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巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程

2018-03-08 3页 doc 14KB 38阅读

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巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程 血清抗巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程 1、检测目的 规范巨细胞病毒IgM抗体的检测实验,以保证检测结果的准确性和重复性。 2、检测方法 )检测IgM抗体。 采用酶联免疫吸附法(ELISA 3、检测原理 采用捕获法原理检测人血清或血浆样品中人类巨细胞病毒IgM抗体(HCMV-IgM),微孔中预包被鼠抗人-IgM(u链),首先加入待检标本的血清或血浆样品后,样品中的IgM抗体都可被捕获,未结合的其他成份(包括特异的IgG抗体)将被洗涤除去;第二步,加入酶标记物,酶标记物是辣根过氧化物...
巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程
巨细胞病毒IgM抗体测定操作 血清抗巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程 1、检测目的 规范巨细胞病毒IgM抗体的检测实验,以保证检测结果的准确性和重复性。 2、检测方法 )检测IgM抗体。 采用酶联免疫吸附法(ELISA 3、检测原理 采用捕获法原理检测人血清或血浆样品中人类巨细胞病毒IgM抗体(HCMV-IgM),微孔中预包被鼠抗人-IgM(u链),首先加入待检标本的血清或血浆样品后,样品中的IgM抗体都可被捕获,未结合的其他成份(包括特异的IgG抗体)将被洗涤除去;第二步,加入酶标记物,酶标记物是辣根过氧化物酶(HRP)标记的基因重组抗原HCMVrp52-65。被捕获的IgM中的HCMV-IgM会与辣根过氧化物标记的HCMV重组抗原特异性的结合,洗去其他未结合物,最后用TMB底物显色。通过酶标仪检测吸光度(A值)从而判定样品中HCMV-IgM抗体的存在与否。 4、实验条件 (1)实验室应具有空调、离心机、加样水浴锅,酶标仪等设备。 (2)检验人员应经过操作前。 (3)用酶标仪测定。 5、操作程序 (1)样本采集。无抗凝静脉血2ml,当日不做的标本4?保存,必要时,-20?冻存。 (2)操作步骤。参照试剂盒说明进行操作。一肌步骤如下:?取出已包被HCMV抗原的微孔反应条板。稀释待测血清(血清1ul加稀释液200u1),加至微孔中,每孔100ul。将强阳性、弱阳性、阴性对照各100ul加至相应孔内。?37?温育30分钟;弃去孔内液,每孔加200--300ul洗涤液,共洗5次。每次弃去孔内液体后均需在滤纸上拍于(下同)。?每孔加酶标记抗体100ul,37?,30分钟。洗板同上。?加酶底物,色原溶液(OPD,TMB),每孔100ul37?,15分钟。?加终止液(2mo1,L HSO),24每孔50ul。于酶标仪上读取吸光度(A)值。 (3)结果判定:?阴性对照平均A值必须小于0 .2;弱阳性对照平均A值在0 .20,0 .65;弱阳性对照与阴性对照平均A值之比必须大于或等于2。符合以上3个条件, 本次试验结果可信,否则必须重复检测。?若待测血清孔呈色较弱阳性对照孔深则判为阳性,反之为阴性。但在弱阳性对照A值?10,范围内应复测一次,如确实高于弱阳性对照则判为阳性。 6、参考区间 正常人血清抗巨细胞病毒抗体IgM为阴性。 7、质量控制 (1)不同试剂盒所用抗原可能存在差异,检测敏感性也有差别,应参照阳性、阴性对照设定cutoff(co)值。 (2)试剂盒自冰箱取出后应恢复至室温(18,25?)后再开封使用。 (3)不同厂家、不同批号试剂不可混用,不得使用过期试剂。 (4)溶血、脂血、细菌污染血清不宜使用。 (5)洗涤微孔板时应彻底,孔内残留液体应在吸水纸上拍干,否则会影响测试结果。 (6)检验人员应经过操作前培训,熟悉判读结果;所使用加样器,酶标仪设备应定期进行校正,以确保实验数据的稳定。 8、临床意义 (1)巨细胞病毒(CMV)是人类病毒性感染的常见病原体之一。CMV感染可引起多种传染性疾病,特别是围产期孕妇感染是引起胎儿宫内发育迟缓、发育畸形的主要原因,可影响神经系统发育及导致智力障碍。 (2)血清中抗HcMY-IgM抗体阳性有助于对急性或活动性HcMV感染的诊断,脐带血查出抗HcMV—lgM抗体说明胎儿宫内感染。 (3)抗HcMV—IgG抗体阳性对诊断既往感染和流行病学调查有意义,若间隔3周后抽取血清该抗体阳性滴度升高4倍以上(双份血清进行对比),则对判断HCMV近期复发感染有意义。 (4)由于技术上的原因和生物学上的交叉反应,对阳性结果的意义应结合临床综合,尤其是孕妇,不应仅将抗HcMV—IgM抗体阳性作为终止妊娠的依据。
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