【毕业论文】不同脂肪酸对多脂鳞伞菌丝生长的影响

【毕业】不同脂肪酸对多脂鳞伞菌丝生长的影响 【标题】不同脂肪酸对多脂鳞伞菌丝生长的影响 【作者】罗 俊 【关键词】脂肪酸;?饱和度;?皂化;?多脂鳞 伞菌;?菌丝生长 【指导老师】陈今朝 【专业】生物科学 【正文】 1引言 1.1?多脂鳞伞 多脂鳞伞[Pholiota adiposa?(Fr) Quel]?隶属于担子菌亚门、层菌纲、无隔担子菌亚纲、伞菌目、球盖菇科、鳞伞属[1,2]，俗名柳树菇、黄柳菇等。多脂鳞伞菌丝生长快速，菌丝粗壮，菌落呈绒毡状，致密、白色[3]。多脂鳞伞有很高的药用价值，其独特的鳞伞多糖,?抗真菌，对肿瘤有一定的抑制作用[4-7]，对肉瘤S-180和艾氏癌的抑制率达90%。可预防葡萄球菌、大肠杆菌、肝炎杆菌、结核杆菌的感染。还具有降血脂、降血压、降血糖和抗辐射等药用功效。新鲜多脂鳞伞在日本市场非常受欢迎，在国内也已成为都市酒楼菜馆的时尚佳肴，倍受 青睐。 多脂鳞伞菌丝生长的适宜温度是20,25?;适宜pH为7.0,8.0。菌丝体生长不需要光线，较强光线能抑制菌丝的生长，在生长后期给予一定光线刺激，有利于原基形成。子实体生长阶段，需要一定的散射光[8?]。子实体单生或丛生，菌盖直径5,12cm，色泽金黄至黄褐色，有褐色平伏状鳞片或白色鳞片。菌褶密集，浅黄色至锈褐色，稍密。菌柄粗壮，纤维质，长5,15cm，粗1,3cm，中实，有 白色或褐色反卷的鳞片，下部常弯曲。菌环淡黄色，膜质，生于菌柄上部，易脱 落。 1.2?研究现状 我国菌物学家对伞菌的研究约有70余年历史。而早在19世纪末，欧洲、美国菌物学家就曾对我国的伞菌作过零星研究。20世纪50年代后，我国伞菌研究得到了较大的发展，特别是20世纪80年代以来，随着全国和地区性大规模科学考察、普查或专题调查，有了长足进步。编撰了一批如《中国的真菌》、《中国真菌总汇》 和《菌物学大全》等重要参考和工具书[8]。 目前，国内对多脂鳞伞的研究已经取得了一些成就。如苏延友[9?]通过配制母种培养基、原种培养基和栽培培养基，对多脂鳞伞生物学特性以及菌种分离、培养、选育等进行了观察和研究，基本掌握了泰山鳞伞生长发育所需的各种条件。季哲[10?]等利用单核菌丝体杂交法，采用三轮杂交系统研究，证明鳞伞为四极性异宗结合的担子菌，并发现单核体不同类型在群体中的比例显示出明显的偏向性分布。潘保华等[11]以多脂鳞伞菌株WT3为材料，通过对多脂鳞伞试管母种、原种及出菇菌袋菌丝生长动态的镜检观察，均发现分生孢子。进一步培养试验明，该菌株产生的分生孢子萌发菌丝对转管母种的菌丝复壮有促进作用。但在栽培后期产生大量不易萌发的分生孢子，堆积在菌丝纽结处，对子实体产生却有抑制作 用。 1.3?目的意义 多脂鳞伞栽培需要消耗大量木材资源，以草代木将成为多脂鳞伞栽培的主要方向。但以草作为原料时消耗快，添加油脂等高能物质可大大解决这个问题[12]。研究证明，在配制培养基时，适当增加含油精料，对多脂鳞伞菌丝生长和发育是 有利;含不饱和脂肪酸多的油脂更能促进多脂鳞伞菌丝生长。对油脂促进菌丝生长发育的机理仍不很清楚。为了解油脂促进生长的机理，从而有效地利用油粕类资源。为此，本课题拟采用固体平板培养的方法，研究不同饱和度的脂肪酸对多 脂鳞伞菌丝生长的影响，为以草代木将成为多脂鳞伞栽培提供理论依据。 2?材料 2.1?材料和仪器 ?供试菌株 武陵山多脂鳞伞菌，生命科学与技术学院食用菌实验室保藏。 ?供试培养基 PDA培养基:称取200 g?马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮沸30 min，四层纱布过滤，再加入葡萄糖20 g，琼脂15 g，继续加热搅拌混匀、冷却后再补足 水分至1000 ml，分装试管，121?灭菌20 min，摆斜面，备用。 母种培养基:葡萄糖50 g，KH2PO4 0.87 g，MgSO4 0.43 g，CaCl2 0.37 g，酵 母膏4 g，微量元素20 ml，琼脂12.5 g，水1000 ml，pH 7。 微量元素配方:FeCl3 0.5 g，MnCl2 0.36 g，ZnCl2 0.2 g，CuSO4 0.05 g，水 1000 ml。 ?供试药剂 品名 等级 生产企业 琼脂 ?食品级 石狮市狮头琼脂有限公司 葡萄糖 纯 成都科龙化工试剂厂 MgSO4?7H2O 分析纯 成都科龙化工试剂厂 KH2PO4 分析纯 成都科龙化工试剂厂 K2HPO4 分析纯 成都科龙化工试剂厂 CaCl2?2H2O 分析纯 成都科龙化工试剂厂 FeCl3?6H2O 分析纯 成都科龙化工试剂厂 酵母膏 生化试剂 北京奥博星生物技术有限责任公司 蛋白胨 生化试剂 军事医学科学院天津市东方卫生材料厂 ZnCl2 生化试剂 重庆北碚化学试剂厂 MnCl2 生化试剂 重庆博艺化学试剂有限公司 花生油 市售 涪陵爱家超市 土豆 市售 涪陵马鞍 油酸 分析纯 成都科龙化工试剂厂 硬脂酸 分析纯 成都科龙化工试剂厂 ?主要仪器 设备名称 型号 生产企业 电热恒温培养箱 PHP-600 重庆市永生实验仪器厂 分析天平 AB104-N型 梅特勒-托利多仪器上海有限公司 座式自动电热蒸汽灭菌器 ZDX-35BI型 上海申安医疗器械厂 双人单面净化工作台 SW-CJ-2FD 苏州净化设备有限公司 3?方法 3.1?培养基 饱和脂肪酸培养基(1号):葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，KH2P04 0.46 g，MgSO4 0.5 g，K2HPO4 l g，琼脂15 g，水1000 ml，pH自然。添加0?.1,硬脂酸，将浓度 为2% NaOH溶液在75?慢慢滴加到脂肪酸中达到皂化状态，然后与基础培养基 混合均匀，高压灭菌制成平板备用。 多不饱和脂酸培养基(2号):添加0.1,花生油，制作方法同上。 单不饱和脂肪酸培养基(3号):添加总重0.1,油酸，制作方法同上。 饱和，多不饱和脂肪酸培养基(4号):添加总重0.1,硬脂酸和花生油(1:1质量 比)，制作方法同上。 单不饱和脂肪酸+饱和脂肪酸培养基(5号):添加总重0.1,油酸和硬脂酸(1:1 质量比)?，制作方法同上。 单不饱和脂肪酸+多不饱和脂肪酸培养基(6号):添加总重0.1,油酸和花生油 (1:1质量比)，制作方法同上。 混合脂肪酸培养基(7号):添加总重0.1,的硬脂酸:油酸:花生油(1:1:1质量 比)，制作方法同上。 空白培养基(8号):葡萄糖20g，蛋白胨2g，KH2P04 0.46g，MgSO4 0.5g，K2HPO4 lg，琼脂15g，水1000ml，pH自然。 3.2?菌种活化 将菌种接种于PDA培养基上，于25?培养箱中进行培养7d，冰箱保藏备用。 3.3?接种和培养 取活化母种，用直径为0.4cm打孔器沿同心圆打块，用接种铲定量接种于培养基平板中央，接种块面积约0.2cm2。接于8个平板中，25?恒温培养箱避光培养 20 d。 3.4?菌丝体发育 每天定时观测菌丝体生长情况，记录菌丝体萌发时间和菌落直径。计算菌丝平均 日生长速度，观察菌落颜色和轮纹有无等培养性状。菌丝生长速率=(菌落直径― 接种块直径)/菌丝生长天数，菌丝的日均生长速率用spss数据处理。 4?结果与分析 多脂鳞伞菌在PDA培养基上生长状况如图1。25?恒温培养7 d后，母种在PDA 培养基上生长良好。菌丝体呈现出浅黄色，绒状如肉松。 图1 PDA培养基中母钟菌落形态图2?各种培养基上菌落的生长情况 4.1?饱和脂肪酸组菌丝体形态特征 从表1饱和脂肪酸组(第1组)菌丝体在培养了20d之后，可以看出，菌丝的萌发时间比较缓慢一般都在4 d左右，菌体直径在20 mm左右，菌落边缘菌丝较长呈 淡黄色，而内部比较稀疏呈浅白色，其平均生长速率为0.93 mm/d。 表1?饱和脂肪酸组菌丝体生长情况 组别 萌发时间(d) 菌落形态 轮纹 生长速率(mm/d) 1 4 絮状 不明显 0.80 2 4 絮状 有 0.90 3 4 絮状 无 0.90 4 3 绒絮状 明显 1.00 5 4 絮状 有 0.90 ?平均值 ― ― ― 0.90 4.2?多不饱和脂肪酸组菌丝体形态特征 从表2中可以看出整个培养基中菌落的菌丝是比较均匀的，呈现出来的是一种绒 絮状，整体是浅黄色，有轮纹的存在，萌发时间较短一般在3d左右。 表2?多不饱和脂肪酸组菌丝体生长情况 组别 萌发时间 菌落形态 轮纹 生长速率 1 3 绒絮状?浅黄色?较密 不明显 1.00 2 3 绒絮状?浅黄色?较密 有 1.00 3 3 绒絮状?浅黄色? 有 1.00 4 3 绒絮状?浅黄色?较密 有 1.00 5 4 绒絮状?浅黄色?较密 有 0.90 平均值 ― ― ― 0.98 4.3?单不饱和脂肪酸组菌丝体形态特征 从表3单不饱和脂肪酸组可以看出其菌丝日均生长速率在1.000mm/d以上，菌丝生长较快。菌落从横向来看其直径是比较大的，而菌落边缘排列得比较有呈乳白色的针状，菌落中有明显的轮纹出现，其菌丝的总体萌发时间也相对较短。 表3?单不饱和脂肪酸组菌丝体生长情况 组别 萌发时间 菌落形态 轮纹 生长速率 1 3 绒毡状?边缘乳白色呈针状?较密 明显 1.00 2 3 绒毡状?边缘乳白色呈针状?较密 明显 1.00 3 3 绒毡状?边缘呈针状?生长均匀 明显 1.10 4 3 绒毡状?浅黄色?较密 明显 1.00 5 4 绒毡状?边缘乳白色呈针状?较密 有 1.00 平均值 ― ― ― 1.01 4.4?饱和+多不饱和脂肪酸组菌丝体形态特征 从表4?饱和+多不饱和脂肪酸组可以看出虽然各组间菌丝的致密程度不一样，但 从其菌丝分布的部位可以看出，菌落边缘较密于菌落内部。 表4?饱和+多不饱和脂肪酸组菌丝体生长情况 组别 萌发时间 菌落形态 轮纹 生长速率 1 4 绒絮状?边缘较密呈浅黄色 有 1.00 2 3 绒絮状?边缘较密呈浅黄色 有 0.90 3 3 绒毡状?边缘呈针状?生长均匀 明显 1.00 4 3 绒絮状?边缘较密呈浅黄色 明显 1.00 5 4 绒絮状?边缘较密呈浅黄色 有 1.00 平均值 ― ― ― 0.99 4.5?饱和+单不饱和脂肪酸组菌丝体形态特征 从表5可以看出菌丝的萌发时间较长，菌丝相对于其他组较稀疏，该组日均生长 速率为0.975mm/d，菌丝分布比较均匀。 表5?饱和+单不饱和脂肪酸组菌丝体生长情况 组别 萌发时间 菌落形态 轮纹 生长速率 1 4 绒絮状?呈浅黄色?生长均匀 无 1.00 2 4 绒絮状?生长均匀呈浅黄色 有 1.00 3 4 绒毡状?生长均匀呈浅黄色 有 1.00 4 4 绒毡状?浅黄色?较密 有 1.00 5 4 绒毡状?生长均匀呈浅黄色 有 0.90 平均值 ― ― ― 0.98 4.6?单不饱和+多不饱和脂肪酸组菌丝体形态特征 从菌丝的横向扩展来看单不饱和+多不饱和脂肪酸组无疑是菌落直径最大的一 组，而且它的生长速率也很快，萌发时间为3d左右。 表6?单不饱和+多不饱和脂肪酸组菌丝体生长情况 组别 萌发时间 菌落形态 轮纹 生长速率 1 3 绒毡状?呈黄色?浓密 明显 1.00 2 3 绒毡状?呈黄色?浓密 明显 1.00 3 3 绒毡状?呈黄色?浓密 有 1.00 4 3 绒毡状?浅黄色?较密 有 1.10 5 4 绒毡状生长均匀 有 1.10 平均值 ― ― ― 1.04 4.7?混合脂肪酸组菌丝体形态特征 混合脂肪酸组是各组中所加脂肪酸种类最多的一组，但是其最终的结果却不是最好的，可以看出各组的萌发时间都在4 d左右，而且生长速率平均在0.91mm/d。 表7?混合脂肪酸组菌丝生长情况 组别 萌发时间 菌落形态 轮纹 生长速率 1 4 绒絮状?呈白色?均匀 不明显 0.90