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鸡新城疫的症状与实验室诊断

2017-09-28 3页 doc 13KB 15阅读

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鸡新城疫的症状与实验室诊断鸡新城疫的症状与实验室诊断 鸡新城疫的症状与实验室诊断 吴佳宁(沈阳市动物疫病预防控制中心 110000 )新城疫(ND)是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。1 临床症状患鸡体温升高到43,44?,精神沉郁或闭眼嗜睡,病鸡腹泻呈黄白色或绿色,有时带血,常摇头、嗳气,发出“咯咯”声,口和鼻中有多量黏液,嗉囊内积液,病程稍长或呈慢性经过时,常有腿、翅麻痹或头、颈歪斜等神经症状。剖检特征病变是腺胃的乳头突起部或黏膜上有点状或斑状出血,有时形...
鸡新城疫的症状与实验室诊断
鸡新城疫的症状与实验室诊断 鸡新城疫的症状与实验室诊断 吴佳宁(沈阳市动物疫病预防控制中心 110000 )新城疫(ND)是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。1 临床症状患鸡体温升高到43,44?,精神沉郁或闭眼嗜睡,病鸡腹泻呈黄白色或绿色,有时带血,常摇头、嗳气,发出“咯咯”声,口和鼻中有多量黏液,嗉囊内积液,病程稍长或呈慢性经过时,常有腿、翅麻痹或头、颈歪斜等神经症状。剖检特征病变是腺胃的乳头突起部或黏膜上有点状或斑状出血,有时形成溃疡,尤其在腺胃与食道交界部更为明显。肌胃黏膜上有点状或不正形的出血斑点。肠道、尤其是盲肠扁桃体和小肠黏膜(迥言瓣部)以及直肠黏膜上出血和不同大小界限清楚、出血性纤维素坏死伪膜,其他各部位如心、腹部脂肪及喉头、气管等处都有出血斑点。2 病毒分离材料应采自早期病例,慢性病例不适宜于分离禽病毒,病鸡扑杀后应用无菌手术采取脾、肾、肝、肺(通常有较高的病毒滴度),脑(病毒的存在时间较其他组织长)或骨髓(最不易被细菌污染)等组织。生前可用灭菌棉拭子获取呼吸道或泄殖腔分泌物。将棉拭子浸出液或经研磨的组织悬液制成1:5,10乳剂,每毫升加青、链霉素各1000,2017单位,以抑制可能污染的细菌,置冰箱中作用2,4小时,然后离心沉淀,取其上清液作为接种材料。2.1 鸡胚接种常用9,10日龄的鸡胚,每份病料至少注入5个鸡胚,接种于绒毛尿囊膜或尿囊内。照蛋,划出气室位置,在鸡胚胎面观看胚胎活动,选择无大血管处标一记号。在气室顶部和标记处用碘酊和酒精消毒,并各钻一小孔。用较干的碘酊棉球涂布小孔。用1 mL注射器吸取上述处理过的材料,插入小孔内约3mm,缓缓注入0.1,0.2mL,拔出针头。用融化石腊封口,在蛋壳上标明日期。置37?温箱培养,每天照蛋二次,至全部或大部分鸡胚发生死亡为止(24h内死亡的胚弃之)。将死胚收藏于4?冰箱内,气室向上,6,24h获尿囊液。收获尿囊液时,以碘酊涂擦气室和气室附近的蛋壳,用灭菌摄子将气室处蛋壳敲破,剥去蛋壳,用另一灭菌小镊子剥去蛋壳膜,并撕破绒尿膜,暴露出清晰的尿囊液(混浊者已污染,应弃去不收),以镊子将胚胎和胚膜压向一边,吸取尿囊液于灭菌瓶中,并加标签。用透明而无菌者作血凝反应,可在96孔微孔板上进行,也可将尿囊液一滴与1%,2%鸡红细胞悬液一滴在一块白瓷板上相混和,如发生红细胞凝集,即用已知抗鸡新城疫血清作血球凝集抑制试验(HI),出现抑制反应,便可得到确诊。2.2 组织培养(细胞培养)鸡新城疫病毒能在禽源原代细胞,一些哺乳动物的原代细胞和细胞系中生长繁殖,因此也可用细胞培养的方法来分离病毒。最常用的是在玻璃和塑料容器内长成单层的鸡胚成纤维细胞。操作时可将待检液作一系列十倍比的稀释,分别注入到鸡胚成纤维细胞的培养管中,24,48h出现细胞病变(细胞圆缩颗粒化,拉长呈蜘蛛网或干枝梅样),取培养液作HA和HI试验,鉴定病毒。也可在细胞培养中用已知血清进行中和试验,作出鉴定结果,如将待检材料注入鸡胚成纤维细胞的平皿培养中。新城疫强毒通常出现大而透明或大而红色蚀斑(2,4mm)。根据蚀斑形成单位可测定病毒浓度。3 血清学检查由于循环抗体产生后,病毒可从寄主的组织中迅带消失,所以慢性病例难于分离病毒,应通过特异抗体的检查来间接诊断此病。通常中和抗体较血凝抑制(HI)抗体维持时间要长些,但中和试验较费时花钱,而HI试验能在短时间内作大量测定,检出的抗体滴度一般相当于中和滴度。因此常用HI试验来检查抗体。抗体滴度于感染后5,7d 开始上升,15,20d可达高峰且能维持较长时间,受强毒感染而耐过的鸡在体内产生极高的抗体水平,滴度高达11(Log2)以上。在感染群内出现高抗体的数量随鸡群原有的抗体水平而异,与鸡的年龄也有关系,平均可达30%,在只有少数出现症状,不断发生死亡的鸡群中,可对活鸡进行抗体检测。如有较多高抗体鸡的出现,说明鸡群已受过新城疫野毒感染。免疫过较长时间的鸡群持续保持高水平的抗体,可能是隐性感染或慢性感染的结果。
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