亮氨酸脑啡肽对栉孔扇贝血细胞吞噬作用的影响
亮氨酸脑啡肽对栉孔扇贝血细胞吞噬作用
的影响
第46卷第2期
2007年3月
湖北农业科学
HubeiAgriculturalSciences
Vo1.46No.2
Mar..2007
文章编号:0439—8114(2007)02-0281—02
亮氨酸脑啡肽对栉孔扇贝血细胞吞噬作用的影响
刘东武,孙虎山
(1.山东理工大学
测试中心,山东淄博255049;2.烟台师范学院生命科学学院,山东烟台264025)
摘要:向栉孔扇贝(Chlamysfarreri)血淋巴中加入不同浓度的亮氨酸脑啡肽(1eucine—enkephalin,L—
ENK).研究其对栉孔扇贝血细胞吞噬杆菌作用的影响.结果
明,血细胞的吞噬能力随L-ENK浓度的
升高而增强,L-ENK能增强栉孔扇贝血细胞的吞噬能力,可作为一种较好的免疫刺激剂.
关键词:亮氨酸脑啡肽:栉孔扇贝:血细胞;吞噬作用
中图分类号:$944.4文献标识码:A
enkephalinonthePhagocytosisAbilityofChlamysfa'S EffectsofLeucine—
Haemocytes
LIUDong—WU1,SUNHu-sha#
(1.AnalysisandTestingCenter,ShandongUniversityofTechnology,Zibo255049,Shandon
g,China;
2,CollegeofLifeScience,LudongUniversity,Yantai,264025,Shandong,China)
Abstract:Thephagocytosisabilitiesofhaemocyteswereinvestigatedafter1,5,50IxgmLLeu
—enkephaline(L-ENK)were
addedintothehaemolymphofChlamysfarreri.ThephagocytosisabilityofChlamysfarreri'h
aemocyteswasenhancedwith
increasingconcentrationoftheL-ENK.Bybindingwithopioidreceptors,L—ENKparticipatedintheregulationand improvementoftheimmuneprocessesofChlamysfarreri.
Keywords:leucine—enkephalin;Chlamysfarreri;haemocyte;phagocytosis
双壳贝类不能产生特异性的抗体,吞噬作用在
其防御
中起着重要作用,吞噬作用可引起呼吸
突发.进一步产生具有杀菌作用的氧自由基等活性
氧(包括超氧阴离子,羟自由基,单线态氧,过氧化
氢等),是贝类血细胞杀死被吞噬的病原菌等异物
的主要机制之--[I.内源性阿片神经肽是一类重要
的免疫调节因子,贝类的神经组织和血淋巴中均有
脑啡肽分子的存在_2_5].有关亮氨酸脑啡肽(1eucine—
enkephalin.L-ENK)对栉孔扇贝(Chlamysfar'reri)血
细胞吞噬作用的影响,国内外尚未报道.本试验采
用荧光显微镜技术研究了L—ENK对栉对扇贝血细
胞吞噬杆菌作用的影响,从而为研究贝类的免疫机
理提供科学依据.
1材料与方法
1.1材料
栉孔扇贝购于烟台农贸市场,体长为45,55
mm红色杆菌为本实验室从海水中分离所得,试验
所用L—ENK为Sigma公司产品,其他试剂均为国产
分析纯.
1.2方法
用5号针头和5mL注射器从栉孔扇贝闭壳肌
血窦中取血.杆菌经无菌的过滤海水洗下,镜检计 数.并用无菌海水调至浓度为1.20x10个?mL,.分 别取浓度为100g?mL的L—ENK0.40L,20L 和200L加入3个离心管,再分别取混合血样200 L依次加入上述3个离心管中,然后加入不等量 的NaC1(2%),使试验组总体积均为400L,使L— ENK在血样中的浓度分别为1g?mL,,5txg?mL 和50txg?mL,;取混合血样200L,加入NaC1 (2%)200L,作为对照.10min后向各管中分别加 入10L杆菌液,室温下作用30min.涂片,空气干 燥,95%1~4J酒精固定10min,空气干燥,0.1%醋酸酸 化30S,0.01%吖啶橙(AO)染色10min,0.07mol?L 收稿日期:2006—09—28
基金项目:国家"973"计划项目(G1999012005) 作者简介:刘东武(1974一),男,山东单县人,助教,主要从事动物生理研究,(电
话)0533—2786781(电子信箱)liudongwu@sdut.edu.cn.
282湖北农业科学2007年
KH2PO洗3次,每次1min,CaC12分化30S,然后滴 一
滴0.07mol?L,KH2PO,加盖玻片,荧光显微镜下 观察,计数吞噬杆菌的血细胞数,计算吞噬率. 2结果与讨论
在荧光显微镜下,血细胞的细胞核为黄色,细
胞质为浅绿色,杆菌为红色.杆菌附于血细胞的表 面,具吞噬能力的血细胞即伸出伪足将杆菌包围, 形成吞噬泡进人血细胞内部(图2).血细胞吞噬杆
ENK浓度为0…1550tzg?mL 菌的结果见图1.L—
时,血细胞的吞噬率分别为26.9%,30.1%,31.1%和
37.0%.试验组血细胞的吞噬率均高于对照组,并且 血细胞的吞噬率随L—ENK浓度的升高而提高. (xl000,血细胞,吞噬杆菌)
图1栉孔扇贝血细胞吞噬杆菌过程
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由于双壳贝类缺乏免疫球蛋白,在贝类机体的 免疫防御反应过程中.血细胞起着重要作用;血细 胞可通过吞噬,包囊,形成细胞结等细胞免疫反应 来清除和杀灭病原体ll】.血细胞吞噬能力的强弱是 贝类机体免疫防御能力的重要指标.当血细胞遇到 细菌,酵母菌等小颗粒的异物时,血细胞伸出伪足 吞噬这些小颗粒异物.异物被吞人细胞后与溶酶体 融合,最终被各种水解酶消化分解.异物进人贝类 体内被清除的过程包括识别,附贴,吞噬和降解等 几个步骤[63.Singh等人的研究结果表明.M—ENK和 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子协同作用.可使鼠腹 膜和脾巨噬细胞的吞噬活性增强[71.本实验结果也 表明,血细胞的吞噬能力随L—ENK浓度的升高而 提高;吗啡和p一内啡肽通过与受体结合可调节 四膜虫的吞噬活性l819],L—ENK通过与受体结合调节 蚯蚓阿米巴样细胞的吞噬和聚集活性?.因此.L— ENK对栉孔扇贝血细胞吞噬能力的影响可能也是 通过与血细胞表面的受体结合而起作用的.
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(责任编辑万景辉)