为了正常的体验网站,请在浏览器设置里面开启Javascript功能!

植物组织MDA含量测定

2019-09-19 5页 doc 44KB 137阅读

用户头像

is_358746

暂无简介

举报
植物组织MDA含量测定植物组织MDA含量测定 一、目的要求 1.掌握植物组织MDA含量测定的原理及具体测量步骤; 2.深化理解MDA与逆境和衰老的关系,理解植物组织MDA含量测定的意义; 3.了解膜脂过氧化、氧自由基和MDA形成的关系; 4.能够根据待测材料的具体情况设计实验步骤测定MDA含量; 5.学习分光光度计,低温离心机等仪器的使用方法。 二、实验原理 植物遭受逆境胁迫或衰老时,体内会发生一系列生理生化变化,如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低,活性氧平衡失调及内源激素平衡失调等。活性氧代谢失调直接导致植物体内活性氧的大量积累,...
植物组织MDA含量测定
植物组织MDA含量测定 一、目的要求 1.掌握植物组织MDA含量测定的原理及具体测量步骤; 2.深化理解MDA与逆境和衰老的关系,理解植物组织MDA含量测定的意义; 3.了解膜脂过氧化、氧自由基和MDA形成的关系; 4.能够根据待测材料的具体情况设计实验步骤测定MDA含量; 5.学习分光光度计,低温离心机等仪器的使用方法。 二、实验原理 植物遭受逆境胁迫或衰老时,体内会发生一系列生理生化变化,如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低,活性氧平衡失调及内源激素平衡失调等。活性氧代谢失调直接导致植物体内活性氧的大量积累,从而引发或加剧膜脂过氧化作用,造成细胞膜系统的损伤,严重时会导致植物细胞死亡。 膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)是膜脂过氧化最重要的产物之一,它的产生还能加剧膜的损伤。因此在植物衰老生理和抗性生理研究中,MDA含量是一个常用指标,可通过测定MDA了解膜脂过氧化的程度,以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。 MDA在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸(TBA)反应,产生红棕色的产物3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮(Trimet—nine),又名三甲川,该物质在532nm处有最大光吸收,在600nm处有最小光吸收。由于TBA也可与其它物质反应,并在532nm处有吸收,为消除硫代巴比妥酸与其它物质反应的影响,同时测定600nm下的吸光度,利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA的浓度。 即:A532-A600=ε·C·L 式中,A532和A600分别表示532nm和600nm处的吸光度值,C是MDA浓度,L为比色杯厚度,ε=155L·mmol-1·cm-1。 TBA              MDA              3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮 需要指出的是,植物组织中糖类物质可能对MDA-TBA反应有干扰作用。可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。 C(μmol·L-1)=6.45×(A532-A600) -0.56×A450 三、材料与设备 1.材料:四种菠菜样品,即绿色和黄色叶片的高温处理和室温对照。 2.仪器: (1) 分光光度计;(2) 冷冻离心机;(3)水浴锅;(4) 天平;(5) 研钵;(6) 剪刀;(7) 5ml刻度离心管;(9) 刻度试管(10ml);(10) 镊子;(11) 移液管(5ml、2ml、1ml);(12)冰箱。 3.药品 (1) 0.05mol/L pH7.8磷酸钠缓冲液;(2) 5%三氯乙酸溶液:称取5g三氯乙酸,先用少量蒸馏水溶解,然后定容到100ml;(3) 0.5%的TBA溶液:称取0.5g硫代巴比妥酸,用5%三氯乙酸溶解,定容至100ml。 四、实验步骤 1.MDA的提取:取样品0.5g(W),加入2ml预冷的0.05mol/L pH7.8的磷酸缓冲液,冰浴研磨成匀浆,转移到5ml刻度离心试管,将研钵用缓冲液洗净,清洗液也移入离心管中,最后用缓冲液定容至5ml。4500rpm,4度,离心10min,上清液即为MDA提取液,测量提取液的体积(V)。 2.MDA含量测定:吸2ml(V2)的提取液于刻度试管中(空白为2ml缓冲液),加入3ml 0.5%的TBA溶液,将试管放入沸水浴中煮沸10 min(自试管内溶液中出现小气泡开始计时)。到时间后,立即将试管取出并放入冰浴中。4500rpm,4度,离心10min,取上清液并量其体积(V1)。上清液于532nm、600nm波长下测定吸光度。 3.结果计算: MDA(nmol·g-1)=6.452×(A532-A600) × 式中,V1为反应液总量(ml);V2为反应液中的提取液数量(ml);V为提取液总量(ml); W为植物样品重量(g)。 五、实验报告  样品 处理 重复 A532 A600 MDA含量(nmol·g-1) 绿叶 高温处理 1 2 3 平均 标准差 室温对照 1 2 3 平均 标准差 黄叶 高温处理 1 2 3 平均 标准差 室温对照 1 2 3 平均 标准差             六、思考题 1.TBA为什么要溶解在三氯乙酸中? 2.提取液与TBA的混合液为什么要加热?为什么加热时间又不能过长? 3.为什么要测定反应液在600nm下的吸光度? 4.如果可溶性糖含量影响MDA含量的测定,你有什么办法消除其影响? 5.正常植物与衰老时相比丙二醛含量有什么变化,分析其原因。 七、注意事项 1.可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收(最大吸收在450 nm),当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高,必要时要排除可溶性糖的干扰。 2.低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应,当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+(最终浓度为0.5 nmol · L-1)。 3.如待测液浑浊,可适当增加离心力及时间。
/
本文档为【植物组织MDA含量测定】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。 本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。 网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。

历史搜索

    清空历史搜索