[doc] 水貂季节换毛皮肤发生的组织化学变化

[doc] 水貂季节换毛皮肤发生的组织化学变化 水貂季节换毛皮肤发生的组织化学变化 ‘【一V7续,欲次 水貂季节换毛皮肤发生的组织化学变化 一一……为活2丹 忠砬f 毛皮动物毛更换周期太体分为活性期,.苏丹染色一,…’ 衰退期和休止期三个大的时期.在活性期. 皮肤上的毛囊和鳞茎状毛囊变得最大,在它 们的周围,毛细血管网发达.在鳞茎状毛囊 处增殖的毛细胞均为柔软的,但是,毛囊内 往上方移动,开始分化,角质化,并硬化起 来角质化意昧着蓄积在毛细胞内的结构蛋 白质角质的SH基的S--S结合化.进入衰退 期停止生长的毛,其末端朝毛囊上部移 动,毛囊变短,进入休止期,供毛皮的水貂 此时期就进入了打皮期. 作为有代表性的毛皮兽水貂,具有季节 型的毛周期,每年换毛两次.笔者搞清了季 节换毛的水貂皮肤组织的一般形态以及构成 成分的含量及其可溶性,以换毛期为中心明 显地发生变化,并作了报道本文主要是用 组织化学方法探讨了水貂季节换毛的皮组织 变化,特别是毛以及毛囊的变化,即用苏丹 染色法检验了皮脂腺J用PAS染色法检验 了毛囊糖原;用铁氰盐化铁染色法检验了角 质化区域;用苔红素染色法检验了弹性纤 维;用DACM法检验了SH基埘及S—S结 合的存在状态. 材料及方法 1.供试材料 五月上句出生的同一父系的蓝宝石种公 貂,出生后每周杀一头.在杀死前,饲养管 理条件相同.屠杀后立即冷冻(一2O?,. 从水貂背的中部切下5mm见方的皮肤.取 下的皮肤片包埋在OCT化合物r,用低温 恒温器制廊箭头断面及毛囊垂直断面的冻结 切片t厚度为1Om). 把10%摇尔马林固定的切片,用5O乙 醇处理后,用丙酮苏丹IV染色液进行染色. 用苏木精所形成的对比染色后,用丙三醇橡 胶封起来. 5.苔红素染色 把lO%福尔马林固定的切片用蒸馏水洗 净后,用苔红素溶液(1地衣红,1% HCI,70乙醇)染色约I小时,脱水后用 加拿大枞树香脂胶封起来. 4.PAS染色 把100%乙醇固定的妞f片用蒸馏水洗净 后,用0.5N过碘酸水溶液处理5分钟.把 氧化的切片用席夫试药染色I5分钟,用亚硫 酸溶液(O.5~NaHSO,0.05HCI)洗净. 用苏木精所形成的对比染色后,再用加大拿 槲树香脂胶封起来 5.铁氰盐化铁染色 把lO福尔马林固定的切片需用对制备 的铁氰盐化铁溶液(0.025Ks[Fe(C N).],0.75Fe(SO)3}4分钟处理4次. 染色后,用流水净洗6O分钟后用加拿大枞树 香脂胶封起来 B.DACM染色 用Taneda等人的方法,使用N一(7一di ethylami?0—4一methyl一3一c.ur玎any1)一 malelmide)(DMCM)与蛋白质结合的SH 基以及S-S结合的萤光染色. (1)sH基把空气中干燥切片用 TAS(O.85%NaCIin5mMTrisacetate pH6.8)40?5分钟洗净后,与DACM溶 液(O.OlmMDACMiI1TAS)反应5分钟 (室温).用TAS洗净的切片封,,KPerma ? ‘ ? ..I一-?? l ‘ ? .- FIuor(LiPshowUSA)巾. (2)s—S基空气干燥的切片用TAS洗 净后,用NEMI溶液(O.15MN—ethylma— leir玎ideinTAS)处理1O分钟(37?),把SH 基分为程序段.TAS洗净的切片用DTT溶 液(40ramditiothreitol,0.5raMEDTA j11TAS)37?处理5分钟,还原来自S—s 结合的SH基用(1)所述的方法去染色 7.观察 用DACM方法萤光染色的标本,用萤 光显微镜观察,其它用光学显微镜观察. 结果 1.HE染色像 显微镜标本的最常见的染色方法是用 HE染色,如图1(略,所示.l6周龄箭头 状断面切片,在休止期夏毛的下方处,冬 毛的新的毛囊向皮下脂肪层伸展.在换毛 时的毛囊横断截面中,观察到休止期的毛’ 冬毛)和活性期的毛’夏毛)混合存在于同 一 毛囊群中. 2.苏丹染色像 对红染脂质的苏丹来说,唯有皮脂腺呈 阳性反应(图2,略),在有螫毛的毛囊群 的两侧,出现包围毛囊群的2周龄皮脂腺, 在9周龄前,一直生长并增大.但是,如果 从毛周期的关系来看,大小,染色性都未发 生变化,任何皮脂腺苏丹染色均阳性. 5.苔红素染色像 用苔红素染色,观察到深红揭色丝状弹 性纤维在毛囊,特别是螫毛毛囊的放射状的 真皮上的伸展像(图3,略).毛囊周围的 苔红素阳性弹性纤维的条数,长度,在活性 期以及休止期内,无明显的变化,与毛囊的 长短无关,是固定的. 4.PAS染色像 由PAS红染的糖原不管是螫毛,还是 绒毛都存在于毛囊之中(图4,略?.18周龄 的水貂皮肤相当于换毛期,糖原均存在于话 性期和休止期的毛上无论是在箭头状断 面,还是毛囊垂直断面切片上,休止期毛囊 PAS染色为阳性.活性期毛囊从皮脂腺下 部到鳞茎状毛囊上部,PAs染色为阳性. 继续生长的新毛囊,含鳞茎状囊在内, PAS染色均呈现出阳性反应,在活化期毛 囊上,在外根鞘观察到阳性反应,即使进入 衰退期也可见到阳性反应,但染色性弱,只 局限于皮脂腺下部. 5.铁氰盐化铁染色像 用铁氰盐化铁蓝色染色的,不管整乞还 是绒毛只是处于活性期,毛囊未表现出阳性 反应(图5略).即使表现出阳性反应的活 性期的毛,其阳性部位从毛鳞茎状囊上部到 皮脂腺下部,因为毛髓质未表现出阳性反 应,所以,在横断面上染成环状,在新生毛 的纵断面上染成锥形杯状. 6.DACM染色像 表现出DACM阳性反应的SH基,即使 在休止期也见到毛囊,毛及皮脂腺(图6, 略).相反,在活性期毛囊的毛鳞茎状囊及 毛上均存在着S—S结合,但是,在真皮毛 乳头上几乎见不到DAcM阳性反应.若观 察活性期的真皮各层的话,SH基在皮脂腺 下部舶毛囊及毛上呈强阳性,s—s结合则 相反,从皮脂腺到上部的毛囊及毛呈强反 应.若把皮脂腺水平横断面扩大,在SH基 染色上,毛囊外根鞘活性期螫毛,绒毛的毛 髓质及休止期毛表皮层则为强阳性.另一方 面,在S—S结台染色上,毛囊外根鞘及活 性期的毛皮层囊为弱阳性,休止期的毛全都 被强染. 7.角质化 铁氰盐化铁染色中被鉴定的角质化区域 中螫毛角质化的进展状态如图7(略)所示. 毛鳞茎状囊部仪毛皮层囊被染成浅蓝色, 在毛皮质和毛髓质上未显示出阳性反应.毛 ?1-’ 根下部毛表皮层囊被深染,毛皮质被浅染, 丽毛髓质未被染色.再往上部,毛表皮皮层 囊叉成为浅蓝色,毛皮质被深染,然而,毛 髓质未被染色 用DACM所产生的sH基染色像上,毛 根下部的外根鞘,内根鞘,毛表皮层囊,毛 髓质均为阳性’围8,略).在皮脂腺下部 (角质化区域上端),外根鞘,毛表皮层囊及 毛髓质呈阳性反应休止期染色强度均弱, 但是,外根鞘,毛表皮层囊均为阳性.一方 面,s,S结台染色像在毛根下部,内根鞘, 外根鞘均呈弱阳性,另一方面,毛表皮层囊 及毛皮则被强染在皮质腺下部,虽然外根 鞘的阳性反应很强,但是,毛髓质却未呈阳 性反应.休止期外根鞘内根鞘及毛表皮层 囊为强阳性,毛皮质也被染色另外,休止 期结合组织性毛囊被SH基S,S结合所强 染. 结果与讨论 已知在细胞的增殖,分化,移动同时进 行的话性期里,在作为生毛的母体——毛囊 上,特别是在毛鳞茎状毛的周围,蜂巢形网眼 状的毛细管网发达,营养供给充足.由于活 性期的毛囊呈强PAS阳性反应,所以,活 性期的毛囊就以糖原(能量)贮藏库发挥作 用,不仅由毛细血管直接供给营养,而且作 为能量贮藏系统对毛的成长,分化也十分必 要. PAs阳性部位即使在活性期内也发生 变化.即初期贮备在整个薪生毛囊的糖原, 在最旺盛期的毛囊并见不到糖原.认为在细 胞增殖工厂一毛囊上,发现最良好的增殖 机能,因此,能量消耗也高.从活性期的末期 刊衰退期,PAS附性部位进一步往上部移 动,染色强度下降这可能是伴随毛的生 长,分化,糖原被消耗,不需要贮备的缘 故.. 一6一 活性期的PAS阻性部位,印从毛囊上 部到皮脂腺下部的范围,与同期用铁氰化铁 所染色的角质化区域一致.角质化为毛的最 后分化阶段,角质化区域的毛细胞硬化并死 亡,排出体表外.毛的生长,分化的组织化学 指标,PAs及铁氰盐化铁染色的阳性反应 只在皮脂腺下部可以观察到.搞清了体表面 现象——换毛只在真皮深部发生.这与HE 染色像所出现的定量形态观察的结果,即随 换毛的毛囊伸长,萎缩现象在该真皮深部发 生相一致. 毛的角质化始于毛囊上的小皮,结束于 皮脂腺下部的毛皮质.即由外到内,由下 部到上部进行.这种角质化进展过程,在铁 氰盐化铁染色像,变得非常明显,确认为DA CM的s._s结合染色所致.但是,同时用 DACM染色搞清了角质化的角蛋白古硫的 全部SH基不是S,S的结合.特别是在休止 期,在毛皮层囊尚存在着相当量的sH基, 表现出很强的S-S结合染色性,同时,揭 示出毛皮层囊含高硫黄角蛋白.进而,在铁 氰盐化铁染色中,只能观察到毛的角质化, 不过,用DACM法搞清了毛囊的角质化. 无论是由铁氰盐化铁,还是DACM染 色,都无法确认毛髓角的角质化.一般来 说,毛髓细胞在角质化区域死亡,空胞,同 时形成角质化,不过,在本实验中,无论在 什么水平的横断面上,都显示出很强的SFI 基染色性,未见s,S结台的明显的染色像 水貂脱脂于燥皮粉的弹性硬蛋白的含量 在换毛期暂时有所增加,不过,苔红素染色 像中未能观察到变化.把被骨胶原纤维覆盖 的弹性纤维用苔红素不能染色.从毛囊向放 射状的真皮伸展的弹性纤维,均能观察到有 活性期及休止期,弹性纤维作为毛囊的支持 组织丽发挥着作用. 张忠革译自(日]c北大在帮文纪要’lr(3); 5~了巧(1,H)孙禄梭 l ? 鼍 ? ?.?一_l