasmadrctdatingantigenbyusingfastELISA.RESULTS:Toxo- plasmacirculatingantigenwasdetectedondays4,4and3afterinfectioninfight,moderateandheavyinfection groups,respectively.CONCLUSION:Thelevelofcirculatingantigenwasinparallelwiththedurationofinfec— tion.Thedeterminationofcirculatingantigenisuseful_ntheearlydiagnosisofToxoplasmainfection. Keywords:Toxoplasmagondii,circulatingantigen,mouseserum