罗非昔布对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的改善作用

罗非昔布对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的改善作用 罗非昔布对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤 维化的改善作用 JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences)ay!!:: 抑制对照组A549细胞的增殖能力.转染细胞克隆 形成率反映了细胞的增殖能力和群体依赖性,它间 接反映了肿瘤细胞的恶性程度.作者用重组腺病毒 载体将Smad7基因导人A549细胞后,与空腺病毒 载体转染的对照组比较,转染细胞的克隆形成能力 增强,细胞生长速率明显增快,s期(DNA合成期) 细胞数目明显增多.提示应用Smad7可阻断肺癌 细胞内的TGFI3信号通路,从而抑制或干扰了TGFI3 对A549细胞的负性生长调节作用,这可能与肿瘤 的发生和侵袭转移有关. 参考文献 1tenDijkeP,MiyazonoK,HeldinCH.Signalinginputscon— vergeonnucleareffectorsinTGFI3signaling.TrendsBro一 ? 527? chemSci,2000,25(2):64 2WhitmanM.FeedbackfrominhibitorySMADs.Nature, 1997,389(6651):549 3秦建军,周清华,覃杨,等.Snad3D和Smad7重组腺病毒 载体的快速构建.中国肺癌杂志,2003,6(3):169 4WuHL,NambiP.Transforminggrowthfactor?beta—mediated proliferationofrenaltubularepithelialcellsinvolvespertus— sistoxin??sensitiveGprotein—andproteinkinaseC??dependent pathways.Pharmacology,1998,57(1):8 5秦建军.TGFB信号通路与肿瘤.国外医学?分子生物学 分册,2003,25(3):165 6TsangKJ,TsangD,BrownTN,eta1.Anoveldominantnega? tireSmad2mutationinaTGFbetaresistanthumancarcinoma cellline.AnticancerRes,2002,22(1A)i13 (2005.12.23收稿责任编辑王曼) 罗非昔布对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的改善作用 杨健,?唐琳刘章锁张彩香 1)郑州大学第一附属医院肾内科郑州4500522)广州军区广州总医院肾内科广州5100103)山西省人民医院肾内科太 原030010 ?男,31岁,硕士,研究方向:慢性肾衰的诊治 关键词环氧合酶;单侧输尿管梗阻;罗非昔布;转化生长因子一B1;一氧化氮 中图分类号R692.2 摘要目的:观察选择性环氧合酶一2抑制剂罗非昔布对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的改善作用.方 法:24只Wistar大鼠随机分成对照组(c组),单侧输尿管梗阻(UUO)手术组(u组)及罗非昔布治疗组(R组),每 组8只.u组和R组制作UUO模型,c组为假手术对照组.术前24h及术后以灌胃方式给药,R组给予罗非昔布 (10g?kg,?d),c组和u组给予等量生理盐水,1次/d,共2周.放射免疫法测定尿TXB浓度.免疫组化方 法检测术后2周肾组织中TGF.131,COX.2的达,并用硝酸还原酶法测定肾皮质组织中NO含量.结果:与c组相 比,u组及R组尿TXB水平,COX一2,TGF?p1表达,NO含量均增高(P<0.05),与u组相比,R组尿TXB水平, COX.2,TGF.131表达,NO含量均降低(P<0.05).结论:罗非昔布可通过抑制COX一2活性,下调TGF一131的表达,抑 制NO的合成等,从而延缓UUO大鼠肾间质纤维化的进展. Renalprotectiveeffectofspecificcyclooxygenase-2inhibitorrofecoxibon obstructivenephropathy YANGJian',TANGLin",LIUZhangsuo,ZHANGCaixiang J)DepartmentofNephrology,theFirstAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052 2)DepartmentofNephrology,GuangzhouGeneralHospitalofGuangzhouCommandofPLA,Guangzhou 5100103)DepartmentofNephrology,ShanxiPovincialPeopleHospital,Taiyuan030010 ? 528?郑州大学(医学版)2006年5月第41卷第期 Keywordscyclooxygenase;unilateralureteralobstruction;mfccoxib;transforminggrowthfactor—p1;nitricoxide AbstractAim:Toobservetherenalprotectiveeffectofspecificcyclooxygenase-2inhibitor(refecoxib)onobstruc— tirenephropathy.Methods:Twenty— fourWistarratswererandomlyassignedtogroupsC,U,andR,GroupUandgroupR wereestablishedunilateralureteralobstraction(UUO)model,andgroupRwastreatedwithrofecoxib(10mg/(kg?d)). GroupCwassham— operationgroup.Immunohlstochemistry~~qasusedtoinvestigatetheexpressionofCOX-2andTGF—B1af- ter2weeks.ThecontentofNOinrenalcodextissuewasmeasuredbyenzymaticreactiontest.UrineTXB2wasdetermined, too.Results:Incomparisonwithsham—operationgroup,theexpressionofCOX-2,TGF— p1,NOcontent,andTXB2ofgroup UandgroupRweremarkedlyincreased(P<0.05).ComparedwithgroupU,theexpressionofCOX-2,TGF—B1,content ofNOandTXB2ingroupRdecreased(P<0.05).Conclusion:Rofecoxibhasprotectiveeffectonthekidneybydownreg— ulatingtheexpressionofCOX-2,TGF— B1andthecontentofNO,whichmightalleviatetherenalinterstitialfibrosisafter UU0. 选择性环氧合酶-2(COX.2)抑制剂能有效延缓 单侧输尿管梗阻大鼠的肾小管间质纤维化的进程. 但具体作用机制尚不清楚….作者采用单侧输尿 管梗阻(UUO)大鼠模型观察选择性COX一2抑制剂 罗非昔布对COX-2,NO以及转化生长因子.p1 (TGF—p1)的影响,了解其肾脏保护机制,从而为选 择性COX一2抑制剂在减轻肾间质炎症和纤维化中 的应用提供理论依据. 1与方法 1.1实验动物与材料健康雌性Wistar大鼠,体重 200,230g,购自河南省实验动物中心.羊抗大鼠 COX-2多克隆抗体,兔抗大鼠TGF.131多克隆抗体 (SantaCruz公司),NO试剂盒(北京军事科学研究 所),SP试剂盒(通用型),DAB显色试剂盒(北京中 山生物技术有限公司),TXB放免试剂盒(北京东 雅生物技术研究所),罗非昔布(杭州默沙东公司), 罗氏芬(罗氏公司). 1.2动物模型及分组动物随机分成3组:对照组 即假手术组(C组),UUO手术组(U组)及罗非昔布 治疗组(R组).每组8只.大鼠以100g/L水合氯 醛((2.0,3.0)ml/kg)腹腔注射麻醉后,俯卧位固 定于手术台上,备皮后消毒,脊柱旁右侧1cm行纵 行切口,暴露并分离右侧输尿管.用丝线结扎2道, 在2道结扎点间剪断输尿管,然后逐层缝合.假手 术组仅游离右侧输尿管,不结扎和剪断.术前24h 及术后以灌胃方式给药,R组给予罗非昔布(10mg/ (kg?d)),C组和U组给予等量生理盐水.1次/d. 2周后,同法麻醉动物后,下腔静脉穿刺取血标 本.肾脏经生理盐水灌洗后,切取部分组织研磨 制成匀浆后,离心5min,取上清液一20?保存待 测NO;/NO;含量.部分肾组织以体积分数为 10%中性甲醛固定,石蜡包埋,制成3m切片, 行免疫组化染色. 1.3检测指标?24h尿送检尿蛋白;?血标本 送检肌酐;?尿TXB:浓度用放射免疫法检测;?NO 含量测定采用硝酸还原酶法;?肾组织TGF一131与 COX一2的表达均采用免疫组化SP法:石蜡包埋的切 片常规脱蜡至水,H:O:处理清除内源性过氧化物 酶,以微波修复抗原,加兔抗大鼠TGF.131抗体(1: 400)或羊抗大鼠COX一2抗体(1:100),4?孵育过 夜,次日依次滴加二抗,三抗,最后显微镜下观察控 制DAB显色.细胞浆染成棕黄色为阳性,同时采用 省去第一抗体的方法作为阴性对照.TGF.131,COX. 2的表达采用半定量分析,即随机选取20个连续不 重复的高倍视野(400X),根据肾间质小管细胞阳 性着色的范围分为5级:阴性计0分.微量着色计 0.5分,轻度着色计1分,中度着色计2分,广泛着 色计3分. 1.4统计学处理使用SPSS10.0统计软件行单 因素方差分析,检验水准仪:0.05. 2结果 2.1各组大鼠血,尿生化,尿TXB2及肾皮质匀浆 NO;/NO;含量结果见表1.由表1可知,与c 组比较,u组及R组血肌酐,24h蛋白尿定量差异 均无统计学意义(P>0.05). 表13组大鼠各指标比较 }与c组比较,P<0.0l;#与U组比较.P<0.0l 2.2免疫组织化学染色结果见表2.由表2可 知,与c组比较,U组及R组肾小管间质COX-2, TGF—p1表达差异有统计学意义(P<0.O1);R组与 Jouma1ofZhengzhouUniversity(MedicalScien!塑!兰鱼!!:!: U组比较,差异亦有统计学意义(P<0.01). 裹2各组大鼠肾小管间质COX-2,TGF-表达的比较 ?与C组比较,P<0.O1;?与U组比较,P<0.O1 3讨论 有关梗阻性肾病的发生机制目前尚未完全清 楚,多数学者认为本病的发生是以机械性梗阻为启 动因素所诱导的多种炎症介质,血管活性物质,化学 趋化蛋白等综合作用的结果.其中炎症因子的作用 十分关键.多种细胞因子,如血小板衍生生长因子, 白细胞介素-1,TGF-B1等都具有致纤维化的效应. 尤其是TGF-B1参与了肾小管间质纤维化的各个环 节?. NO是一种自由基,易被氧化生成NO.NO对 肾脏具有保护和损伤双重作用:一方面具有扩张动 脉,抑制血小板黏附,聚集,抗血栓形成,疏通微循 环,增加血供和保护细胞的作用.另一方面,NO与 超氧阴离子结合,直接和间接导致脂质过氧化而损 伤肾系膜细胞,炎症时可致血管通透性增加,白细胞 和蛋白渗出. COX-2在炎症细胞如组织损伤时的内皮细胞, 巨噬细胞,滑液纤维细胞,软骨细胞及成纤维细胞中 表达.炎性物质如细菌脂多糖,多种生长因子和细 胞因子可促使其表达急剧增加.林洪丽等提 出,COX-2在单侧输尿管梗阻小鼠肾皮质的过度表 达很可能是肾内炎性细胞浸润和集聚的起始或促进 因素之一.UUO所引发的肾小管间质纤维化的致 病过程中存在着刺激COX-2大量生成的多种因 素.Miyajima等的研究结果显示选择性COX一2 抑制剂能够减轻单侧输尿管梗阻大鼠的肾小管间质 纤维化病变,并认为下调TGF-B1的表达可能是该 药的作用机制. ? 529? 罗非昔布为选择性COX-2抑制剂,其是否可通 过抑制COX.2而减轻肾间质纤维化以及其作用的 分子机制研究目前尚未见报道.本研究结果显示, 与UUO手术组相比,罗非昔布可明显降低尿TXB 水平,对梗阻性肾病有保护作用.其机制可能为罗 非昔布可抑制COX-2活性,下调TGF-B1的表达,抑 制NO的合成等,从而延缓UUO大鼠肾间质纤维化 的进展. 参考文献 lHausknechtB,VoelklS,RiessR,eta1.Expressionofcy- clooxygenase?2inbiopsiesobtainedfromhumantransplanted kidneysundergoingrejection.Transplantation,2003,76 (1):109 2左怡沁,马骥,顾勇,等.选择性环氧合酶-2抑制剂对实 验性梗阻性肾病的保护作用.中华内科杂志,2002,41 (12):825 3MorrisseyJ,McCrackerR,KanetoH,eta1.Locationofan induciblenitricoxidesynthasemRNAinthenormalkidney. KidneyInt.1994.45(4):998 4FengL,XiaY,GarciaGE,eta1.Involvementofreactive oxygenintermediatesincyclooxygenase?2expressioninduced byIL-1,tumornecrosisfactor-a,andlipopolysaccharide.J ClinInves,1995,95(4):1669 5MasfetterJL,ZweifelBS,ManningPT,eta1.Selectiveinhibi— tionofinduciblecyclooxygenase-2invivoisanti-inflammato- ryandnonulcerogenic.ProcNatlAcadSciUSA,1994,91 (8):3228 6林洪丽,陈香美.程庆砾,等.单侧输尿管梗阻后小鼠肾脏 环氧化酶.2的表达及意义.中国病理生理杂志,1999,15 (10):945 7CroffordLJ,WilderRL,RistimakiAP,eta1.Cyclooxygen- ase?1and?2expressioninrheumatoidsynovialtissues: effectsofinterleukin?1beta,phorbolester,andco~icoste- roids.JClinInvest,1994,93(3):1095 8MiyajimaA,ItoK,AsanoT,eta1.Doescyclooxygenase?2 inhibitorpreventrenaltissuedamageinunilateralureteral obstruction?JUrol,2001,166(3):1124 (2005-03-12收稿责任编辑徐春燕)