五草饮加减对小鼠S180肉瘤抑瘤作用的理论与实验研究（可编辑）

五草饮加减对小鼠S180肉瘤抑瘤作用的理论与实验研究（可编辑） 分类号 单位代码 密级 学 号 山亏.中医蔼大学 硕士学位论文 论文题目五草饮加减对小鼠啪肉瘤抑癌作用 的理论与实验研究 ? 研究生姓名?兰盘奏??????一 入学年月鳗生里且?????一 学科专业?虫蕴莹?????? 指导教师?张尘些?????? 学位粪型?医生叠堂堂焦??? 年 月 日提 要 本课题以中医药理论和现代药理知识为指导,对导师在多年隘床 与教学过程中形 成的抗肿瘤方剂??五草饮进行适当加减配伍,即提取其中的莪 术、仙鹤草两味已被 证实确有抗肿瘤作用的中药,另选善于活血通经,祛瘀消肿的益 母草,益气养血之黄 芪、当归组成实验方剂。理论上,结合导师的临床经验,探讨得出正虚、血瘀、癌毒 三者是癌症主要病机的结论;实验研究,观察该方对荷瘤小鼠的一般生存状况、体重、 瘤组织病理切片及血清中总、含量、免疫器官胸腺、脾脏重量等指标的 影响。结果表明经五草饮加减配伍形成的实验方剂能明显改善小鼠的生存状况、提高 生存质量、控制肿瘤的生长,从而说明“正虚、血瘀、癌毒”三者是恶性肿瘤的主要 病机理论的可行性,同时也为临床实践提供一定的指导。 关键词莪术;恶性肿瘤;理论研究;实验研究 : : : 、 , , , ,, . , , ,, , . , ,. ;; 上 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是在导师的指导下独立完成 的,文中除注明引用的外,不包含任何其他已经发表的科研成果。 对本文研究做出重要贡献者,均已在文中以明确方式表明。本声明的 法律责任完全由自己承担。 导师签名 日期塑:望:竺 论文作者签名爹生鸟 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东中医药大学有关保留使用学位论文的规定,同 意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许 被查阅和借阅。本人授权山东中医药大学可以将本学位论文的全部或 部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复印 手段保存和汇编本学位论文。 保密论文在解密后应遵守此规定 日期趔:鱼:三 论文作者签名磐导师签名蝉五草饮加战对小鼠?肉瘤抑瘤作用的理论与实验研究 引 言 恶性肿瘤,是当前危害人类健康的主要疾病之一,全世界每年因恶性肿瘤死亡的 人数高达万,我国约万左右。在一些传染病基本得到控制的国家,心血管病 和恶性肿瘤已经分别位居死亡原因的第位和第位。由于恶性肿瘤的发病率和死亡 率曰趋增高,给社会、家庭和个人带来极大负担和痛苦。因此寻求有效的治疗恶性肿 瘤的药物和方法,一直是世界医学界的研究课题。 目前,现代医学的手术、放疗和化疗等治疗手段在恶性肿瘤的治疗上尚未取得满 意效果,如只有早期病人才能进行手术,放疗的临床应用指征也很局限,化疗多有一 定的毒副作用等。而中医药在防治恶性肿瘤方面有几千年的历史,在实践中积累了大 量经验,形成了许多有效方剂。近年来大量的实验和临床实践都证明中药不仅可减轻 放疗、化疗的毒副作用,并且能有效地抑制肿瘤生长,抗肿瘤转移、复发等,同时还 能增强机体的免疫功能,如改善骨髓的造血功能,保护肝肾功能,减轻胃肠道反应等。 因此中医药在肿瘤的治疗中越来越受到医药界的广泛关注和重视。 虽然目前国内外研究者从植物药中提取出大量的抗癌药,例如长春碱、喜树碱、 秋水仙酰胺等,但这些药物实际上已经脱离了中医药的范畴。而真正受中医理论指导 的运用于抗癌的方药配伍研究却徘徊不前。本课题正是以中药配伍理论及中医传统理 论为指导对肿瘤病因病机进行再认识,提出“正虚、血瘀、癌毒”三者是恶性肿瘤的 主要病机,遵循“扶正与祛邪”的原则,结合导师多年的临床及教学实践经验,组成 实验方剂莪术、益母草、仙鹤草、黄芪、当归,从理论和实验研究两个方面初步 探讨该方剂对恶性肿瘤治疗的可行性,为中医临床抗肿瘤提供依据。山东中医药大学届硕士学位论文 理论探讨 一、历代对肿瘤的认识 中医药学是一个伟大的宝库,其中防治肿瘤的研究有着悠久的历史,各个历史时 期的中医典籍都有关于肿瘤的丰富记载。 远在殷墟甲骨文中就有了“瘤”字的记载。《周礼》一书中载有专治肿瘤的医生 称作“疡医”,其所主治的“肿疡”理应包括当今临床的肿瘤,并且主张内外结合的 治疗方法。 在战国时期成书的中医经典著作《黄帝内经》中就已有“筋瘤”、“昔瘤”的病名, 书中比较详细地描写了女性的两种常见肿瘤:肠覃和石瘕。日:“肠覃??其始生也, 大如鸡卵,稍以益大,至其成,如怀子之状”,“按之则坚,推之则移”,很类似卵巢 肿瘤的症状。至于石瘕,“生于胞中,??日以益大,状如怀子,月事不以时下”,很 合乎子宫肿瘤的某些特点。《灵枢?百病始生篇》云:“虚邪之中人也,始于皮肤,皮 肤缓则腠理开??留而不去,则传舍于络脉??留而不去,息而成积??。”留者瘤 也,此为中医对肿瘤疾病的最早记载。另外《黄帝内经》对某些肿瘤的病因病机也作 了许多论述,如认为肿瘤是由于“虚邪中人,留而不去??息而成积”,以及“喜怒 不适??积聚已留”等,外感六淫、内伤七情等各种邪气是导致疾病发生的重要条件, 脏腑阴阳失调、气血郁滞不通,均为肿瘤发生的原因。 东汉时期成书的中医古典医籍《金匮要略》对肿瘤的描述更详尽具体。其中对胃 癌的记述为:“脉弦者虚也,胃气无余,朝食暮吐,变成胃反。”又日:“朝食暮吐, 暮食朝吐,宿食不化,名日胃反。”上述的“胃反”的症状与现代临床上胃窦部、幽 门癌肿梗阻的症状相似。 晋代著名医家葛洪的《肘后备急方》对腹中瘕积作了初步描述:“凡瘢坚之起, 多以渐生,如有卒觉,使牢大,自难治也。腹中瘸有结积,便害饮食,转赢瘦。”文 中对腹部癌肿不易早期诊断,临床进展迅速,晚期恶病质等都做了较为细致的记载。 说明远在晋代,中医药对腹部癌肿已有了较丰富的认识。 唐?孙思邈著《千金要方》,首先按发病性质和部位对“瘤”进行了分类。并有 对类似当今宫颈瘤、乳腺部位肿瘤的记载,还擅长用如僵蚕、全 蝎、蜈蚣、蝉蜕等虫 类药物防治肿瘤病。五草饮加减对小鼠肉瘤抑瘤作用的理论与实验研究 宋代《卫济宝书》正式开始使用“癌”字,并指出“癌从疾初发,却无头绪,只 是内热病”,可见该书中的“癌”并非指恶性肿瘤。最早对癌的特征作简明叙述的则 是宋代医家杨士瀛,他在医书《仁斋直指附遗方论》中描写了癌的形态:“癌者,上 高下深,岩穴之状,颗颗累垂,毒根深藏,穿孔透里。男则多发于腹,女则多发于乳, 或项或肩或臂,外证令人昏迷。”此外,宋?窦汉卿《疮疡经验全书》还对乳癌进行 了描述,“捻捻之内如山岩,故名之。早治得生,迟则内溃肉烂见五脏而死。” 到了明代,江苏医家陈实功在其《外科正宗》对乳腺癌发展的过程和预后时说: “初如豆大,渐若棋子。半年:一年、三年、五年,不痛不痒,渐长渐大,始生疼痛, 。 痛则无解。??出血则臭,其时五脏俱衰,遂成四大不救。” 二、肿瘤中医病因病机 一病因病机 .六淫侵袭 肿瘤的发生与六淫邪气侵袭有关,六淫是风、寒、暑、湿、燥、火六种外感病邪 的统称。外邪导致疾病的发生,与季节气候、居处环境均有关系,能够通过口鼻或肌 肤途径入侵机体,可单独或合并其它因素共同致病。如《灵枢?九针论》言:“四时八 风之客于经络之中,为瘤痼病者也。”指出外邪“八风”停留于经络之中,使瘀血、 痰饮、浊气积于体表而成瘤病。隋代?巢元方在《诸病源候论?恶核候》中指出:“恶 核者,是风热毒气,与血气相搏结成核,生颈边,又遇风寒所折,遂不消不溃。”说 明六淫邪气侵及人体,客于经络,扰及气血,使阴阳失调,气血逆乱,日久成积,变 生肿块,或为息肉,或成恶核,或为疽、瘤等坚硬如石,积久不消则成肿瘤。现代医 学所谓的化学性、物理性、生物性等致癌因素,不外乎古人用六淫邪气或疫疠之气所 概括的外来致癌物质。 .情志内伤 七情内伤是指喜、怒、忧、思、悲、恐、惊七种情志的变化异常,致使人体气机 升降失常,脏腑功能紊乱。七情内伤与肿瘤的发生、发展、转归及预后等存在着密切 的关系。《澹寮集验方》云:“盖五积者,因怒忧思七情之气,以伤五腑,而成病也。” 说明七情过度可以影响五腑的功能,使之亏损,易招致外邪入侵,也可使之气机不畅, 脉络受阻,气滞血瘀而成癌瘤。《丹溪心法》云:“气血冲和,万病不生,一生怫郁, 诸病生焉,故人身诸病多生于郁。”指出情志抑郁,肝气不舒,脉络受阻,血行不畅,山东中医药大学届硕士学位论文 气滞血瘀,脏腑失和,日积月累而成积聚等病。《外科证治全生集》将乳岩的病因归 纳为“阴寒结痰,此因哀哭忧愁,患难惊恐所致”。总之,中医认为诸如乳岩、积聚、 骨瘤、噎膈、鼓胀、黄疸、石瘕、咽喉菌等病的发生均与情志失调有关。这种认识与 现代医学研究发现的忧郁、焦虑、失望和难以解脱的悲伤等不良情绪常常是癌症发生 的前奏,社会心理的紧张刺激会降低或抑制机体的免疫能力,造成免疫功能低下而引 起癌症的观点颇相吻合。 .饮食水土失宜 饮食不节是导致疾病发生和发展的重要原因之一,故《内经》云:“饮食自倍, 肠胃乃伤。”酒食不节,饥饱失常,损伤脾胃,脾失健运,不能输布水谷精微,湿浊 凝聚成痰,痰阻气机,血行不畅,脉络壅滞,痰浊与气血相搏结,乃成癌瘤类疾病。 如噎膈的发病与饮食关系非常密切。凡酒食过度,恣食辛辣,过食生冷油腻或不洁饮 食,酒食助湿生热,酿成痰湿,阻滞气机,使气、血、痰三者互结于食道,食管窄隘, 即酿成实证为主的噎膈;亦可使食道津血枯涸,酿成以虚证为主的噎膈。《医门法律》 亦云:“过饮,多成膈症人皆知之。”噎膈、反胃、锁肛痔、舌茵、茧唇、瘿瘤等疾病 的发生均与饮食水土失宜有密切关系。据河南、四川等食管癌高发区的资料分析发现, 约有%的患者好热饮、硬食、快食、饮酒、食用亚硝酸盐含量高的泡菜等习惯, 这充分说明肿瘤的发生与饮食致病因素密切相关。 .痰浊凝聚 祖国医学认为多种疾病的发生、发展均与痰邪的凝结和阻滞有关,肿瘤类疾病的 发生更是如此。痰湿凝聚于经络筋骨而致瘰疬、痰核或阴疽流注;留着于体表则为瘿 瘤,结于内脏则为癌瘕积聚等。《金匮要略?血痹虚劳病篇》说:“人年五六十??马 刀侠瘿者,皆为劳得之。”指出人年事已高,肾精亏虚,阴虚阳浮,虚火上炎,与痰 相搏而成瘰疬之病。 .瘀血阻滞 中医学理论认为气血以循环运行不息为常。若气血关系失调,气郁不舒,血行不 畅,导致气滞血瘀,郁结日久,必成瘕积聚。古代医家从临床观察及诊治体验中已认 识到食管癌的发病机理与“死血”有关;《古今医统》描述噎膈证时称“凡食下有碍, 觉屈曲而下,微作痛,此必有死血。”同时也认识到腹腔有形的包块肿物,也多由血 瘀所致。《内经》.中就有“石瘕生于胞中??气不得通,恶血当泻不泻,血不以留止,五草饮加战对小鼠。。内瘤押瘤作用的理论与实验研究 日以益大,状如怀子??”的记载。概言之,历代医家认为实体性癌 肿,见肿块,伴 有疼痛,多是由气滞不畅,血瘀不行,凝滞不散,日久而成瘤块。 .正气亏虚 人体一切疾病的发生和发展都可以从邪正两方面关系的变化来分析,肿瘤的发病 及演变过程就是正邪双方斗争的过程。机体的正气在肿瘤疾病的发生、发展过程中占 据主导地位。正如《外科医案汇编》所言:“正虚则为岩。”发病之初虽然患者虚候并 不显著,但已虚在其中:病至中晚期,则气血皆虚,渐显露恶病质之象。正气亏损可 以理解为三个方面:一是由于机体本身的正气不足,无力抗邪所致;二是邪气对机体 的侵害,耗伤了正气:三是由于情志、劳倦等因素造成的局部或暂时之虚。其实,在 发病之初虽然患者虚候并不显著,但己虚在其中;病至中晚期,则气血皆虚,渐显露 恶病质之象。如《景岳全书》日:“噎膈反胃名虽不同,病出一体,多由气血虚弱而 成。”其他如年老体衰、房劳伤。肾及药物的攻伐、手术的损伤等也可致正气亏损、抗 病力减退。一旦正气亏损,无以外卫,则更易招致外邪的侵袭,正 邪相互搏结,则发 本病。 二治疗原则 癌症所致的人体病理变化错综复杂,是许多致病因素相互作用的结果,欲以中药 纠正其病理改变,必须遵照祖国医学“辨证求因,审因论治”和“必伏其所主而先其 所因”的治疗法则,明辨其主要病因及所属症状,充分掌握邪正盛衰的演变,分清局 部与整体,邪正的消长及标本缓急等,进行“辨证及辨病”而施治。 .局部与整体恶性肿瘤是一种全身性的疾病,而肿瘤病灶只是全身病变的局部 表现,由于局部病变能使整体的功能失调,而整体虚损又可致局部病灶的增长,故治 应局部与整体并重。 .扶正与祛邪“正”与“邪”是疾病过程中矛盾斗争的两个方面,治疗的根本 目的就是“扶正祛邪”以改变邪正双方力量的对比,从而达到邪去正复,促使疾病向 痊愈方面转化。因此,对恶性肿瘤的治疗应一方面选用抑制肿瘤有效的药物,根据辨 证及辨病的情况,或活血化瘀,或清热解毒,或消痰散结,或以毒 攻毒等,主动攻癌。 另一方面也必须加强机体的抗癌能力,施以补益,这样扶正与祛邪二者相结合,使祛 邪而不伤正,扶正而不助邪,才能收到良好的效果。 .治标与治本在复杂多变的病证中,常有标本主次的不同,因而在治疗上就有山东中医药大学届硕士学位论文 先后缓急的区别。应遵循“急则治其标,缓则治其本”的法则,一般以原发病灶为主, 重在“治本”,或兼以“治标”;对转移的症状危害较大而超过原发病灶者,如肺转移 而出现咯血,脑转移而出现昏迷等,则应采取“急则治标”的方法以治转移灶的病症 为主。 三临证治法 .扶正补益法 恶性肿瘤病人的体质多为本虚标实,即使在肿瘤的早期,往往有局部之虚证的存 在,只是由于邪气较盛,正虚的一面易为人忽略而已:病至中晚期,由于邪正相争, 邪气不断损害正气,正虚表现日渐明显,故常出现神倦乏力、心悸气短、头昏腰酸等 一系列证候。许多实验表明,中医虚证常有机体免疫功能的下降, 特别是细胞免疫功 能的下降。而补气、滋阴、养血、助阳一类扶正中药具有增强机体免疫功能的作用, 能补充人体气血阴阳之不足,可改善症状,减轻放、化疗毒副反应,并通过扶正补益, 提高机体免疫功能而有效地抑制肿瘤的生长与发展,从而延长患者的生命。扶正补益 法在临床上多见益气养阴、健脾理气、益气温阳等具体应用形式。众所周知,参麦注 射液是治疗气阴两虚证的典型方药。有关研究表明“’参麦注射液配合化疗能够提高 肺癌患者。和;/比值及、的活性,说明参麦注射液对细胞免疫有良好的 调节作用。周荣耀等。用由发酵虫草菌粉制成的纯中药制剂百令胶囊治疗例胃肠 道恶性肿瘤手术和化疗属气阴两虚证和免疫功能低下的患者并与未用百令胶囊患者 作对照,治疗组在提高和方面与对照组之间有显著性差异.,;和 。/。与对照组比较.,。两组无显著性差异,说明百令胶囊能够提高胃肠 道恶性肿瘤患者因手术和化疗引起的免疫功能低下。涂文升等“用具有益气养阴、补 血活血功效的复方锗制剂党参、黄芪、枸杞子、绞股蓝、有机锗等治疗一般气阴两 虚证和接受放化疗的肿瘤病人共例,结果表明能够提高、、及水 平,尤其对细胞的提高有显著性统计学意义.。罗长义”用益气养阴方生 黄芪、北沙参、生白术、天门冬为主,酌情配伍清热解毒、软坚散结药,每日剂, 个月为个疗程,治疗气阴两虚型晚期肺癌例,结果、细胞活性、 分泌水平显著提高,水平呈双向调节作用。另外,在提高细胞同时降低细 胞数,从而提升/比值。曹阳等“用益气养阴方沙参、麦冬、五味子、黄芪、 白花蛇舌草、枇杷叶、贝母、胆南星连续个月,治疗晚期非小细胞肺癌,能提高 五草饮加减对小鼠肉瘤抑瘤作用的理论与实验研究 细胞活性,治疗前后有显著性差异.。临床肿瘤患者由于长期应用化疗药 物或其它抗癌药物,多出现脾胃虚弱的症状,故每证常用黄芪、党参、白术等补气健 脾药物进行治疗,既可改善症状、防止恶化、延长生存期,又能减轻放化疗毒副作用, 提高生存质量。 .行气散结法 诸多致病因素使气机不畅而发生气滞,气滞又可导致血瘀,久之成瘾瘕积聚,正 所谓“百病生于气”。临床中,胃癌、食管癌多见胸脘胀闷、嗳气、疼痛等症;肠癌 常出现下腹部胀痛、大便里急后重;乳腺癌见肝气郁结、乳房胀痛等,无不与气滞、 气郁有关。运用理气药行气散结,可使气机调顺,改善癌细胞影响机体所造成的气机 紊乱状态,从而达到抑制癌细胞生长的作用。 .活血化瘀法 瘀血凝滞,久成瘾瘕,正如前人所述“肚腹结块必有形之血”。肿瘤病人临床多 有血瘀征象。或见面色黯滞,肌肤甲错,肿块硬而固定,胀满不舒,痛有定处,如针 刺刀割,或见腹部青筋显露,舌青紫或有瘀斑,脉涩等。故应活血化瘀,疏通脉络。 现代药理研究证实肿瘤患者的血液流变学表现为高凝、高黏状态,并有外周微循环障 碍”’?。活血化瘀法具有直接的细胞毒作用,抗突变作用;能抑制肿瘤细胞增殖,诱 导分化;能减弱血小板凝集,使癌细胞不易在血液中停留、黏附、 聚集、种植,从而 减少转移;能诱导肿瘤细胞凋亡;能影响微循环,增加血管通透性,以改善瘤组织局 部的缺氧状态,提高放化疗敏感性:能提高抗体、补体水平,增强机体免疫力,抑制 纤维母细胞亢进的胶原合成作用,预防或减少放疗引起的组织纤维化。。李萍萍等“” 通过实验提出益气活血复方黄芪、当归、白术、川芎、红花、莪术、地龙等对肿瘤 细胞的微管有明显的改进作用,使肿瘤细胞丧失的间隙连接通讯功能得到恢复,可使 恶性肿瘤细胞的细胞膜和核仁发生改变,趋向正常细胞。由地龙、海龙、龙葵、三七、 苏木等活血化瘀药为主组成的抗癌方药三龙制剂对小鼠艾氏腹水癌具有良好的抑制 作用,能使荷瘤小鼠生存期延长。同时该药活血化瘀抗渺血栓作用明显,且高浓度 优于低浓度,具有一定的量效关系?。由红花、丹参、川芎等组成的癌痛宁口服液, 能显著降低全血高切、低切黏度及纤维蛋白含量,并能降低血小板黏附率及体外血栓 指数,从而改善微循环,起到抗癌止痛的作用“”。周阿高等“” 应用小金丸加减马钱 子、当归、制乳香、制没药、五灵脂等治疗中晚期胃癌术后患者例,加服西药,山东中医药大学届硕士学位论文 结果、.、年生存率分别为.%、.%、%““,说明合理应用活血化瘀 药对胃癌治疗具有重要作用。 .燥湿化痰散结法 古人日“顽痰生百病”。肿瘤的形成与痰湿密切相关,清代高锦庭说:“癌瘤者, 非阴阳正气所结肿乃五脏瘀血浊气痰滞而成。”临床亦证实,痰在肺则咳吐脓血如 肺癌,在胃则呕吐痰涎胃癌,流窜皮下则结成痰结、瘰疬、瘿瘤。现代药理研究 表明,许多燥湿化痰类药物能减少水肿,并能促进炎性渗出物或者其它病理产物的吸 收消散。郑广娟“”用燥湿药物进行了抗肿瘤侵袭和转移的实验研究,结果发现某些燥 湿药物对肿瘤的侵袭和转移有阻断作用。魏品康认为,胃癌最基本的病理环节是痰浊 内阻,痰浊是胃癌发生、发展的极其重要的物质基础,在胃癌的产生、发展及转移中 起着重要作用。因此,魏老认为,消痰散结是治疗胃癌及其转移的基本法则,多选用 半夏、制南星、全蝎、蜈蚣、僵蚕等化痰散结药物治疗胃癌,效果明显“”。 .清热解毒法 恶性肿瘤特别是中晚期患者常有肿瘤局部炎症、感染、癌性毒素对机体作用出现 的热毒症表现,如发热、肿块增大、局部灼热、疼痛、口渴、便秘、舌红苔黄、脉数 等全身症状。局部症见如乳腺癌的流脓溢血,肺癌的脓血痰浊,宫颈癌的带下臭秽等。 现代药理研究证明清热解毒药能促进淋巴细胞转化,激发或增强淋巴细胞的细胞毒作 用,增强或调节巨噬细胞作用,提高骨髓造血功能;具有一定抑菌作用,能抑制炎性 渗出或增生,从而控制或消除肿块及其周围的炎症和水肿,缓解症状“?;抑制肿瘤生 长与恶化。如白花蛇舌草、重楼、蒲公英等有明显的直接或间接的抑制和灭杀癌细胞 的作用“、”。刘晨江“”等研究发现冬凌草粗剂对细胞有明显的细胞毒作用,对 艾氏腹水癌。。。均有明显抗肿瘤作用,冬凌草甲素对?“指数生长期”、“坪期”细 胞均有明显的抑制作用,对周期中期和非期细胞、期细胞和非周 期中细胞 均有不同程度的杀伤作用。韩明权?用复方半枝莲汤半枝莲、蒲公英、黄连、黄药 子、全瓜蒌等治疗例食管癌,总有效率为%;韩明权引张金生等”运用“抗 癌乙片”黄药子、拳参、北豆根、夏枯草、败酱草和白鲜皮组成,每日口服片, 对食管癌前病变进行阻断性治疗,与安慰剂随机分组对照,结果抗癌乙片组年和 年内的食管癌发病率分别为.%和.%,安慰剂组分别为.%和.%, .。抗癌乙片服药组.年后检测血清脒含量,结果均明显低于对照组.。五草饮加战对小鼠肉瘤抑瘤作用的理论与实验研究 三、对肿瘤中医病因病机的再认识 一正虚、血瘀、癌毒三者是癌症的主要病因病机 恶性肿瘤的病因病机十分复杂,涉及到正虚、气滞、血瘀、痰凝、湿聚、热毒等 诸多方面,临床用药各不相同,古今医家论述各有侧重,众说纷纭,难得要领。中医 药欲在恶性肿瘤的治疗上有所突破,由原来的辅助地位上升到主导地位,关键在于明 确恶性肿瘤致病的主要病因病机,根据病机寻求确有疗效的抗癌基础方剂。因此有必 要对肿瘤的中医病因病机进行再认识。 .正气亏虚是癌症产生的病理基础 在发病上,中医强调“邪之所凑,其气必虚”。虚,即正气亏虚,主要是指机体 脏腑功能减退,气血阴阳不足而言。正气亏虚是肿瘤产生的病理基础,在正虚的条件 下,内外合邪,毒邪留滞,而成肿块,致发肿瘤。正如《医宗必读》指出:“积之成 者,正气不足,而后邪气踞之。”张洁古称:“壮人无积,虚人则有之。”《圣济总录》 论瘤:“瘤之义,留滞而不去,气血流行,不失其常,则形体和平,无或余赘,乃郁结壅塞,则乘虚投隙,瘤所以生。”现代医学免疫学的有关研究也支持正虚是癌 症发病的病理基础这一理论。研究表明,机体免疫功能减退,特别是细胞免疫和体液 免疫能力的下降,使机体对局部细胞的突变失去了“免疫监控”,不能随时将突变的 癌细胞予以消灭,从而导致癌肿的发生发展。 .血瘀是癌症形成和发展的主要病理机制 恶性肿瘤的主要特征是肿块、有形可征、坚硬不移,属于中医血瘀证范畴。明?武 之望的《济阴纲目》称:“血结于内,变为瘸瘕,原因凝血积疾。” 清?徐灵胎说:“噎 之症必有瘀血,??阻隔胃气。”王清任亦指出:“肚腹结块,必有形之血。”研究证 明肿瘤患者血液处于浓、黏、聚、凝的“高凝状态”,被证实为肿瘤血瘀证。“,并贯 穿于肿瘤的发生、增殖、浸润和转移不同的病理阶段,临床肿瘤病人以肿块、舌质紫 黯或瘀斑,甚或疼痛、出血、消瘦为其共同特点。人体的血液循环障碍与肿瘤的发生 发展有密切关系。微循环系统是细胞进行物质交换的场所,其功能状态直接影响着细 胞的功能。一旦微循环发生障碍,引起血流滞缓,局部缺血,不能为正常细胞提供良 好的营养灌注,就为细胞突变提供了契机。反过来,恶性肿瘤一旦形成后,由于阻碍 经络通道,影响血液正常运行,会进一步加重血瘀。这样,血瘀??恶性肿瘤??血 瘀,形成恶性循环,势必加重癌症病情的发展。 山东中医药大学届硕士学位论文 .癌毒是恶性肿瘤的根本病因 正气亏虚、气滞血瘀、痰凝湿聚、热毒内蕴等诸多诱因作用于机体,久而久之 蓄积可形成癌毒。三国时期的华佗在《中藏经》就指出,肿瘤的发生非独气血壅滞而 成,更有“五脏六腑蓄毒不流”这个原因。可见癌毒是癌症发病的决定因素。 癌毒一旦形成,与正气相搏,表现为肿瘤患者的各种症候。此时如果正气强盛,抗邪 有力,则能及时消除或抑制癌毒而阻止恶性肿瘤的发生。若正气不足,抗癌能力削弱, 癌毒的致病力进一步增强,以致超过正气的抗癌力,出现临床症状与体征。癌毒掠夺 水谷精微失控性生长,致使机体消瘦,精神萎靡,体弱不支。正气难以制止癌毒的流 窜,导致肿瘤的侵袭、浸润、转移;而癌毒愈深,愈销铄人体的精、血、津、液,如 此“毒耗血,血养毒”恶性循环,则癌毒与日俱增正气与日俱减。毒势鸱张、邪毒淫 溢,弥漫全身,正气大虚,终至不可收拾的残局九。 二“正虚、血瘀、癌毒”病机形成的现代医学依据 现代医学认为,所谓“毒”泛指正常生命过程中,机体内不应存在的物质,或原 本适应机体生命活动的物质超过了生命机体的需要,而对机体形成危害者。肿瘤患者 多表现为多种毒物堆积,导致机体代谢紊乱、人体抵抗力下降。 引发肿瘤病人机体内毒物堆积与正虚、血瘀、癌毒密切相关。正虚则气血运行乏 力,影响脏腑气化功能,致使代谢废物不易排出体外,壅塞体内;血络瘀滞血行滞涩, 亦致使体内代谢产物局部堆积:癌毒是作用于病人机体的长期刺激因子,既是病理产 物,又是导致机体代谢紊乱的重要致病因子。脏腑功能在日渐堆积的代谢废物的作用 下受到损害,终致机体阴阳失去平衡,出现三焦壅滞、气化不利、腑气不通,甚至阴 阳离决的危、急、重证。 现代肿瘤生化研究证实,肿瘤患者由于肿瘤负荷的急剧增高,肿瘤细胞呈现出旺 盛的代谢状态,在这一过程中,不仅会造成机体糖、脂肪、氨基酸等功能物质代谢的 紊乱,还会导致类脂、核酸、糖蛋白、糖脂等作为细胞构造成分的代谢异常,并因此 产生体内代谢产物的大量堆积,出现消瘦、胸腹水等恶液质表现。同时代谢产物的大 量堆积又会进一步加重机体正常组织的代谢障碍,终成恶性循环“。 三辨证与辨病相结合 辨证论治在恶性肿瘤的治疗中对癌症病人表现出的脏腑虚弱,气血瘀滞,痰凝湿 聚等全身症状有着明确疗效,在缓解病情,减轻痛苦,提高生存质量等方面有着现代 五草饮加战对小鼠?肉瘤抑瘤作用的理论与实验研究 医学难以比拟的优势。但目前中医药对恶性肿瘤局部病灶“证”的实质认识还有待于 深入,对恶性肿瘤的致病因子??癌毒的认识也不足,因而缺乏对癌毒针对性更强的 根治手段。提高对癌瘤本质的认识,寻找能灭杀癌毒的针对性很强的抗癌药物,是消 除局部肿瘤病灶的有效手段。因此在辨证论治的方药基础上,再选择~些具有灭杀癌 毒的中药,即针对恶性肿瘤的局部病灶,辨证与辨病相结合,是很有意义的。 四、药物选择与组方意义 莪术的临床应用与药理研究 .临床应用 味辛、苦,性温。归入肝、脾经。功能行气破血,消积止痛。有学者搜集古今肿 瘤病方余首,其中使用莪术方达多首,且多为复方。近年来,我国 医药界对 莪术抗肿瘤的药理活性及临床应用进行深入研究,发现中药莪术油中提取的榄香烯乳 剂主要成分是以一榄香烯为主的榄香烯类化合物,具有稳定或缩小肿瘤瘤体,抑 制肿瘤细胞扩散,缓解症状及延长患者生存期的作用,是目前临床常用的莪术提取物。 沈炜。”应用榄香烯介入治疗晚期肝癌取得一定效果。认为高浓度榄香烯乳剂直接注入 肝癌内的肿瘤血管,可直接作用于肿瘤细胞膜,干扰肿瘤细胞合成。孙彤啪应用 榄香烯乳剂,每天用药剂量.~.,加生理盐水静脉滴注,每个疗程 天。治疗例癌症患者,其中肺癌例,肝癌、胃癌各例,乳腺癌、卵巢癌、食 管癌各例。治疗结果显示:有%患者瘤体稳定,生存期比较满意。程剑华等“” 用中药介入治疗原发性肝癌例莪术油治疗例,榄香烯治疗例,结果肿瘤 部分缓解例,有效率.%:瘤体缩小例,瘤体缩小率%;转阴例, 下降例,占.%;腹水征改善或消失例,占.%;黄疸减轻或消退例, 占%;肝功能恢复正常例,改善例,占%:半年生存率为.%, 年生存率为%。 .药理研究 目前对莪术抗肿瘤的药理研究主要从调节机体免疫,直接抑制和破坏癌细胞,拮 抗致癌效应等方面进行探讨。施广霞等汹等发现,莪术油对。白血病细胞有直接细 胞毒作用,可致肿瘤细胞变性坏死,且有一定灭杀效果。杨骅等啪应用四氮甲唑蓝 方法,分析了榄香烯的抗肿瘤作用,发现其能明显抑制白血病一和。: 细胞的生长,对一细胞的半数生长抑制剂量。为. /。流式细胞术山东中医药大学届硕士学位论文 证实,榄香烯能阻滞肿瘤细胞从期进入期,并诱发其细胞凋亡。凝胶电泳 及透射电镜超微结构观察都发现榄香烯诱发肿瘤细胞调亡所导致的生化与形态变化。 结果表明,榄香烯诱导肿瘤细胞调亡是其抗肿瘤作用机制的重要方面之一。石灵春啪 进行莪术油抑制小鼠肝癌试验,发现莪术油治疗组的瘤重、细胞增殖核抗原 。标记指数均低于生理盐水组., 标记指数、细胞周期素 ,表达,抑制阳性表达率,进而抑制肿瘤的 认为莪术油可能通过下调 生长。邓嵘等?研究发现莪术油明胶微球经肝动脉灌注对大鼠移植性肝癌有较好的疗 效,大鼠平均肿瘤生长抑制率为.%,平均生命延长率为.%,与对照组相比 能显著性抑制肿瘤生长.和延长大鼠生存时间.。吴晓翠用榄 香烯乳剂配合放疗对中晚期不断发展性肿瘤例患者进行治疗观察。结果:治疗前 后查血象、白细胞总数及淋巴细胞总数,对照组有显著性改变,而治疗组却无显著性 变化。两组之间有显著性差异,提示对照组机体的免疫机能受到一定损害。认为国产 榄香烯是一种较好的广谱抗癌药,既对恶性肿瘤有亲合杀灭作用,又有保护免疫机能 作用。尤其对情况差、高龄、危重患者其优越性更突出。 二益母草的临床应用与药理研究 .临床应用 味辛、微苦,性微寒,归入心包、肝经,具有活血化瘀、利尿消肿之功效。在临 床上用于月经不调、产后瘀痛、心脑血管疾病、血液病等疾病的治疗。在临床抗肿瘤 治疗中多是针对血瘀病机配伍应用。 .药理研究 降低血液黏度和抗血液凝固作用“:对例人血复合血标本与益母草注射 液及益母草碱对照品的降血黏作用进行实验观察,结果发现复合血标本加益母草注射 液或益母草碱后,血液黏度均有明显的降低,降黏实验表明益母草注射液对红细胞有 较强的解聚能力,抑制率为%。还发现益母草碱、水苏碱也有非常显著的降血黏 作用它们均是益母草降血黏的主要成分。采用益母草煎剂喂饲大鼠,然后从颈总动脉 放血进行血液凝固性测定,结果表明益母草是通过抑制血小板功能,抑制内、外凝血 功能,促进纤溶活性个环节对体外血栓的形成有所抑制。分别用尿激酶型纤溶酶原 激活剂、组织型纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原的纤溶实验,观察了余味常用活血 化瘀中药对纤溶的影响,结果在所有的中药中益母草的纤溶活性最强。五草饮加战对小鼠?内瘤押瘤作用的理论与实验研究 对、淋巴细胞的作用。“:徐杭民等用渗入法研究了前益 母草素对小鼠、淋巴细胞的影响,结果发现对由 引起活 化的淋巴细胞,前益母草素有明显的促进其增殖作用,其作用是 单独使用 的~倍,但是只能说是一个协同作用,因为其作用只有在 的作用下才能得 到体现,但是前益母草素对体液中的淋巴细胞则没有显示出增强作用,提示益母草 能够增强机体的细胞免疫功能。 三仙鹤草的临床应用与药理研究 .临床应用 味苦涩,性平,归入肺、肝、脾、大肠经。传统认为该药可收敛止血、杀虫、止 痢等,被广泛应用于临床。仙鹤草复方对肺癌的效果明显,鲍严钟。”以清肺抗癌汤仙 鹤草、北沙参等加减,治疗肺癌例,结果例肿块消失,例有效,例无效。 周岱翰等啪用解毒祛痰,?血养阴,消瘾散结的鹤蟾片仙鹤草、蟾蜍、人参等治疗 例肺癌,其中单用鹤蟾片组例,总有效率.%,年生存率%,平均生 存时间.个月。梁启明””采用益气养胃,活血散结方仙鹤草、党参、丹参等随证 加减治疗慢性萎缩性胃炎、重度肠上皮化生和不典型增生例,结果胃镜病理显效 例,有效例,无效例,总有效率.%,表明其可阻止癌前病变,有效控 制癌症的发生。朱国昌?以党参、黄芪、白花蛇舌草、仙鹤草、三七粉、蜈蚣粉等组 方,西药化疗主要以一氟尿嘧啶,治疗晚期胃癌例,结果单纯用中药治疗例, 存活例,死亡例;单纯用化疗例,存活例,死亡例;中西医结合治疗 例,存活例,死亡例。经过年随访,用中药和中西医结合治疗者较单纯化疗者 生存年限明显延长。苏德仁运用大剂量仙鹤草、红枣浓煎服,日剂, 治疗例直肠癌,连服用月余而愈。鲜仙鹤草干品、鲜白茅根 干者、红枣,水煎浓汁,日服剂,治疗例白血病,连服月余,各 种症状大为改善,能从事轻微劳动,再继续服半年后,一切正常,表明仙鹤草有抑制 癌体增殖,杀灭癌细胞作用。 .药理研究 。 目前对仙鹤草抗肿瘤的药理研究,主要是从体外细胞培养和体内给药,观察仙鹤 草不同剂型和不同成分对肿瘤细胞的增殖分裂,以及对荷瘤动物的免疫功能、存活期 和阻止正常细胞突变方面进行了探讨。冯玉书“”运用细胞染色法伊红染色时死亡细山东中医药大学届硕士学位论文 胞被染成赤色,计算被染红色的癌细胞观察了仙鹤草的提取物仙 鹤酚对小鼠肝癌细 胞的体外杀灭作用,结果./时可在小时内将癌细胞全部杀死,平均染色率 为%;生理盐水对照组小时内癌细胞示染色率为.%。常敏毅““研究发现仙 鹤草全草水煎浓缩液对小鼠艾氏腹水癌细胞有抑制增殖的效果,并有明显的镇痛作 用,且毒性低安全性高。进一步的研究发现全草的乙醇提取物对小鼠。肝癌皮下 型的肿瘤抑制率达%以上。袁静等“”用法体外检测发现仙鹤草鞣酸对人宫颈 癌、人肺腺癌和人乳腺癌,均有抑制作用,其中对最强,? 次之。由此可见,仙鹤草不论是对体外培养的肿瘤细胞,还是实验动物移植性肿瘤均 有抑制或杀伤作用,而且还能提高荷瘤动物机体免疫功能和生存期。 四黄芪的临床应用与药理研究 .临床应用 味甘,性温。归入肺、脾经。功效补气固表,利尿托毒,排脓,敛疮生肌。在临 床应用研究中,黄芪对各类癌症患者的癌性溃疡或合并感染均起到抗癌消炎、消肿祛 邪、解毒和补气活血作用。据报道“”,用黄芪~,赤芍、川芎、桃仁、红花、 葛根各,当归~,鸡血藤、丹参各~,陈皮治疗鼻咽癌。隋道敬 等“”报道,用黄芪口服液治疗肺癌、胃癌、乳腺癌等恶性肿瘤例,其中单用黄芪 口服液例,化疗药与黄芪口服液联用例,化疗后服用黄芪口服液例,疗程 分别平均为,,天。结果用黄芪口服液组部分缓解例,肿块缩小/以 上者例,胸、腹腔积液明显减少例;与化疗药联用组,胃肠道反应、骨髓抑制程 度均有明显减少;化疗后使用组复发率或转移率明显低于对照组。 .药理研究 抗肿瘤作用体内实验““,发现黄芪的热水浸出物对小鼠肉瘤抑制率为 .%,而醇提取物无效。黄芪对人肺腺癌?细胞增殖指数抑制率为.%。 用碘油溶液诱发大鼠肺癌的过程中,用黄芪注射液进行抑瘤试验,黄芪组的发癌 率为.%,对照组的发癌率为.%,两组差异非常显著。黄芪组的癌巢规整, 核分裂相极少,核空化,明显角化。黄芪对人卵巢癌细胞合成有一定抑制作用。 当药物浓度增加时,抑制作用也随之加强:随着药物作用时间的延长,对肿瘤细胞 合成的抑制作用亦有所增强。黄芪水提取物能增强多抗甲素口服液的抗肿瘤作 用。五草饮加减对小鼠肉瘤抑瘤作用的理论与实验研究 对免疫功能的影响现代药理研究证明:黄芪对机体免疫系统有广泛影响, 具有明显促进免疫活性的作用。其能促进体液免疫,增强单核巨噬细胞的吞噬作用, 刺激淋巴细胞和淋巴细胞的吞噬,并能促进自然杀伤细胞的功能,延长组织细胞 在体内的存活。黄芪对辅助细胞有明显的刺激作用,对抑制细胞无刺激作用;使 红细胞。。受体活性增加,免疫黏附功能增强““。自然杀伤细胞具有广谱抗肿瘤 活性,黄芪注射液用于体外培养的人鳞癌细胞株的裸鼠移植瘤模型,裸鼠脾细胞密度 和细胞活性均明显提高“”。 五当归的临床应用与药理研究 .临床应用 味甘、辛,性温。归入肝、心、脾经。功效补血,活血,调经止痛,润燥滑肠。 王敏玉“”将当归补血汤当归,生黄芪煎煮次,每次煮沸分钟左右, 共煎取药液,分次口服,共服药天,例癌症患者白细胞明显升高。用 药前后淋巴细胞未见明显差异,级淋巴细胞明显增加,说明当归补血汤能增强 淋巴细胞的酯酶活性。对淋巴细胞的百分数无显著的影响。 .药理研究 抗肿瘤作用现代药理研究对当归的种多糖进行小鼠体内抗肿瘤药物筛 选,结果表明,上述多糖对小鼠移植性肿瘤艾氏腹水癌、肉瘤?肺癌、黑 色素瘤,。等瘤株具有一定程度的抑制作用,其肿瘤生长抑制率可达到%,副作用 较少,且可长期用药。给接种艾氏腹水瘤的小鼠注射当归多糖可明显延长动物生存期。 若当归多糖与巨噬细胞激活因子同时存在时,激活的巨噬细胞可表现对一白血病 细胞的溶细胞作用。体外筛选当归有抑制肿瘤细胞作用,其抑制率在%~%。 对黄曲霉素。致大鼠肝癌作用的实验研究表明,从注射黄曲霉素。 前日起至停止 注射后日止,给大鼠喂以含当归的饲料,结果试验组比对照组的病灶细而小,差别 显著,提示当归有预防肝癌的作用。 对免疫功能的影响当归多糖对机体免疫功能有明显促进作用,使小鼠血清 溶血素含量增加,促进体液免疫及细胞免疫功能,有良好的诱导活性,直接激活 参与抗体反应的淋巴细胞,能显著提高小鼠对牛血清蛋白诱导的反应性。研究 表明,当归内酯可剂量依赖性促进正常小鼠及。。荷瘤小鼠混合淋巴细胞培养反应, 调节淋巴细胞亚群,增加及细胞数量,增强细胞毒细胞活性。当归山东中医药大学届硕士学位论文 内酯经体外试验,对化学因素如免疫抑制剂及抗肿瘤药物引发的的免疫抑制状态 均有明显的恢复作用,提示当归内酯可以使受损的免疫效应细胞功能恢复,并促进其 增殖,以产生功能性拮抗作用““?。 六组方意义 .组方立法依据 扶正祛邪是中医治则层次的高级阶段。明《景岳全书》指出:“脏 腑有阴阳,药 有宜否。宜阳者必先乎气,宜阴者必先乎精。”朱丹溪等倡导“凡治病,必先固正气”; “善用兵者,必先屯粮,善治邪者,必先养正。”近几十年的研究结果表明,恶性肿 瘤患者大多均有气血不足等症,其机体免疫机能低下,通过中药扶正培本可达到调整 机体免疫力,增强抗癌能力,改善患者功能状态,延长患者生存期,提高生存质量的 效果。因此,采用扶正与祛邪相结合,调整脏腑功能,补养气血,是治疗肿瘤的重要 治则。肿瘤是正气先虚,再而客邪留滞引起一系列病变的结果。肿瘤患者本身正气虚, 加之手术、放化疗等外来因素造成虚上加虚。而正气亏损又是影响肿瘤患者生存期、 生存质量,肿瘤转移之根本。针对正虚的病理机制,我们在治法上采取益气养血的方 案。方中用大量黄芪益气健脾,扶正培本,以资气血生化之源,当归甘辛而温,和营 养血,两者合用达到阳生阴长,气旺血生,改善恶性肿瘤本虚状况,提高机体免疫力。 血瘀是癌症形成和发展的主要病理机制,贯穿病程的整个阶段。 因此我们在祛邪 抑癌这个环节上采用活血化瘀的治法,本方用药性强烈的莪术破血逐瘀而消积散结, 配以善通经活络之益母草,活血通经,使有形之肿瘤邪有所出。然莪术药性峻猛,辛 散苦泄温通,有耗散之虞,故用仙鹤草收敛之性止莪术耗散之性,达到散中有收,散 收并用的目的。 肿瘤是在阴阳失衡、气血不调、五脏之气紊乱的状态下发生的。正气亏虚、气 滞血瘀、痰凝湿聚、热毒内蕴等诸多诱因作用于机体,扰乱五脏正常的生理功能,损 耗人体精、气、血、津液等物质,久而久之蓄积可形成癌毒。由于癌毒是恶性肿瘤致 病的根本因素,因此选用一些现代药理研究证实确有抗肿瘤作用的药物,如莪术、仙 鹤草等针对恶性肿瘤的局部病灶,有效地控制癌毒的增长蔓延,从而有效地保存人体 的气血精液。 .组方意义与特点 肿瘤为有形之邪,多系瘀毒夹杂相互搏结而成。癌肿一旦形成,更阻滞气血,致 五草饮加减对小鼠肉瘤抑瘤作用的理论与实验研究 瘀毒互结,故治疗可应用攻散破结之品。然肿瘤患者本身多体质虚弱,脾失健运,因 此在治疗时应在祛邪的同时注意顾护正气,补益气血。因此方中以莪术为君药,莪术 辛、苦,温,具有破血行气,散瘀止痛之功,以治瘀毒所致癌症;益母草,苦寒,具 有活血通经,祛瘀消肿之效,益母草在方中助莪术活血、通络使有形之肿瘤邪有所出, 又性偏寒?防莪术温燥之弊,为臣药;仙鹤草,涩平,具有收敛止血,补虚的功效, 能收敛有形之血,又可补益无形之气,还能防莪术破散太过,达到散收并用:黄芪益 气健脾,扶正培本;当归养血补血,活血止痛,共奏补益之效,故仙鹤草、黄芪、当 归三者共为佐使药。综观本方,各药经过合理配伍,对于肿瘤既可通过消除致病之瘀 积、毒邪等因素,以起到抗癌之效,又扶正固本,提高机体免疫能力。山东中医药大学届硕士学位论文 实验研究 一、实验材料 一实验动物 健康昆明种小鼠只,雌雄各半,由山东大学实验动物中心提供。实 验前适应 性饲养天,给予充足的水和常规动物饲料,室温~。,湿度~%,通风 光照良好。 二瘤株 肉瘤。。腹水型种鼠只,由山东医学科学院药理室提供。 三药物 莪术,为姜科植物蓬莪术 .的根茎; 益母草,为唇形科植物益母草鲫“船.的全草; .的全草; 仙鹤草,为蔷薇科多年生草本植物龙芽草 黄芪,为豆科植物蒙古黄芪栅,加日“.. .的根; 功.的根。 当归,为伞形科植物当归 以上药物均购自济南市建联药店,经山东中医药大学中药学院中 药鉴定与资源教 研室鉴定,符合《中华人民共和国药典》年版。 四实验药品的制备 .方药,莪术:益母草:仙鹤草:黄芪:当归按::::。第一次加冷 水漫过药物,浸泡分钟,武火急煎,煮沸后再用文火煮分钟,第二 次加冷 水与药物齐平,武火急煎,煮沸后再用文火煮分钟,将两次所得药液过滤混合后, 置。水浴中浓缩至每制剂相当于生药。 .方药,莪术:益母草:仙鹤草::。 .方药,黄芪:当归:。按上法煎煮。 .西黄丸水溶液 西黄丸,购于济南市建联药店,产品批号:。每蒸馏水中溶解西黄 丸.。墨兰竺垄塑壁::墨塑垄塑塑竺璺竺兰笙皇壅竺竺壅 、 ‘? .环磷酰胺注射液 注射用环磷酰胺,购于山东中医药大学附属医院门诊部,产品批号:。 生理盐水配制成/。 以上药品均置于。冰箱备用。 .实验试剂 一氧化氮合酶试剂盒比色法,购于南京建成生物工程研究所:超氧化 物歧化酶试剂盒羟胺法购于南京建成生物工程研究所;福尔马林溶液, 购于济南科利达医疗器械有限公司,以甲醛/蒸馏水/配制成福尔马林溶液。 .实验仪器 精密电子天平,瑞士,; 紫/可见分光光度计,北京瑞利分析仪器公司,一; 低速离心机,北京医用离心机厂,.; 微量移液器,上海荣泰生化工程有限公司,; 电热恒温水浴锅,北京科伟永鑫仪器厂,?。 二、实验方法 一荷瘤动物模型制备及动物分组 健康昆明种小鼠只,适应性饲养天,所示生长正常。无菌条件下,抽取接 种天的肉瘤。腹水型小鼠的腹水,用无菌生理盐水稀释成瘤细胞悬液,瘤细胞计 数为×/,于每只小鼠右前肢腋下皮下接种.““。接种后小时随机分组 给药,给药时间为天。 分组如下: 山东中医药犬擘届硕士学位论文 二实验动物的处理 第天,小鼠称重之后,摘眼球取血,转/分离心分钟,取血清,测定 血清中一氧化氮合酶、超氧化物歧化酶的含量。处死小鼠,取肿瘤组织、胸腺、脾脏, 精密电子天平称重。计算瘤重,胸腺体比、脾体比、抑瘤率抑瘤 率?/ %为实验组平均瘤重,为空白对照组平均瘤重。肿瘤组织用福尔马林液充分固 定,脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,常规切片,染色,光镜下观察其组织学变化。 三统计方法 结果用表示,用软件进行统计处理。给药前后体重比较采用随机化 配对设计资料均数的检验,给药后体重、瘤重、胸腺重、脾重、脾指数、血清中一 氧化氮合酶、超氧化物歧化酶含量的各组间比较采用方差分析。 三、实验结果 一给药前后体重比较 表 给药前后体重比较? ?与给药前体重比较.,※与空白组比较.,与方药组比较.。 给药前各组小鼠体重无显著性差异。 给药前后比较方药组、方药组、环磷酰胺组小鼠的体重与给药前体重比较有 显著性差异,且小鼠体重减轻;方药组、西黄丸组小鼠体重给药前后比较无显著性 、 差异。 给药后各组小鼠体重比较,方药组、方药组、西黄丸组、环磷酰胺组比空白 对照组体重轻,且有显著性差异;方药组、方药组、环磷酰胺组与方药组比较 体重轻,且有显著性差异,西黄丸组与方药组体重比较无显著性差异;方药组与 五草饮加减对小鼠。。内瘤抑瘤作用的理论与实验研究 方药组体重比较无显著性差异。 二各组瘤重量及其抑瘤率比较 表各组瘤重量及其抑瘤率的比较? ?与方药组比较.,?与方药组比较.,?与方药组比较.。 肿瘤抑制率空白对照组平均瘤重一给药组平均瘤重/空白对照组平均瘤重×% 空白对照组、方药组、环磷酰胺组的瘤重与方药组比较均有显著性差异,西 黄丸组、方药组与方药组比较没有显著性差异;空白对照组、方药组、环磷酰 胺组与方药组比较均有显著性差异。西黄丸组、方药组与方药组比较没有显著 性差异:方药组、方药组、环磷酰胺组、西黄丸组与方药组比较有显著差异, 空白对照组与之比较无显著差异,但方药组瘤重比空白对照组 轻。 抑瘤率由高到低为环磷酰胺组、方药组、方药组、西黄丸组、方药组。 三各组胸腺重、脾重及胸腺指数、脾指数比较 表各组胸腺重量及