载脂蛋白B（APOB）方法学验证

载脂蛋白B（APOB）方法学验证 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•196 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 2.0 载脂蛋白B(APOB)方法学验证 , 该项目第一次验证时间2006-09-28--2006-12-15，第二次验证时间 2007-05-15—2007-07-25。 , 由于仪器、方法、场所、设备均未改变，第二次增加了批间精密度、准确度、灵敏度及 干扰物质的引用及验证。 , 验证人员:宗智慧、陶然。 一(检测系统信息: , 项目:载脂蛋白B(APOB) , 仪器:罗氏模块化全自动生化分析仪Modular P800【SDA(I)20033400462】 , 试剂及厂商:罗氏诊断产品公司【SFDA(I)20053402135】 , 检测方法:免疫比浊法 二(厂商的相关参数: 需验证参数 厂商参数 验证结果 分析灵敏度 (lower detection 0.15 g/L 沿用厂商参数 limit) 分析测量范围(AMR) 0.2-4.00g/L 已验证 临床范围(CRR) 0.2-4.00g/L 已验证 男:0.66-1.33g/L 参考值区间 已验证 (Expected values) 女:0.60-1.17g/L 其他 ------- -------- 参阅说明书版本 批内精密度(Within-run) 批间精密度(Between-run) 变异系平均值差变异系数平均值标准差2005-08，V 4 English 数(Mean) (SD) (CV%) (Mean) (SD) (CV%) 正常值1.12 0.006 0.50 1.55 0.03 1.90 (precinorm) 厂商参数 异常值0.29 0.004 1.50 0.26 0.006 2.50 (precipath) 正常值1.08 0.03 2.70 1.33 0.08 6.02 (precinorm) 验证结果 异常值0.46 0.03 6.50 0.82 0.05 6.10 (precipath) 三(验证过程: METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 1/7 METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 1/7 常规生化方法验证 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•196 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 2.0 1(准确度(Accuracy): , 目的:通过检测数据与赋值材料数据的对比，得到实验室检测数据的偏倚，从而评价和验 证实验室检测结果的准确性。 , 评价方法:参加卫生部临检中心或/和美国病理学家协会(CAP)组织的室间质评，或者分 析厂商提供的已赋值的参考材料或质控品，检测结果参照厂商的说明，还可以分析多个实 验室(10个以上)参与质量控制过程所用的参考材料，检测结果与同行间的均值比较。本 实验室已参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价指标，没有参加的项目通过室间比 对来评价其准确度。 , 最近一次参加的卫生部室间质评: 测定日期 2007-05-07 统计日期 2007-06-19 回报日期 2007-06-23 校准物 Roche PT平均成绩 100% 平均VIS --- , 各编号样本测定情况:(g/L) 样本编我室测PT允许范与靶值VIS允许靶值 PT得分 VIS得分 号 定结果 围 偏倚 范围 200711 0.80 0.92 0.64-1.20 100 -13.04 --- --- 200712 1.47 1.65 1.16-2.15 100 -10.91 --- --- 200713 0.17 0.25 0.17-0.33 100 -32.00 --- --- 2(精密度(Precision): 2(1批间精密度: , 目的:考察候选方法的随机误差 , 方法:选择室内质控作为衡量批间精密度的依据。选择具有医学决定水平的正常及异常质 控品每天按照常规标本的方法一样测定，测定结果在遵照厂商参数不出控的前提下利用前3 个20天测定的数据逐步累积最终得出最适均值、标准差。以此作为判断今后该批号质控数 据是否在控的依据。 , 质控来源:大部分为厂家配套正常/异常值质控品。个别项目异常值采用留样复查的方法来 衡量是否符合临床检测精密度允许范围。 , 浓度一: 月份 3 4 5 单位 测定例数(n) 27 25 27 --- 均值(Mean) 0.8 0.8 0.8 g/L 标准差(SD) 0.02 0.03 0.02 g/L 变异系数(CV) 2.4 3.7 2.4 % , 浓度二: 月份 3 4 5 单位 测定例数(n) 27 25 27 --- 均值(Mean) 1.3 1.3 1.3 g/L 标准差(SD) 0.03 0.03 0.03 g/L 变异系数(CV) 2.3 2.3 2.3 % 2(2批内精密度: METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 2/7 METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 2/7 常规生化方法验证 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•196 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 2.0 , 目的:考察候选方法的随机误差 , 方法:选择具有医学决定水平的高低值标本在相当短的时间内，按规定的操作方法，在较 短得时间内及稳定的条件下各作20次重复测定。计算其X、S与CV。 , 标本来源:除个别项目采用病人标本外其他项目均采用CFAS高低值配套质控品。 浓度单位 g/L 单位换算 g/L*100=mg/dL 测定时间 低值标本来源 质控品LOT16796900 2006.12.07 高值标本来源 质控品LOT16743600 2006.12.01 异常高值标本 病人血清 2007.08.18 , 测定结果: 载脂蛋白B(APOB) 测定次数 正常值 异常值 异常高值 1 1.08 0.58 1.48 2 1.12 0.47 1.49 3 1.11 0.44 1.50 4 1.09 0.46 1.56 5 1.10 0.45 1.60 6 1.03 0.50 1.62 7 1.05 0.46 1.57 8 1.05 0.47 1.58 9 1.12 0.44 1.57 10 1.11 0.45 1.60 11 1.06 0.44 --- 12 1.09 0.43 --- 13 1.08 0.44 --- 14 1.09 0.43 --- 15 1.12 0.43 --- 16 1.09 0.43 --- 17 1.13 0.43 --- 18 1.06 0.47 --- 19 1.06 0.45 --- 20 1.02 0.45 --- ? 21.66 9.12 15.57 Average 1.08 0.46 1.56 SD 0.03 0.03 0.05 CV% 2.7 6.5 3.21 METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 3/7 METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 3/7 常规生化方法验证 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•196 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 2.0 APOB频数直方图(正常值) 8120.00%100.00%680.00%60.00%4频率40.00%220.00% 00.00% 小于1.021.02-1.05-1.08-1.11- 1.051.081.111.14 APOB频数直方图(异常值) 12120.00%100.00%10880.00%60.00%6频率440.00%20.00%200.00% 小于0.40.4-0.43-0.46-0.49- 0.430.460.490.52 APOB频数直方图(异常高值) 5120.00% 100.00%480.00%360.00%2频率40.00%120.00% 00.00% 小于1.501.50-1.551.55-1.601.60-1.65 , 试剂说明书上正常值CV%:0.50% , 试剂说明书上异常值CV%:1.50% , 1/4最大允许误差:5% , 结果判断方式:正、异常值CV至少小于1/4最大允许误差。 , 测定评价:批内测定正、异常低值、异常高值CV值分别为2.70%、6.50%、3.21%， 均小于1/4最大允许误差，可判定该项目批内精密度结果为“通过”。 3(线性范围(Linearity range): , 目的:在确定某项目检测上限的同时检测其检测上下限是否呈线性关系,从而 保证该浓度范围检测结果的准确性。 , 对于高浓度样本可以用重做功能予以确定，或用0.9%的生理盐水手工直接稀 释后上机测定，两种方法稀释效果差异经统计学验证无明显差异。(具体操作可详见“稀METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 4/7 METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 4/7 常规生化方法验证 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•196 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 2.0 释效果的对比”) , 该项目为多点定标项目,定标后可以得到一条曲线,故线性范围仍参照罗氏说 明书给定的范围,认为标本状态良好无干扰的情况下载脂蛋白B(APOB)的测定结果 0.2-4.00g/L范围内呈线性。 4(临床可报告范围(Clinical reportable range，CRR): , 目的:分析各稀释浓度的线性关系，确定最高稀释倍数。从而确保高值样本报告的准确 度。 , 验证方法:罗氏公司载脂蛋白B(APOB)说明书上不仅给出了在MODULAR P上的AMR， 同时给出了经稀释后重复测定可达到的延伸范围，我们将此范围作为该项目的临床可报 范围，同时延伸范围高限值与线性范围高限值的比值作为最大稀释倍数。 , 此倍数稀释超限高值标本测定值与预期值的偏差，以1/4 CLIA’88总允许误差范围为 判断限。 是否通过实际稀释项目名称 可测线性范围 临床可报上限 验证 倍数 0.2-4.00g/L 4.00g/L 载脂蛋白B(APOB) 90%AMR-140%AMR 初拟稀释倍数 × ---- 3.6-5.6g/L ---- , 稀释倍数的应用浓度为超出线性范围且低于临床可报上限浓度之间的高值标本，为了 减少稀释引起的误差及降低高值标本寻求的难度，这里将稀释标本浓度限制在 90%AMR-140%AMR。 , 过程描述:载脂蛋白B(APOB)迄今临床检测还没有高出检测限的高值标本，现有的 检测限已经能够满足临床标本的检测，若遇到检测结果高于检测限的高浓度标本，则 报告检测结果为>4.00g/L。 5.分析灵敏度(Analytical Sensitivity): , 验证方法:厂商通常给定的分析灵敏度为检测低限LLD，即样品单次检测可以达到的非空白检测响应量对应的分析物量。通过反复测定空白样品，均值(X)加上三倍标准差(SD)则为LLD。验证检测低限时，重复至少20个数据，若不超过3个点大于LLD，则此LLD得到验证。 , 分析灵敏度仅对那些在接近0的低值有临床意义的项目有必要进行确定。该项目勿需进行分析灵敏度的验证，直接引用罗氏说明书上给定的0.15g/L。 6.干扰物质(Interfering Substances): , 脂血:甘油三酯低于20.11mmol/L无明显干扰; , 胆红素:胆红素低于1026μmol/L无干扰; , 溶血:血红蛋白低于10g/L无干扰。 7(参考区间(Reference intervals): , 过程描述:待检标本需满足检测前质量控制要求(见下)，收集40例健康人(验证个体分别取男性20名，女性20名)血清标本及时检测，要求其年龄，性别等均匀分布，对参考范围进行验证，只允许5%的数据超过所验证的参考范围，否则需建立参考范围。 , 载脂蛋白B(APOB)检测前质量控制要求: , 健康状况调查表筛选合格候选个体，筛查要求详见《健康状况调查表—男性》，《健 康状、况调查表—女性》。年龄跨度:20-59岁。 , 离心沉淀(大约3000*g下5分钟)不能澄清的脂血和溶血标本勿用。 , 不超过冷藏温度(2-8。C)3天的标本。 METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 5/7 METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 5/7 常规生化方法验证 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•196 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 2.0 , 反复冻融的标本勿用。 项目 载脂蛋白B 浓度单位 U/L 测定日期 试剂批号 175343 有效期 2007-11 2006-09-28—2006-12-04 Modular 测定分布例1-20 男性 仪器 是否在控 在控 P800 数 21-40 女性 , 测定结果见下表: 样本序列样本条码号 测定结果 样本序列样本条码号 测定结果 号 号 1 609280002 0.66 21 608251238 0.48 2 609270543 0.95 22 608280593 0.70 3 609280564 0.74 23 609110555 0.88 4 908300640 0.68 24 608281541 0.76 5 908251177 0.56 25 611080006 0.74 6 911080515 0.78 26 611080005 0.84 7 611080526 0.95 27 611080523 0.90 8 611080519 0.93 28 611080522 0.99 9 611080514 0.90 29 611080521 0.73 10 611080520 0.78 30 611080513 0.74 11 611080517 0.78 31 610251512 0.71 12 611280019 0.82 32 611180006 0.70 13 611240558 0.87 33 611131274 0.68 14 611030552 0.97 34 611300545 0.66 15 611280015 0.86 35 611210660 0.70 16 611280013 1.01 36 611290556 0.67 17 610250658 0.93 37 611290560 0.62 18 612010007 1.01 38 611290548 0.73 19 611170612 0.92 39 611290543 0.61 20 612060554 0.99 40 612040002 0.60 , 统计方式: 测定结果在参考范围内的例数 R= 总测定例数 ?95% 即合格。 , 罗氏说明书提供范围:男性:0.66-1.33g/L，女性:0.6-1.17g/L。 , 结果:本实验测定正常人结果在厂家提供的参考范围的比率R?95%。 METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 6/7 METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 6/7 常规生化方法验证 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•196 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 2.0 其他其他 5%5% 0.66-0.6-1.17 95%1.33 95% , 结论:罗氏说明书提供载脂蛋白B范围:男性:0.66-1.33g/L，女性:0.6-1.17g/L是可用的。 , :本室载脂蛋白B(APOB)项目准确度、精密度、线性范围、临床可报告范围、分析灵敏度、干扰物质、参考区间验证结果均可接受，可用于临床标本检测。 (注:本次方法学验证所涉及到的实验数据原始见《方法验证原始记录》。) 验证人: 审核人: 日期: 日期: METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 7/7 METHOD VALIDATION OF CONVENTIONAL BIOCHEMISTRY PAGE 7/7 常规生化方法验证