【word】 宫颈腺癌中HPV16-18与P16的表达及其相关性

【word】 宫颈腺癌中HPV16-18与P16的表达及其相关性 宫颈腺癌中HPV16-18与P16的表达及其相 关性 ? 46?亘医堂堂塑(JShanxiMedUniv)2011年1月,42(1 宫颈腺癌中HPV16/18与P16的表达及其相关性 张玲,刘峰,王全红(山西医科大学病理教研室,太原030001;:山西医科大学法医学院;山西省 肿瘤医院病理科) 摘要:目的探讨各类型宫颈腺癌与HPV16/18感染的关系,分析HPV16/18的感染率与P16表达之问的相关性.方法 应用原位杂交及免疫组织化学Envision二步法检测31例宫颈管型腺癌,12例宫颈子宫内膜样腺癌,9例宫颈微偏腺癌中 HPV16/18及P16的表达情况,另选36例宫颈鳞癌作对照.结果?微偏腺癌中HPV16/18的检出率低于其他各组,差异 均具有统计学意义(P<0.05);宫颈管型腺癌,子宫内膜样腺癌中HPV16/18的检出率与鳞癌相比差异无统计学意义(P> 0.05).?微偏腺癌中P16蛋白的阳性表达率低于其他各组,差异均具有统计学意义(P<0.05).?所有HPv阳性患者P16 的表达明显高于所有HPV阴性患者,P16的阳性表达率与HPV16/18感染呈正相关(P<0.05).结论?宫颈管型腺癌及 宫颈子宫内膜样腺癌与HPV16/18感染相关,而宫颈微偏腺癌可能与 HPV16/18的感染无关.?P16蛋白的过表达可能参与 了部分普通型宫颈腺癌的发生,发展,但在微偏腺癌中可能不起重要 作用.?P16蛋白的高表达与HPV感染密切相关. 关键词:宫颈腺癌;微偏腺癌;HPV16/18;P16 中图分类号:R737.33文献标志码:A文章编 号:1007—661I(2011)01—0046—04DOI:10.3969/J.ISSN.1007—6611.20 11.01.012 ExpressionofHPV16/18andP16incervicaladenocarcinomaandtheircorrelation ZHANGLing,LIUFeng,WANGQuan—hong(DeptofPathology,ShanxiM edicalUniversity,Taiyuan030001,China;SchoolofFo— rensicMedicine,ShanxiMedicalUniversity;DeptofPathology,ShanxiTumorHospita1) Abstract:ObjectiveToexploretheinfectionofHPV16/18indifferenttypesofcervicaladenocarcinoma,anditscorrelationwithex. pressionofP16.MethodsHybridizationnsituandEnvisiontwo—stepmetho dwereusedtoevaluatetheexpressionofHPV16/18 andP16in31casesofendocervicaladenocarcinoma.12casesofendometrioidadenocarcinomaand9casesofminimaldeviationadeno— carcinoma.Thirty—sixcasesofsquanlouscarcinomaofthecervixwerechosenascontrols.ResultsedetectionrateofHPV16/18 inminimaldeviationadenocarcinomawaslowerthanthatoftheothercases(P<0.05).buttherewasnosignificantdifferencebetween endocervicaladenocarcinoma,endometrioidadenocarcinomaandsquamouscarcinoma(P>0.05).@ThepositiverateofP16inminimal deviationadenocareinomawaslowerthanthatoftheothercases(P<0.05).?ThepositiveexpressionofP16inallHPV—positivecases wassignificantlyhigherthanthatinallHPV—negativecases.Positiveexpres sionofP16wasrelatedtoHPV16/18infection(P<0.05). Conclusion? Theoccurrenceofendocervicaladenocarcinomaandendometrioidadenocareinomaofcervixarerelatedtotheinfection ofHPV16/18,butperhapsnotforminimaldeviationadenocarcinoma.? OverexpressionofP16mayplayanimportantroleintheoccur- renceanddevelopmentofsomeusualadenocarcinomaofcervix,butperhapsnotinminimaldeviationadenocarcinoma.?Overexpression ofP16iscloselyrelatedtotheinfectionofHPV16/18. Keywords:cervicaladenocarcinoma;minimaldeviationadenocarcinoma;HPV16/18;P16 宫颈腺癌较鳞癌少见,大约占宫颈肿瘤的 10%一30%,近几年来宫颈腺癌的发病率逐渐上 升.人乳头瘤状病毒(HPV)与宫颈鳞癌发生的 密切关系已经得到肯定.一些研究也揭示在宫颈腺 癌中HPV的感染率较高J.宫颈微偏腺癌是一种 罕见的高分化腺癌,仅占宫颈腺癌的1%一3%,因为 其临床表现缺乏特异性,细胞学异型性轻微,病理诊 断非常困难,常易误诊和漏诊.1870年Gusserow首 次将此瘤称之为恶性腺瘤(malignantadenocarcino ma)J,1975年Hurt等认为其病理形态是稍偏离 正常宫颈腺体的一种癌,是高度分化的腺癌,建议采 用低离正性腺癌或微小偏离性腺癌(minimaldevia— tionadenocarcinoma,MDA)一词代替恶性腺瘤. 宫颈MDA比较罕见,因此对其HPV的检测及 相关性的研究很少,本研究通过原位杂交及免疫组 化检测了各类型宫颈腺癌(包括9例微偏腺癌)中 HPV16/18及P16的表达,从而探讨HPV16/18与各 类型宫颈腺癌尤其是微偏腺癌发生的关系,并分析 HPV16/I8感染与P16表达的关系. 1与方法 1.1宫颈组织标本研究标本取自山西省肿瘤医 院病理科1996—08,2008—03间住院手术病例共 88例,包括宫颈微偏腺癌9例,宫颈管型腺癌31 例,宫颈子宫内膜样腺癌l2例,宫颈鳞癌36例. 山西医科大学(JShanxiMedUniv)20111月( 1.2原位杂交HPV16/18原位杂交试剂盒为美 国ZYMED公司产品(购自北京中杉生物技术有限 公司),杂交方法为:切片常规脱蜡;100%乙醇浸泡 5min后空气干燥;胃蛋白酶37o【=孵育30min;逐级 酒精脱水后空气干燥;每张切片加30l探针,盖上 盖玻片;95oC变性5min;37oC杂交过夜;PBS缓冲 液中浸泡10min,去掉盖玻片,每张切片中加入5— 6滴杂交洗液,37孵育15min;加入50l辣根过 氧化物酶标记抗地高辛抗体37?孵育30min;DAB 显色;复染;脱水;透明;封片. 1.3免疫组化P16的检测采用免疫组化Envi— sion二步法,鼠抗人单克隆抗体P16(ZM-0205)及 二步法试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司. 染色步骤参照试剂盒进行. 1.4结果判定HPV16/18原位杂交结果判定:细 胞核内出现棕黄色颗粒为HPV16/18阳性.免疫组 织化学结果判定标准如下:随机观察10个高倍镜视 野,每个视野计数100个细胞,取平均染色阳性细胞 数,计算阳性细胞百分率,?20%为P16缺失或低表 达,>20%为阳性. 1.5统计学分析应用SAS8.0统计软件进行分 ? 47? 析,采用Fisher确切概率及x检验. 2结果 2.1HPV16/18在各类型宫颈腺癌及鳞癌中的表 达HPV16/18DNA主要存在于细胞核内,呈棕黄 色颗粒.HPV16/18DNA在9例宫颈微偏腺癌中有 I例HPV16阳性(占11.11%);在31例宫颈管型腺 癌中有21例阳性(占67.74%);在12例子宫内膜 样腺癌中有6例阳性(占50%);在36例宫颈鳞癌 标本中有30例阳性(占83.33%);HPV16/18DNA 在宫颈微偏腺癌中的阳性表达率低于其他各组,差 异均具有统计学意义(P<0.05,见表1);宫颈管型 腺癌,子宫内膜样腺癌中HPV16/18的检出率与鳞 癌相比差异无统计学意义(P>0.05). 在21例HPV阳性的宫颈管型腺癌中HPV16 阳性13例(61.9%),HPV18阳性10例(47.62%), 双重感染2例(9.52%),见表2;在6例HPV阳性 的子宫内膜样腺癌中HPV16阳性3例(50%), HPV18阳性4例(66.67%),双重感染1例(16.67%); 在30例HPV阳性的宫颈鳞癌中HPV16阳性23例 (76.67%),HPV18阳性11例(36.67%),双重感染 4例(13.33%),见表2. 表1各类型宫颈癌组织中HPV16/18,P16的表达例(%) Tab1ExpressionofHPV16/18andP16indifferenttypesofcervicaladenocar cinomacases(%) 类型HPVHPV16阳性HPV18阳性HPV16+18阳性 2.2P16在宫颈微偏腺癌,宫颈管型腺癌,子宫内 膜样腺癌及宫颈鳞癌中的表达P16蛋白的阳性表 达主要位于细胞质,部分细胞核也可见着色.P16 蛋白在宫颈微偏腺癌,宫颈管型腺癌,子宫内膜样腺 癌及宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为11.11%(1/ 9),74.19%(23/31),58.33%(7/12),86.11%(31/36). ? 48?山西医科大学(JShanxiMedUniv)2011年1月,42(1 P16蛋白在宫颈微偏腺癌中的阳性表达率低于其他 各组,差异均具有统计学意义(P<0.05,见表1). 2.3各类型宫颈癌组织中HPV16/18感染与P16 表达的相关性在58例HPV感染的阳性病例中 P16阳性5l例(87.93%),而在30例HPV感染的 阴性病例中P16阳性11例(36.67%),前者明显高 于后者(P<0.05,见表3).且P16蛋白的阳性表达 率与HPVI6/18感染呈正相关(Phi=0.533,P< 0.05) 表3HPV感染与P16表达的相关性 Tab3ThecorrelationbetweenHPVinfectionandex. prestonofP16 3讨论 人乳头瘤状病毒(HPV)与宫颈鳞癌发生的密 切关系已经得到肯定.宫颈腺癌与高危型人乳头状 病毒HPV16/18感染亦密切相关.本研究显示宫颈 管型腺癌及子宫内膜样腺癌中HPV16/18的感染率 均较高,与宫颈鳞癌相比差异无统计学意义(P> 0.05),在宫颈鳞癌中主要以HPV16感染为主,而在 宫颈腺癌中HPV16及HPV18的感染率大致相当. 这与文献_6报道的宫颈鳞癌以HPV16感染为主,而 宫颈腺癌以HPV18为主有差异,这可能与受检者的 地域,年龄,检测方法都有一定的关系. 环化酶依赖性的激酶抑制蛋白P16与多种恶性 肿瘤的发生,发展有关,故称为多重肿瘤抑制基因 (MTS1),在正常细胞周期中,细胞周期素cyclinD1 与细胞周期素依赖激酶4形成cyclinD1一CDK4复合 物,致Rb磷酸化,使抑癌基因Rb失去抑制转录因 子E,F启动DNA合成的功能,导致细胞由G1期进 入S期,细胞增殖.P16蛋白能与cyclinD1竞争性 结合CDK4,抑制cyclinD1一CDK4复合物的活性,使 细胞停滞于G1期,从而抑制细胞增生和恶性转化. 此外,在正常细胞中,存在着一个负反馈网络,即磷 酸化Rb增加时,可引起P16表达增强,增加的P16 与cyclinD1竞争性地结合CDK4,从而抑制CDK4 活性,抑制细胞增殖.因此P16基因在上述某一个 环节发生异常,均可导致细胞异常增殖和肿瘤发生. P16作为一个抑癌因素在许多恶性肿瘤中是失 活的,但是在宫颈肿瘤中,却一直没有发现P16基因 变异或P16蛋白失活.相反,在宫颈鳞癌,宫颈腺癌 进行免疫组化染色时却发现了P16的过度表达. Milde-Langosch等发现在HPV阳性的宫颈腺癌 中,P16蛋白的阳性率为93%,而在HPV阴性的宫 颈腺癌中仅有41%表达P16蛋白,P16蛋白表达与 宫颈腺癌中HPV16/18感染密切相关.本研究也证 实了HPVI6/18的感染率与P16蛋白的阳性表达率 呈正相关(P<0.05).因此认为高危组的HPV所 含有的E6,E7基因可整合入宿主的基因组内,进而 分别使P53,Rb蛋白的功能失调,使宫颈上皮细胞 的细胞周期发生紊乱,Rb通路失控,引起原本正常 的P16蛋白反馈性高表达. 宫颈微偏腺癌(MDA)在宫颈腺癌中占1%一 3%,其形态学上具有类似正常宫颈黏液腺的特征, 而生物学行为却表现为恶性,宫颈细胞学涂片甚至 多次活检可呈阴性,以至于不易早期发现.有文献 报道宫颈MDA特征性表达胃黏蛋白J,并且对宫 颈MDA黏液成分的研究显示其所含黏蛋白成分的 比例与正常宫颈腺上皮不同?….我们先前的研究 显示宫颈MDA与其他类型腺癌中CEA,Ki-67的阳 性表达率均较高,但与其他类型腺癌不同的是,宫颈 MDA中特征性表达胃黏蛋白MUC6…J.我们对9 例MDA的黏液特殊染色也发现:AB—PAS(奥辛蓝一 过碘酸雪夫氏)染色中MDA中肿瘤细胞的胞质主 要被PAS染成红色,而正常宫颈腺上皮细胞质均被 染成紫色或紫罗兰色;HID/AB(高铁二胺一奥辛 蓝)染色中正常宫颈腺上皮细胞既有黑色着色部 位,又有蓝色着色部位,以黑色为主.MDA中两种 着色均减少,只见少量腺体呈浅蓝色.因此我们推 测宫颈MDA与胃黏膜上皮化生有关.Toki等?用 聚合酶链反应技术检测6例MDA的石蜡切片,仅发 现1例HPV16阳性,HPV18均阴性,并且通过原位 杂交聚合酶链反应技术,发现该阳性病例是一个低 度鳞状上皮内病损叠压在MDA病灶上造成的.本 实验结果显示,10例宫颈MDA中仅1例HPV16阳 性,P16的阳性表达率亦低于其他组的宫颈癌组织, 因此我们认为宫颈MDA可能是宫颈腺癌中的一种 特殊类型,其病因及发病机制不同于常见的宫颈管 山西医科大学(JShanxlMedUniv)2011年1月,42(1) 型及子宫内膜样腺癌,结合Hee等.以及xu等 的研究结果,我们有理由认为宫颈MDA可能与高 危HPV16/18的感染无关.当然,在以后的研究中 我们会收集更多的病例,检测更多亚型的HPV,应 用更先进的检测技术进一步探讨宫颈MDA的病因 及发病机制. 参考文献: [1JZhengT,HolfordTR,MaZ,eta1.Thecontinuingincreaseinade. nocareinomaoftheuterinecervix:abirthcohortphenomenon [J].j力tJEpidemiol,1996,25(2):252—258. 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