补中益气丸- 关于“小儿惊风片”复核检验结果

补中益气丸- 关于“小儿惊风片”复核检验结果 附件3.5:中成药注释模板-补中益气丸 补中益气丸 Buzhong Yiqi Wan 补中益气丸是著名常用的补中益气药，原方为金元时期著名医家李东垣在其《脾胃论》中创制的“补中益气汤”方，数百年来，经历代医家的效法和使用而成为经久不衰的传统名方。目前，此方已广泛用于内、外、皮、妇、儿、五官科的数十种病症，诸如营养不良、贫血、慢性胃炎、慢性肝炎、感冒、发烧、支气管炎、肺炎、肺心病、冠心病、心律失常、高血压、低血压、白细胞减少症、慢性结肠炎、慢性痢疾、脱肛、便血、慢性胆囊炎、胃下垂、 [1]泌尿系结石、失眠、重症肌无力、眼睑下垂、月经不调、男性不孕症、顽固性头痛等。 [2][3][4][5]近代药理学研究表明，补中益气丸对免疫系统、消化系统、泌尿系统、呼吸系统 [6]等均有良好的调节作用，并能增强机体非特异性抵抗力、抗菌、抗病毒等。 在1985年版和1990年版《中国药典》一部中，补中益气丸仅包括显微鉴别和检查项。1995年版和2000年版《中国药典》一部中增加了白术和甘草的薄层色谱鉴别项。2005年版《中国药典》一部中将补中益气丸分成了两个标准，分别为补中益气丸，包括大蜜丸和小蜜丸，质量标准同2000年版《中国药典》;补中益气丸(水丸)，仅包括水丸，并对水丸的质量标准进行了提高，增加了当归、陈皮的薄层色谱鉴别项和黄芪甲苷的含量测定项。在2010版《中国药典》一部中，仍包括补中益气丸和补中益气丸(水丸)2个标准，其中补中益气丸增加了陈皮的薄层色谱鉴别项和黄芪甲苷的含量测定项，删去了白术的薄层色谱鉴别项;补中益气丸(水丸)对黄芪甲苷含量测定项的限度进行了修订。 【处方】 本方为脾胃气虚，中气下陷所致之证而设。方中黄芪甘温，补中益气，升阳固表，为君药;辅以党参、炙甘草、白术益气健脾，合黄芪以益气补中;陈皮理气和胃，当归养血和营，用少量升麻、柴胡，助主药以升提下陷之阳气。诸药合用，则脾胃强健，中气充足，劳倦得之，寒热自除，气陷自举。 有关本方药味的炮制方法:炙黄芪和炙甘草同2005年版《中国药典》一部品种“炙黄芪”和“炙甘草”;白术(炒)的使用情况有两种，一种为同2005年版《中国药典》一部品种“白术”项下收载的炮制品“炒白术”，为采用蜜炙麸皮进行麸炒得到的白术，另一种的炮制方法为用麸皮进行麸炒得到的白术。 【制法】 由于各地气候不同，蜂蜜炼制程度不同，同时各地所用制丸机械也不一样，因此各地加蜜量有所不同，故正文加蜜量只规定限度范围，而不规定具体数量。但制出的丸 1 剂均应符合丸剂通则项的要求。 【性状】 药粉加入炼蜜混合均匀后，呈棕褐色，制成大蜜丸及小蜜丸后，则表面呈黑褐色，但内部仍呈棕褐色。如加工过程中采用高压灭菌，则颜色加深，丸剂变软。 【鉴别】 (1)取本品，置显微镜下观察:纤维成束或散离，壁厚，表面有纵裂纹，两端断裂成帚状或较平截(炙黄芪)。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维(炙甘草)。草酸钙针晶细小，长10,32μm，不规则地充塞于薄壁细胞中(白术(炒))。草酸钙方晶成片存在于薄壁组织中(陈皮)。联结乳管直径12,15μm，含细小颗粒状物(党参)。薄壁细胞纺锤形，壁略厚，有极微细的斜向交错纹理(当归)。木纤维成束，淡黄绿色，末端狭尖或钝圆，有的有分叉，直径14,41μm，壁稍厚，具十字形纹孔时，有的胞腔中含黄棕 ,25μm(柴胡)。(图1) 色物(升麻)。油管含淡黄色或黄棕色条状分泌物，直径8 (2)为处方中炙甘草中所含化学成分甘草酸单铵盐的薄层色谱鉴别，其在硅胶GF薄254层板上产生荧光淬灭斑点。(图2) (3)为处方中陈皮中所含化学成分橙皮苷的薄层色谱鉴别。参照2005年版《中国药典》一部品种“补中益气丸(水丸)”中陈皮的薄层色谱鉴别方法，进行了试验摸索。由于蜜丸较粘，难以研碎，因此在供试品溶液制备中，取本品5g，剪碎后，加等量的硅藻土，再研匀，用甲醇加热回流提取。试验中，对不同的温湿度和不同来源的薄层板进行了考察，结果表明，在上述不同的温湿度条件下色谱分离效果均较好，说明温湿度对本法的影响较小;不同来源薄层板的对照品和供试品色谱斑点均较清晰，说明不同来源、不同类型的硅胶G薄层板均可使用。(图3) 【检查】 根据制剂通则(丸剂)的要求，对水分、重量差异(或装量差异)、崩解时限(大蜜丸无需检查)进行检查。 【含量测定】 黄芪甲苷为处方中君药黄芪的主要有效成分，对黄芪甲苷的定量方法报道 [7][8][9]较多，有薄层色谱扫描法、反相高效液相色谱法、超高效液相色谱一蒸发光散射法、高 [10]效液相色谱一蒸发光散射法等。其中高效液相色谱一蒸发光散射法应用最多，本版药典也采用了该方法。 供试品溶液制备时，样品剪碎后，称取27.0g，与13.5g的硅藻土研匀混合，由于硅藻土较轻，因此研匀的动作要轻缓，防止硅藻土扬起;并要完全转移到打粉机中粉碎成粗粉，以保证样品与硅藻土的重量比为2:1。为保证样品中的黄芪甲苷能够索氏提取完全，需保证加热回流至提取液无色。实验中考察了不同厂家、不同品牌、不同长度[分别为?ZORBAX XDB-C18 (Agilent公司， 4.6×15mm，5μm)、? KROMASIL C18 ( 迪马公司，4.6×15mm，5μm，)、 2 ? Amethyst C18-P( 赛分科技有限公司，4.6×15mm，5μm)、?KROMASIL C18 (4.6×25mm，5μm)]的4种色谱柱对本品中黄芪甲苷的分离情况。结果表明，4种不同厂家、不同品牌和不同长度的色谱柱对本品中黄芪甲苷的分离均较好，均可用于黄芪甲苷的测定。参考2005年版《中国药典》一部品种“补中益气丸(水丸)”，选择乙腈-水(35:65)作为流动相。 以ln(进样量)为横坐标X，ln(峰面积)为纵坐标Y，绘制标准曲线，并计算得回归方程。黄芪甲苷进样量在0.1061µg,10.61µg范围内，ln(进样量)与ln(峰面积)呈良好的线性关系。回归方程为y=1.55121x+6.37692，相关系数r=0.9991。分别对大蜜丸和小蜜丸的重现 %，说明方法性和准确度进行了考察，其分别各6份样品含量测定结果的相对标准偏差小于2的重复性较好;大蜜丸和小蜜丸的加样回收率分别为100.23%和99.69%，相对标准偏差分别为1.78%和1.64%，说明本法的准确度较高。取不含炙黄芪的供试品(即空白样品)，按照拟订的方法进行测定，结果空白样品溶液在黄芪甲苷色谱峰处无干扰(图4)。对收集到得5家生产厂家的19批样品进行了黄芪甲苷的含量测定，根据测定结果制订含量限度为“本品含炙 HO)黄芪以黄芪甲苷(C计，小蜜丸每1g不得少于0.20mg;大蜜丸每丸不得少于1.80mg”。 416814 【规格】 本品服用量大蜜丸按丸计，小蜜丸则以重量计，故正文规定大蜜丸每丸重9g。而小蜜丸各地包装大小不一，且非固定不变，因此正文不列规格项。 参考文献 [1] 郑建功. 补气升清名方:补中益气丸. 养生月刊. 2003，24(7) [2] 温茂兴. 补中益气丸合六味地黄丸治疗亚健康疲劳. 北京中医药大学学报(中医临床版). 2006，13(1);31-32 [3] 张洪财， 高敏飞. 补中益气丸治疗小儿厌食症50例临床研究. 齐齐哈尔医学院学报. 2006，27(9);1076-1077 [4] 余望贻， 卓晖， 孟琼. 补中益气丸脾肾相关性实验研究. 中国医药指南. 2008，6(21);25-26,22 [5] 刘俊保. 补中益气丸治疗小儿哮喘90例临床观察. 医药论坛杂志. 2004，25(21);66 [6] 陈国献. 补中益气丸合玉屏风散治疗体虚感冒. 河南中医. 2004，24(8);70-71 [7] 雷玉萍， 李瑞莲. 薄层扫描法测定补中益气丸中黄芪甲苷的含量. 中国药品标准. 2004，5(1);51-52 [8] 翟海云，吴燕红，黄庆华，等. RP—HPLC法测定复方补气养血口服液中黄芪甲苷的含量. 中药新药与-临床药理. 2009，20(2);156-158 [9] 杨俊，王文辉，王齐，等. UPLC—ELSD法测定黄芪中的黄芪甲苷含量. 光谱实验室. 2009，26(3);484-486 [10] 徐小利，陈晓虎，谢静. 高效液相色谱一蒸发光散射检测法测定补中益气丸(浓缩丸)中黄芪甲苷含量. 中国药业. 2008，17(19);34-35 作 者: 陆继伟 主管药师 上海市食品药品检验所 3 审校者: 季 申 主任药师 上海市食品药品检验所 4 图1 补中益气丸粉末显微特征图 纤维(黄芪) 晶纤维(甘草) 草酸钙针晶(白术) 草酸钙方晶(陈皮) 联结乳管(党参) 薄壁细胞(当归) 木纤维(升麻) 油管(柴胡) 5 图2 补中益气丸中甘草的薄层色谱图 T: 20? RH: 48% 溶剂前沿 原点位置 1 2 3 4 5 6 7 8 1~3、供试品溶液(小蜜丸，吉林市双士药业有限公司，批号:080401，080402，080403) 4~5、甘草酸单铵盐对照品溶液 6~8、供试品溶液(小蜜丸，吉林修正药业股份有限公司，批号:20080401，20080402，20080403) 展开剂:正丁醇,冰醋酸,水(6:1:3) 的上层溶液 薄层板:硅胶GF预制薄层板(上海东方药品科技实业有限公司) 254 展开缸:双槽展开缸，20cm×10cm 展 开:展开缸预平衡15分钟，上行展开，展距为8cm 点样量:均为5µl 点样方式:喷雾 检 视:置紫外光灯(254nm)下检视。 结 果:供试品色谱中，在与甘草酸单铵盐对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点。 6 图3 补中益气丸中陈皮的薄层色谱图 T: 20? RH: 50% 溶剂前沿 原点位置 1 2 3 4 5 6 7 8 1~3、供试品溶液(小蜜丸，吉林市双士药业有限公司，批号:080401，080402，080403) 4~5、甘草酸单铵盐对照品溶液 6~8、供试品溶液(小蜜丸，吉林修正药业股份有限公司，批号:20080401，20080402，20080403) 1~3供试品溶液(小蜜丸，吉林市双士药业有限公司，批号:080401，080402，080403) 4、空白样品溶液(缺陈皮，小蜜丸，吉林修正药业股份有限公司) 5~7、供试品溶液(小蜜丸，吉林修正药业股份有限公司，批号:20080401，20080402，20080403) 8、橙皮苷对照品溶液 展开剂:乙酸乙酯-甲醇-水(100:17:13) 薄层板:硅胶G预制薄层板(上海东方药品科技实业有限公司) 展开缸:双槽展开缸，10cm×10cm 展 开:展开缸预平衡15分钟，上行展开，展距为8cm 点样量:均为10µl 点样方式:喷雾 检 视:喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。 结 果:供试品色谱中，在与橙皮苷对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点。空白样品(缺陈皮)均无干扰。 7 附图4 补中益气丸中黄芪甲苷含量测定的高效液相色谱图 理论板数:13596 拖尾因子:0.502 黄芪甲苷对照品溶液的液相色谱图 理论板数:11861 分离度:3.13 拖尾因子:0.540 供试品溶液的液相色谱图 空白溶液(小蜜丸，缺炙黄芪)的液相色谱图 8 空白溶液(大蜜丸，缺炙黄芪)的液相色谱图 9