HPLC法测定晕痛定胶囊中阿魏酸的含量【精品分享】

HPLC法测定晕痛定胶囊中阿魏酸的含量【精品分享】 【摘要】目的,建立晕痛定胶囊中阿魏酸的HPLC定量测定方法。方法,选 用岛津C18色谱柱,甲醇-0.5%冰醋酸,350:650)为流动相[1],检测波长为 320nm [2],流速1. 2ml/niin。结果,阿魏酸在0. 0068?0. 068|J g范围内线 性良好,回归方程 Y=5E+07X-63525,「=0.9983 (0. 0068?0. 068p g),加样 回收率为94. 23%。结论,该方法准确、灵敏、方便。 【关键词】高效液相色谱法晕痛定胶囊阿魏酸量 晕痛定胶囊是河南龙都制药有限公司自行研制,由SFDA批准独家产权保护 生产的抗偏头痛、眩晕首选药物。目前研究成果表明其中蜜环菌菌丝溶液发酵 物与天麻有相似的药理作用,川芎中的川芎嗪和阿魏酸较明显地扩张冠脉、增 加冠脉流量及心肌营养血流量,使心肌供氧量增加,促进心肌供氧和耗氧的平 衡。此外,其有效成分阿魏酸,体外实验表现抗血栓形成作用,能缩短血栓长 度、减轻血栓干重和湿重。目前该品的相关药品收载于《卫生部药品标准》 新药转正标准,第二册,,其中仅包括性状鉴别及蜜环菌发酵培养物与川芎的定 性鉴别。对其发挥主要药理作用的蜜环菌菌丝溶液发酵物、川芎嗪和阿魏酸的 含量测定方法尚未建立。目前国内外相关文献尚无关于晕痛定中阿魏酸含量测 定方法的报道,本研究主要以建立晕痛定胶囊中阿魏酸的HPLC定量测定方法为 目的展开讨论。 1仪器与试药 1.1仪器 岛津LC-10AT色谱仪,岛津SPD-10A紫外检测器,N2000色谱工作站。 1.2试药 阿魏酸对照品,中国药品生物制品鉴定所,晕痛定胶囊,由河南龙都制 , 药有限公司提供,,批号,061207;甲醇,一级色谱纯乙醇,天津四友,,乐 百氏纯净水,其它试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱,岛津C18色谱柱。高效液相色谱仪,岛津,LC-10AT;检测器,岛 津,SPA-10A;数据处理系统,N2000。流动相,甲醇-0.5%冰醋酸,350: 650), 流速,1.2ml/min检测波长,320rnn;进样量,20ul,在上述色谱条件下,阿 ; 魏酸的保留时间为23min左右。理论塔板数按阿魏酸峰计算应不低子4000,分 离度达到1. 5以上。 2.2对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品25mg,置100ml棕色瓶中加甲醇-5%冰乙酸,1: 4) [1]至刻度,得A溶液,再取A溶液10ml置100ml棕色瓶中加甲醇-5%冰乙酸 (1, 4)至刻度,摇匀,即得。 2.3供试品溶液的制备 取本品10粒,求出平均粒重,0.5g),研细,精密称取一粒重,置具塞锥 形瓶中,精密加入50%乙醇25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,补足减 失的重量,摇匀,放置,取上清液,过0.45m滤膜,即得。 2.4样品空白对照溶液的制备 精密称取蜜环菌菌丝溶液发酵物0. 5g,研细,置具塞锥形瓶中,精密加入 50%乙醇25ml,称定重量,超声处理30min,放冷,补足减失的重量,摇勻,放 置,取上清液,过0.45m滤膜,即得。 2.5测定法 分别吸取对照品与供试品溶液20p 1,注入液相色谱仪,测定。用外标一 点法计算。 2.6试验结果 2.6.1阴性对照试验 分别制备样品溶液、阿魏酸对照溶液、样品空白对照溶液,在上述色谱条 件下分别注入液相色谱仪,得色谱图,图1?3)。结果显示,在药材溶液和样 品溶液色谱图中,与对照品溶液色谱图阿魏酸峰相应保留时间处有相应的峰出 现,空白对照品在对照品溶液色谱图阿魏酸峰相应保留时间处无干扰。 2.6.2线性关系考查 取阿魏酸对照品精密称定,加甲醇-5%冰乙酸,1: 4)制成每lml含3.4rag 的溶液,精密量取该溶液lml置100毫升容量瓶中加甲醇至刻度,摇勻,得甲溶 液。再精密量取甲溶液lml置100毫升容量瓶中加甲醇至刻度,摇匀,得乙溶 液。分别精密量取乙溶液lml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、10ml,分置7个 100ml容量瓶中,加甲醇定容,照2. 5项下测定方法分别测定。数据结果见表1。 表1阿魏酸峰面积与进样量的线性关系,略, 回归方程和浓度范围为: Y=5E+07X-63525「=0. 9983 (0. 0068?0. 068p g) 标准曲线为基本通过原点的一条直线,所以可用外标一点法测定计算阿魏 酸的含量。 2.6.3精密度试验 照2. 5项下测定方法,分别取2. 3项下供试品溶液重复测6次,测定峰面 积。结果见表2。表2精密度试验,略, 2.6.4稳定性试验 照2. 5项下测定方法,取2. 2项下对照品溶液,每隔2h进样1次,结果见 表3。表3稳定性试验,略, 2. 6. 5回收率试验 精密称取批号为061207,已知含量,0.0104rag/粒,的样品一粒,重0.5g) 置具塞三角瓶中,依2. 3项下制备方法制备,在制备所得溶液中加 0. 0250mg/ml的对照品溶液lml,依2. 5项下测定方法测定。结果见表4。表 4回收率试验,略, 2.6.6样品测定 取本品10粒,求出平均粒重,0.5g),研细,精密称取一粒,重 0. 4978g),依2. 3项下制备方法制备,所得样品溶液依2. 5项下测定方法测定, 测得峰面积为454251. 343代入线性方程求出每粒样品中含阿魏酸0. 0104呢。 2.7结果 采用HPLC法测定晕痛定胶囊中阿魏酸的含量,方法操作方便,精密度好, 结果准确可靠。 3讨论 该法对子测定晕痛定胶囊中阿魏酸含量专一性强,灵敏度高,样品较稳定, 精密度和回收率好。 该法保留时间过长,可通过增加流动相中甲醇的比例来相应缩短保留时间。 本研究所采用提取方法所得阿魏酸含量太低,可通过增加提取时间及提取 次数,然后浓缩来提高其浓度。 阿魏酸为弱有机酸,化学性质不稳定,在制备标准品时可在标准品溶液中 加入一定量5%冰乙酸[1]。另外样品溶液应当在制备后马上测定含量,以防 止阿魏酸分解影响测定结果。 【参考文献】 1贾晓斌,施亚芳,黄一平.当归和川芎中阿魏酸高效液相色谱法测定方 法的改进.中成药,1998’ 20 (6) , 57. 2国家药典委员会.中华人民共和国药典2000年,一部,,2000,313.