纳米银复合醋酸氯己定消毒凝胶的毒理学安全性评价

纳米银复合醋酸氯己定消毒凝胶的毒理学安全性评价 纳米银复合醋酸氯己定消毒凝胶的毒理学 安全性评价 ? 58-华南塑医堂箜箜墼鲞箜虫盟旦A』鱼.?: 纳米银复合醋酸氯己定消毒凝胶的毒理学 安全性评价 张紫虹,杨美玲,杨国光,黄美卿,胡永成,谢晋卿,李志 【摘要】目的了解以醋酸氯己定和纳米银为主要成分的纳米消毒凝胶对哺乳动物的毒性,为 其毒理学安全性评价提供依据.方法选用SPl~级NIH小鼠,sD大鼠,新西兰家兔,按照<消毒技术 规范>(20年版),分别进行急性经口毒性(LDso),一次破损皮肤刺激,多次皮肤刺激,眼刺激试验,多 次阴道黏膜刺激试验,微核试验和亚急性毒性试验.以及对金黄色葡萄球茵,铜绿假单胞茵和白色念 珠茵杀灭试验.结果该纳米消毒凝腔作用2.5rain对金黄色葡萄球茵,铜绿假单胞茵杀灭对数值均 >3.00;作用2.5rain对白色念珠茵杀灭对数值>3.00.对雌,雄N?小鼠和SD大鼠急性经口毒性属 实际无毒级;对新西兰家兔的多次皮肤刺激,一次破损皮肤刺激,眼刺激试验均属无刺激性,多次阴 道黏膜刺激属于轻刺激性;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果为阴性,未发现该受试样品对体细 胞有谤变作用;亚急性毒性试验:一般生理体征无异常,血常规,血清生化指标正常,脏体系数无异 常,脏器组织病理学检查未发现异常.结论该纳米消毒凝胶对金黄色葡萄球茵,铜绿假单胞茵和白 色念珠茵有一定的杀灭效果,毒性较低,对皮肤无刺激性,对阴道黏膜有轻刺激性, 可用于皮肤消毒 使用. 【关键词】醋酸氯己定;纳米银;毒性试验 中图分类号:8,094.3文献标识码:A文章编号:1671—5039(2006)02—0058一? 纳米银复合醋酸氯己定消毒凝胶(广东某公司 提供)是以4.6mg/g醋酸氯己定和0.050mg/g纳米 银为主要抗菌成分,经纳米技术工艺制备而成的消毒 凝胶.为了解醋酸氯己定和纳米银配伍的杀菌功效 以及应用于皮肤黏膜消毒的安全性,我们对其进行了 定量杀菌试验和毒理学安全性评价,现报道如下. 1材料和方法 1.1材料 1.1.1试验菌株金黄色葡萄球菌ATCC6538(下 简称金葡菌);铜绿假单胞菌ATCC15442;白色念珠 以上菌种 菌ATCClo23l,由军事医学科学院提供. 代数为第4—6代. 1.1.2实验动物SPF级NIH种小鼠(动物合格证 Ooo4508),新西兰家兔(动物合格证0005616)由广东 省医学实验动物中心提供(动物生产许可证号: SCXK(粤)2003—0002):SPF级sD种大鼠(动物合 格证20o2AO4o号),由第一军医大学实验动物中心 提供. 作者单位:广东省疾病预防控制中心毒理实验所.广东广州 510B00 ? 实验研究? 1.1.3样品来源纳米消毒凝胶,深圳某公司提供. 1.1.4样品处理用蒸馏水配制成试验所需浓度. 一 次破损皮肤刺激试验,多次皮肤刺激试验,眼刺激 试验,多次阴道黏膜刺激试验受试物为样品原液. 对金葡菌,铜绿假单胞菌和白色念珠菌杀灭试验用 原液. 1.1.5动物实验室实验动物使用许可证号: sYxg(粤)2003—0011. 1.2试验方法 1.2.1对金葡菌,铜绿假单胞菌和白色念珠菌杀灭 试验,急性经I:1毒性(mso)试验,一次破损皮肤刺激 试验,多次皮肤刺激试验,眼刺激试验,多次阴道黏 膜刺激试验,微核试验具体检验方法见卫生部印发 的《消毒》(2002年版)中消毒产品毒理学 实验技术规范【ll. 1.2.2亚急性毒性试验SPF级sD种健康大白鼠 8O只,体重160—180g.设100,300,1000me,/(1cg? bw)剂量和阴性对照组4个试验组,每组20只,雌雄 各半,分笼饲养.每天按10.0mr/(kg?bw)灌胃,样 品组给予各剂量受试物,阴性对照组每天给予纯净 水,连续30d.每鼠保证有充足饮水和饲料供应,自 生直亟堕垦堂生旦筮丝鲞塑ChinaJ—Pre—yMed,Aoril2006,Vol32,No.2.59. 由饮食.每日观察记录动物生理体征,每周称量并 记录动物体重.观察指标包括:(1)大鼠一般生理 体征,外观,行为,大小便,皮毛等;(2)体重,脏体系 数;(3)血液常规和生化指标:血红蛋白,红细胞计 数,白细胞数及分类计数,丙氨酸氨基转移酶,天冬 氨酸氨基转移酶,血糖,总蛋白,白蛋白,总胆固醇, 肌酐和尿素氮等.上述指标用日立7600全自动生 化仪和雅培3700全自动血球计数仪检测,试剂由仪 器生产商供应;(4)肝脏,肾脏,胃,肺及小肠等器官 的大体解剖和显微镜下组织病理学检查. 1.2.3统计数据用sPSS11.0软件包进行统 计分析. 2结果 2.1对金葡菌,铜绿假单胞菌和白色念珠菌杀灭 试验 在试验条件下,以含1.0%卵磷脂,5.0%吐温一 80,0.1%组氨酸的肉汤为中和剂,消毒凝胶原样(醋 酸氯己定含量为4.6mg/g)作用2.5min,对金葡菌 和铜绿假单胞菌杀灭对数值均>3.00;作用5.0 mill,对白色念珠菌的杀灭对数值>3.00. 2.2大,小鼠急性经口毒性试验 连续观察14d,未发现中毒现,对雌雄性NIH 小鼠,SD大鼠的急性经口毒性LDso>5000me,/(1cg? bw),属实际无毒级. 2.3一次破损皮肤刺激试验 试验观察期内,受试新西兰家兔皮肤勉强可见 红斑,水肿等异常反应,最高刺激指数为0.33. 2.4多次皮肤刺激试验 观察期内,受试新西兰家兔皮肤勉强可见红斑, 水肿,未发现其他症状,刺激指数为0.07. 2.5眼刺激试验 受试新西兰家兔的眼刺激反应评分:角膜损害 最高平均积分,虹膜损害最高平均积分以及结膜水 肿最高平均积分均为0,结膜充血最高平均积分为 0.33;72h眼睛刺激反应完全恢复. 2.6多次阴道黏膜刺激试验 对照组新西兰家兔局部阴道组织肉眼观察未发 现充血,水肿等异常反应,受试组有一只新西兰家兔 局部阴道组织肉眼观察发现轻微充血和水肿,组织 病理学观察结果阴道黏膜刺激指数为5.33. 2.7微核试验 500—50oOme,/(kg?bw)剂量对小鼠骨髓嗜多染 红细胞微核试验结果为阴性,未发现该受试样品对 体细胞有诱变作用. 2.8亚急性毒性试验 2.8.1血常规指标各剂量组血常规指标与阴性 对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05),结 果表明该受试样品亚急性毒性试验血常规指标无 异常. 2.8.2血生化指标从表1可见,雄性大鼠中剂量 组总胆固醇与对照组比较差异有统计学意义(P< 且波动在本实验室历史 0.o5),但无剂量效应关系, 检测参考正常值范围(1.00,2.09mmol/L)内.其 余生化指标剂量组与对照组比较差异均无统计学意 义(均P>0.05).结果显示该受试样品亚急性毒性 试验生化指标无异常. 2.8.3脏器重量与脏体系数肝,肾,脾重量以及 肝/体,肾/体,脾/体系数各剂量组与阴性对照组比 较差异均无统计学意义(均P>0.05),结果显示该受 试样品亚急性毒性试验脏器重量与脏体系数指标无 异常. 表1纳米银复合醋酸氯己定消毒凝胶亚急性毒性试验终期血清生化指标(n;10.孟 ?s) 与阴性对照组比较,*P<O.05 2.8.4病理学检查对肝脏,肾脏,肺,脾,性腺,胃肾脏,胃和小肠进行组织病理学检查, 未见与受试物 及小肠等器官的大体检查,未见异常情况.对肝脏,有关的特殊病理改变. - 6O?华南预防医学2006~4月第3鲞簋堕』.呈: 2.8.5其他指标大鼠一般生理体征,外观,行为, 大小便,皮毛等均无异常.体重变化:各剂量组体重 与阴性对照组比较差异均无统计学意义(值为 O.0581.949,均P>O.05),表明该受试物对大鼠生 长无明显影响. 3讨论 醋酸氯己定是一种常用消毒剂,可用于皮肤黏 膜消毒.醋酸氯己定用于皮肤黏膜消毒国外通常使 用浓度为5000,40000nv/L…,国内多将其与醇 类消毒剂配伍使用.虽然达到了较好的杀菌效果, 但却带来了皮肤刺激性增大,毒性增强等问题.银 具有极强的广普抗微生物特性,它通过阻断微生物 呼吸酶系统(产生能量所必需),起到杀灭病原微生 物(包括细菌,病毒及真核微生物)的作用【2J. 随着纳米技术的应用发展,纳米技术也在消毒 领域开发应用.研究发现,以纳米银为抗菌成分的 纳米消毒凝胶对金黄色葡萄球菌,大肠埃希菌和白 色念珠菌的杀菌效果好,对皮肤无刺激性J.纳米 银也应用于宫颈糜烂的治疗.邓敏端等L4J探讨阿希 米(有效成分为纳米银)治疗宫颈糜烂的疗效与安全 性,并与激光治疗进行比较,结果显示激光组疗效明 显优于阿希米组,但阿希米组未见明显的不良反应, 激光组在治疗后存在不同程度的阴道排液和出血. 本次研究的以4.6nvo/g醋酸氯己定和O.O5 nv/g纳米银为主要抗菌成分复配的纳米消毒凝胶 在实验条件下,对金葡球菌和铜绿假单胞菌和白色 念珠菌有一定杀灭效果,毒性较低,对皮肤刺激小, 可用于皮肤消毒使用;而多次阴道黏膜刺激试验具 轻刺激性,不适合作为女性日常护理液使用. 虽然纳米银用于宫颈炎治疗未见明显的不良反 应L4J,醋酸氯己定也常用于皮肤黏膜消毒,但关于它 们对阴道黏膜的刺激程度认识还很少.本次研究结 果显示,多次阴道黏膜刺激试验具轻刺激性.究其 原因,是纳米银对黏膜的刺激性大还是醋酸氯己定 的原因?抑或是纳米银与醋酸氯己定复配使对阴道 黏膜的刺激性增强?这些尚待进一步研究. 参考文献: [1]NamumS,NishijimaS,McGinleyKJ,eta1.Astudytheefficacy 0fanfimicr~ialdetergentsforhandwng:usingthefull-handtouch platesm~od[J].JDermatol,1993,20(2):88. [2]Lml~owuA,叮驴80nB,Laupettereka~MP,eta1.Slyeraidsheel- inginthesteri1eskinwuund:ementalstudiesinthe1丑哪l0fyr8t [J].BrJDenmtol,1997,137(5):728—730. [3]黄美卿,张紫虹,钟文.纳米消毒凝胶杀菌效果及毒性的试验 观察[J].华南预防医学,2003,29(2):58—59. [4]邓敏端,陈燕辉.黎丽贞,等.阿希米治疗官颈糜烂6o例疗效 观察[J].中国实用妇科与产科杂志,2OO5,21(2):115—116. (收稿日期:20一09—08) (本文编辑:刘毫玲) (上接第57页) 这1O株菌为同一来源.从另一起暴发疫情分离到 的菌株S0412,S04—14共3株菌,血清型均为F4 型,基因型也同为setl(+)/sen(+),说明这3株菌 也是同一来源的. 本次研究结果显示,仅有20株(57.14%)福氏 志贺菌的ial基因为阳性.究其原因,可能是ial基 因存在于质粒中,而质粒是很容易丢失的,所以ial 基因的检出率较低. 志贺菌分为A,B,C,D四群.四群志贺菌和侵 袭性大肠杆菌(EmC)都携带ipaH基因.ipal{基因 是由60kDa抗原编码,在侵袭性相关质粒和染色体 的多重复制上均发现有ipm基因.本研究的所有 受试菌株的ipm基因均为阳性.Thiem等]报道, 用real—timePCR直接检测痢疾患者的肛拭子是否含 有ipaH基因,可提高志贺菌的检出率.我们是否也 可用PCR测定ipaI{基因来检测志贺菌,并作为诊断 痢疾的一种快速方法,还有待进一步研究. 参考文献: [1]KotloffKL,wick0JP,IvanoffB,Cta1.1999出alhlrd肌0f ~gdlai~fim:implicatlomforvaccinedevelopmentandirnplenzn- ration0fcontrole8[J].BullWHO,77:651—666. 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