西罗莫司滴眼液的质量控制及稳定性考察

西罗莫司滴眼液的质量控制及稳定性考察 中国实用医药2012年4月第7卷第12期ChinaPracMed,Apr2012,Vo1.7,No.12 西罗莫司滴眼液的质量控制及稳定性考察 黄楚龙王延东陈茂玲唐细兰 【摘要】目的建立西罗莫司滴眼液的质量控制并观察其稳定性.方法根据中国药典2010 年版眼用制剂项下有关规定拟定西罗莫司滴眼液的质量控制方法,用高效液相色谱法测定 西罗莫司的 含量,观察家兔眼部刺激性,并对制剂的稳定性进行考察.结果在20,8Og/rnl浓度范围内,西 罗莫 司峰面积和质量浓度呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为100.09%,RSD为0.22%,精密度 高,耐用性好,样品溶液可以在室温环境下24h内稳定.滴兔眼后无刺激性,而且稳定性相对较 好.结 论本方法专属性强,操作简便,结果准确,可用于西罗莫司滴眼液的质量控制. 【关键词】西罗莫司;滴眼液;质量控制;稳定性 QualitycontrolandstabilityofsirolimuseyedropsHUANGChu—long,WANGYan一面 ng,CHENMao— ling,eta1.ZhongshanOphthalmicCenterSunYat—sen【/n邢,Guangzhou510060,China 【Abstract】ObjectiveToestablishqualitycontrolmethodsofsirolimuseyedropsandobserveitssta? bilityatroomtemperature.MethodsQualitystandardofsirolimuseyedropswasestablishedaccordingto ChP,anditscontentwasdetermSnedbyHPLC.Stimulusofsirolimusonrabbits’eyesandstabilityofsirol imus eyedropswereobserved.ResultsThecalibrationcurveofsirolimuswaslinearwithintheconcentrationr ange 0f20—80g/ml,r=0.9997.Theaveragerecoveryrateofsirolimuswas100.09%(RSD=0.22%).Siroli— mushadnostimulusonrabbits’eyesanditsstabilitywasrelativelygood.ConclusionThemethodissimpl e, quickandspecific.Itcanbeusedtocontorlthequalityofsirolimuseyedrops. 【Keywords】Sirolimus;Eyedrops;Qualitycontrol;Stability 作者单位:510060广州,中山大学中山眼科中心 通讯作者:王延东E?mail:wangyds~@163.corn ? l7? 引起炎症扩散的可能J.但通过16例盆腔炎盆腔脓肿与l0 例开腹手术相比,我们的体会是腹腔镜手术视野清楚,探查方 便,粘连部位明确,加上节省了开腹及关腹的时间,在手术 时间上较开腹手术有较大的优势,且同样可以用大量生理盐 水反复冲洗腹盆腔,并可以相对彻底的吸除脓液及冲洗液, 避免了开腹手术引起的粘连,切口愈合不良等.笔者认为化 脓性盆腔炎通过腹腔镜手术加上合理的术后抗感染是合理有 效的. 黄体破裂的少女妇科急腹症中因其腹腔内出血量不太 多,在腹腔镜下明确诊断后处理更为简单,电凝止血或缝合 止血即可奏效,腹腔镜具有诊断加治疗的作用比传统开腹手 术更具有优势. 囊肿破裂或者扭转:巧克力囊肿破裂,多在探查时发现, 如不及时清除病灶,可形成粘连,新的盆腹膜种植,腹腔镜较 开腹手术视野清晰,可彻底冲洗并剥除囊壁,并清除开腹手术 难以暴露的异位结节. 青春期少女妇科肿瘤导致的急腹症如卵巢肿瘤扭转,破 裂等中我们选择使用腹腔镜手术的例数不多,尚需积累更多 的病例做进一步的总结. 总之,腹腔镜治疗幼青春期少女妇科急腹症安全,有效, 而且较传统开腹术式有缩短病程,减少手术时间和创伤,术后 恢复快等优点,尤其适用于青春期少女的妇科急腹症患者. 参考文献 [1]ClarkJ,StephensB.Gynecologicalproblemscausingacuteabdomi— nalsymptomsinadolescentgirls.JNailMedAssoc,1976,68(2): 117.119. [2]崔巧婵,张秀枝.腹腔镜技术在妇科急腹症的临床应用.中国 妇幼保健,2006,21(12):1714-1715. [3]TarrazaHM,MooreRD.Gynecologiccausesoftheacuteabdomen andtheacuteabdomeninpregnancy.SurglcalclinicsofNorthA— merica.1997,77(6):1371—1394. [4]仝亚红,王桂茹,周勤.青春期少女妇科急腹症49例分析.基 层医学论坛,2007,11(5):410-411. [5]ValissitieH.LisaE,ElisaM.MazzaferroAcuteAbdomen:Treat. ment.CompendiumonContinuingEducationforthePracticingVet— erinarian,2004,26(5):366-368,370-372. [6]李健文,郑民华,喇端端,等.女性下腹部急腹症手术途径探讨 . 中华普通外科杂志,2002,22(2):101-102. [7]罗丽莉李志凌胡瑞霞.腹腔镜早期诊治可疑异位妊娠的临床 意义.中国实用妇科与产科杂志,2004,20(1):47-48. [8]JansenFW,KolkmanW,BakkumEA,eta1.Complicationsoflapa. rescopy:aninquiryaboutclosed—versusopen—entrytechnique.AmJ ObstetGyneco1.2004,190(3):634-638. [9]KolkmanW,WoherbeekR,JansenFW_Gynecologicallaparoscopy inresidencytrainingprogram:Dutchperspectives.SurgicalEndos— copy,2005,19(11):1498-1502. ? 18?中国实用医药2012年4月第7卷第l2期ChinaPraeMed,Apr2012.Vo1.7.No.12 西罗莫司(Sirolimus,SRL),即雷帕霉素,它是由潮链霉菌 素(Streptomyeeshygroscopicus)产生的大环内酯类抗生素,是 新型强效免疫抑制剂J.尽管西罗莫司结构与他克莫司相 似,但作用不同.西罗莫司的活性比环孢素(CsA)强约 50倍,比他克莫司(Tacrolimus)强约30倍,而肾毒性则比CsA 及他克莫司都低.Chatel等将其应用于角膜移植抗排斥反 应,糖尿病黄斑水肿,青光眼滤过手术等均取得了较好的疗 效.为了进一步研究其在眼部疾病的疗效,本课题组制 备了西罗莫司滴眼液,为了确保该制剂安全有效,我们根据中 国药典2010年版眼用制剂项下有关规定建立了其质量控 制方法. 1仪器与试药 1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪,包括G1314A紫外 检测器,G1311A四元泵,G1316A柱温箱,G1322A真空脱气 机,G1329A带温控自动进样器(美国Agilent公司);Agilent化 学工作站.电子分析天平(德国Sartorius公司). 1.2试药西罗莫司对照品(纯度:98.0%,惠氏一百宫制药 有限公司提供),西罗莫司滴眼液(规格:5ml:5mg;中山大学 中山眼科中心制剂室提供,批号:20110301,20110302, 20110303);乙腈和甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯,水为 注射用水. 2质量控制 2.1性状本品为无色或几乎无色的澄明液体. 2.2鉴别取本品,照含量测定项下的方法试验,供试品主 峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致. 2.3检查 2.3.1pH值应为6.0,7.0. 2.3.2渗透压摩尔浓度取本品,照渗透压摩尔浓度测定法 (《中国药典)2ore年版二部附录?G)测定,本品的渗透压 摩尔浓度应为270,320mOsmol/kg. 2.3.3无菌检查照无菌检查法(《中国药典)2010年版二 部附录xIH)项下的薄膜过滤法进行检查,应符合规定. 2.3.4其他应符合眼用制剂项下有关的各项规定(《中国 药典)2010年版二部附录IG). 2.4含量测定 2.4.1色谱条件色谱柱:DiamonsilCl8(250mm×4.6mm, 5m);流动相:乙腈-甲醇.水(7.5:62.5:30,v/v/v),柱温 5O?,检测波长276nm,流速1.2ml/min. 2.4.2专属性试验在上述色谱条件下,分别空白样品 溶液,西罗莫司对照品溶液以及西罗莫司样品液HPLC图谱, 见图1,西罗莫司的保留时间约为12.6min,主药峰与基质峰 分离良好,峰形尖而对称,空白基质不干扰西罗莫司的测定. 图1西罗莫司的HPLC色谱图 A.空白样品;B.对照品;C.样品;1.西罗莫司 2.4.3对照品溶液的制备精密称取西罗莫司对照品 25.00mg,置25m1量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,精密 量取稀释液5Inl,置100ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇 匀,用0.45肺微孔滤膜滤过,即得. 2.4.4供试品溶液的制备精密量取本品5ml,置100ml量 瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,用0.45m微孔滤膜滤过, 即得. 2.4.5线性关系考察精密量取西罗莫司对照品储备液 (1013g/m1)2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0ml于lOml量瓶 中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得浓度分别为20,3O,4O, 50,6O,70,80g/rrIl的西罗莫司对照品溶液.各取2O注 入高效液相色谱仪,记录峰面积.将峰面积(A)与质量浓度 (c)做线性回归,得西罗莫司的线性回归方程为:A= 11.189C-4.0113,相关系数:r=0.9997.结果表明,在20—80 g/浓度范围内,西罗莫司峰面积和质量浓度呈良好的线 性关系. 2.4.6精密度试验按本品制剂处方,配制低(40m1), 中(50g/m1),高(60g/m1)三种含量模拟物,并于Et内 的不同时间和不同的13间分别进样5次,计算日内精密度分 别为0.35%,0.68%,0.55%,日间精密度分别为1.11%, 1.32%,0.98%. 2.4.7稳定性试验取对照品溶液和供试品溶液,置室温环 境下放置,分别于0.2,4,6,8,l2,24h测定其峰面积,计算其 RSD分别为0.10%和0.07%.结果表明,对照品溶液和供试 品溶液在室温下放置24h内基本稳定. 2.4.8回收率试验精密称取西罗莫司原料适量,分别约为 规定量的80%,100%,120%,各3份,共9份,按照处方比例 加入辅料,制备供试品溶液,照含量测定项下方法测定其含 量,计算回收率,考察相对标准偏差.试验结果表明,各浓度 下的平均回收率均在98.0%,102.O%之间,9个回收率数据 的相对标准偏差(RSD)小于2.0%.本法准确度良好.结果 见表1. 表1回收率试验结果 2.4.9耐用性试验在实验中对色谱柱,柱温,流速等条件 进行小的变化,以考察色谱条件发生细微变化时,测定结果满 足系统适用性的,测定结果是否准确.?不同色谱柱对 测定结果的影响:分别选用AgilentEclipseXDB-C8色谱柱 中国实用医药2012年4月第7卷第12期ChinaPracMed,Apr2012,V01.7,No.12 (规格:250mm×4.6mm,5m)和DiamonsilC18色谱柱(规 格:250mmx4.6/nnl,5m)进行试验,测定结果见表2.? 柱温对测定结果的影响:分别在45?,50?,55?条件下进行 实验,测定结果见表3.?流速对测定结果的影响:分别在 1.5,1.2,1.0ml/min条件下进行实验,测定结果见表4. 表2不同色谱柱的测定结果 较小 注:结果表明,选用上述两种型号的色谱柱对含量测定结果影响 表3不同柱温的测定结果 较小 注:结果表明,柱温主要影响峰的保留时间,对含量测定结果影响 表4不同柱温的测定结果 注:结果表明流速主要影响峰的保留时间,对含量测定结果影响 较小 综上所述:本方法确定的色谱方法耐用性较好,当色谱 柱,柱温,流速发生细微变化时,能满足系统适用性的要求,对 测定结果影响较小. 2.4.10样品含量测定取连续生产的3批西罗莫司滴眼液 (规格:5ml:5mg;批号:20120101,20120102,20120103)按所 述含量测定方法进行测定.另精密称取西罗莫司对照品适 量,配成50g/l11l的溶液作为对照品溶液,同法测定,按外标 法以峰面积计算,3批供试品含量测定结果见表5. 表5样品含量测定结果(n=3) 2.5眼刺激性试验选体重2—3kg成年健康家兔5只,每 天分别于每只家兔的一侧眼结膜囊中滴人0.1ml西罗莫司 滴眼液,另一侧滴入0.1ml生理盐水,给药后使兔眼被动闭 合10S,记录单次给药后6,24,72h至7d以及连续给药7d (2次/d)兔眼的局部反应情况.根据文献标准评分,结果 表明本品无刺激性,眼用安全. 2.6稳定性考察取3批样品,在温度(25-4-2)?,相对湿度 (40?5)%的条件下放置l2个月,每3个月取样一次,分别于 0,3,6.9,12个月取样按眼用制剂稳定性重点考察项目进行 ? 19? 检测.与0月相比,其性状,pH值,可见异物,含量等各项指 标均未见明显变化. 3讨论 西罗莫司是新型强效免疫抑制剂,为了探讨其治疗眼部 疾病的疗效,我们制备了西罗莫司滴眼液,为了确保该制剂安 全有效,我们根据中国药典2010年版眼用制剂项下的有关规 定L4拟定了其质量控制方法,包括性状,鉴别,检查,含量测 定等.其中西罗莫司的质量浓度测定目前多采用酶联免疫吸 附法.LC-MS/MS法等,但生物测定法操作过程复杂,影响 因素多,误差较大,而质谱仪又过于昂贵,因此我们建立了西 罗莫司含量测定的HPLC检测方法. 经方法学研究表明:采用该色谱条件测定西罗莫司滴眼 液的含量,峰形较好,主峰窄而尖,主成分峰分离较好,空白基 质在相同的波长上没有吸收,灵敏度高,专一性强,测定结果 稳定,回收完全,可以有效控制该产品的质量,而且该方法耐 用性较好,当色谱柱,柱温,流速发生细微变化时,能满足系统 适用性的要求,对测定结果影响较小. 我们在温度(25?2)?,相对湿度(40-I-5)%的条件下考 察西罗莫司滴眼液的稳定性,经观察12个月结果表明:本品 性状无变化,可见异物符合规定,含量,pH值检查结果均无明 显变化,可保证本品安全,有效;对无菌进行考察,均无菌生 长,故本品生物稳定性强.而且家兔刺激性试验也表明该制 剂对眼部无刺激性.因此本研究结果表明,西罗莫司滴眼液 质量稳定,对眼部无刺激性,是一种较理想的眼用制剂,可用 于探讨其防治角膜移植术后免疫排斥反应,黄斑变性等眼部 免疫性疾病的疗效. 参考文献 [1]朱曼,郭代红.新型大环内酯类免疫抑制剂.西罗莫司.中国药 物应用与监测,2005,2(6):26-28. [2]ChmelMarc-Antoine,LarkinDanielF.P.Simlimusandmycophe- nolateaScombinationprophylaxisincorneal~ansplantrecipientsat higllrejectionrisk.AmericanJournalofOphthalmology,2010,150 (2):179-184. [3]DugelPU,BlumenkranzMS,HallerJA,eta1.Aaandomized, dose-escalationstudyofsubconjunctivalandinn’gvitrea1injectionsof simlimusinpatientstlldiabeticmacularedema.oohthalmology. 2012,119(1):124-131. [4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)E京:化学工 业出版社,2010:882. [5]章元沛.药理学试验.第2版.北京:人民卫生出版社, 1996:222. [6]杨梅,赵芊,江骥,等.LC—MS/MS法定量测定人全血中替西罗 莫司及西罗莫司的药物浓度.药物分析杂志,2010,30(4):604- 608. [7]董振南,贾兴旺,王玲,等.微粒子酶联免疫吸附法测定西罗莫 司血药浓度的方法学评价.军医进修学院学报,2006,27(5): 366-367.