咬合干扰对大鼠颞下颌关节软骨炎性因子表达的影响

咬合干扰对大鼠颞下颌关节软骨炎性因子达的影响 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师 或指导小组 的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则，承担相应的法律责任。 二级学院领导盖章: 研究生签名:，玲辁】 ’ 导师签铋。眨 ( 。鼍:, 11年占月 2D 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究 成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 巳((鬲竹立设咒 研究生签各闰始-J 翩签氅男乙 知l1年6月B日 FJIIJfllJiflr111frllJillIulflllflfrilllflfl Y1 901870 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………(3 研究论文咬合干扰对大鼠颞下颌关节软骨炎性因子表达的影响 ―1L―j- 日U 舌………………………………………………………………………(4 材料与方法………………………………………………………………7 结果………………………………………………………………………(8 附图……………………………………………………………………((15 附表…………-…………………………………………………………17 讨论……………………………………………………………………21 结论………………………………………………………………………22 参考文献…………………………………………………………………25 综述正畸治疗与颞下颌关节紊乱病的研究……………………………(31 致谢…………………………………………………………………………((32 个人简历……………………………………………………………………(-33 中文摘要 咬合干扰对大鼠颞下颌关节软骨炎性因子 表达的影响 摘 要 目的:探讨实验性咬合干扰对实验大鼠颞下颌关节软骨炎性因子表 达的影响。 方法:选用6周龄雌性SD大鼠24只，随机分为A组 咬合紊乱组 上颌及左侧下颌第一磨牙和第二磨牙间放置橡皮圈，推第一磨牙向近中 移动，制造咬合干扰动物模型。B组大鼠于6周后去除咬合干扰，C组不 做处理。全部大鼠8周后处死，切取双侧颞下颌关节。苏木精(伊红染色观 察组织形态变化及RT-PCR方法检测颞下颌关节软骨中TNF(仅，IL(1， IL-6及IFN吖的表达。 结果:在咬合干扰条件下，3组大鼠血常规检测未见异常;A组和B 组大鼠颞下颌关节出现典型的退行性变; RT(PCR检测结果显示:炎性 因子IL(1，IL(6及TNF(0【在各组大鼠中均有表达，三组之间比较虽无 统 计学差异 矿O(05 ，但实验组的表达均高于对照组，实验A组IL(6和 n吓(Q的表达高于实验B组。3组大鼠均未检测到IFN-'t的表达。 结论:1(咬合干扰可造成大鼠颞下颌关节出现典型的退行性变，且 性因子与实验大鼠髁突软骨病理性改建活动有相关性2(正畸临床治疗 过程中应注意避免和及时消除咬合干扰因素以减轻颢下颌关节的负担。 关键词:SD大鼠;咬合干扰;颞下颌关节软骨;炎性因子 onthe ofthe interferenceexpression ofocclusal Effect articular ofthe inthe cartilage inflammatorycytokines rats jointin temporomandibular Abstract effectof createddisordered the experimentally study Objective:To inthearticular of cytokines the inflammatory expression occlusion ECDO on inthe Dawley SD rats?? ofthe joint Sprague temporomandibular cartilage and selected ratswere femaleSD randomly of6weekold Methods:24 occlustion three occlusion ，B disordered into grouped groups:A disordered ananlmal tocreate 8rats order group??In per C contr01 ，with eliminated ，and thefirst between wasinserted rubberband ofocclusalinterference，a model leftside andonthe of dentition the side molaron andsecond upper molar right towards tomove Aand thefirstmolars in B，forcing lowerdentition of group after6weeksin B?? waseliminated group interference middleline(Occlusal the 8 was sacrificedafterweeks(Hematoxylin were Animals inthearticular ofthe for the changes cartilage used morphological observing reverse temporomandibularjoint(Real(time necrosis outtodetectthe oftumour ca仃ied expression interferon。丫 IFN。丫 ?? interleukin(1 IL(1 ，interleukin(6 IL一6 and of thecondition under blood werenormal analyses Results:Regular were changes inallthree degenerative interference occlusal groups(Classical showed data B(RT??PCR ointin Aand inthe group found j temporomandibular all n虾一伐in groups of and experimental increased IL一1，IL一6 expression above 1n and ofthe cytoklnes withcontrol higherexpression compared group waSnot difference Ain with B(However，the group group comparison 英文摘要 of not addition，theexpressionIFN-丫was statisticallysignificant p 0(05 (In in ofthethree found groups( any lcadtoclassical interference Conclusion:1(Theocclusal may the oint articular of inthe caailage j degenerativechanges inthearticular of IL(6wasincreased inrats(The IL(1，TNF(伐and expression ofthe a linkbetween cartilage temporomandibularjoint，indicating theseocclusalfactors andthe disorderand orthodontics temporomandibular inthe inthis result changes joint(2(In independently degenerative may beobservanttoavoidocclusion treatmentweshoud orthodontic ofthe inordertoalleviatetheburden removeit intime factorsand temporomandibularjoint( j s:Occlusion;thetemporomandibular Key cytokine 研究论文 咬合干扰对大鼠颞下颌关节软骨炎性因子表达的影响 (‘上(―J‘ 刖 吾 正畸治疗是通过矫正先天或后天获得性牙颌面畸形，从而达到改变 畸形容貌，改善咬合关系，改进咀嚼及语音功能。 正畸治疗过程中，牙 齿移动牙合关系的改变，不可避免会产生一些暂时性的咬合干扰。因此有 关正畸治疗是否对关节结构产生影响成为诸多学者的研究热点。多数研究 表明，正畸过程不会引起或加重颞下领关节病。但有学者发现:正畸治疗 Disorders 或治疗后都有可能发生颞下颌关节病 Temporomandibular TMD 。故正畸治疗中及治疗后出现的颞下颌关节病变成为正畸医师临床 工作中面对的一个棘手问题。本研究通过正畸牙齿移动方法建立大鼠的咬 合干扰模型，观察实验性咬合干扰条件下大鼠颞下颌关节组织学变化以 实验大鼠颞下颌关节的变化及其对颞下颌关节软骨炎性因子表达的影响。 材料与方法 1(材料 1(1实验动物的选择与分组 选用6周龄雌性SD大鼠24只 购于河北省实验动物中心合格证号: 常组 ，每组8只。 1(2实验材料 1(2(1正畸科临床用分牙皮圈 3M公司生产 ，聚甲基丙烯酸甲酯 室 温固化型 。 1(2(2引物 1 引物由赛百胜生物工程公司合成，引物序列 见Table 1(2(3主要试剂 研究论文 PCR 2xTaq O(5mol,L EDTA 50xTAE:2429Tris碱，57(1ml冰乙酸，100ml pH8(O ，加去离子水至1000ml。 40ml，加热溶解待冷却后 1(5,琼脂糖凝胶，琼脂糖0(69，加1xTAE 加EB 2pl。 1(2(4主要仪器设备 电子天平 瑞士METTLER公司 超纯水制备设备 美国PALL公司 医用净化工作台 苏州市金燕净化设备有限公司 高速低温离心机 德国Heraeus公司 电子制冰机 上海斯科茨曼制冰有限公司 磁力搅拌器 GENWAY 自动核酸提取系统 富士 中国 投资有限公司 凝胶分析系统 美国UVP公司 超低温冰箱 日本三洋公司 数显恒温水浴箱 常州国华电器有限公司 DYY-III型电泳仪 北京六一仪器厂 9700型PCR仪 美国ABI公司 ND(1000分光光度计美国基因公司 F820血球分析仪 日本岛精公司出品 2(实验方法 2(1模型制备 A组 咬合紊乱组 :大鼠腹腔注射3,的戊巴比妥钠2ml，麻醉后， 将一正畸皮圈插入大鼠右侧上颌及左侧下颌的第一磨牙与第二磨牙之 间，以推第一磨牙向近中移动，每天检查一次皮圈是否脱落。1周后 双 侧第一磨牙达到最大平均前移距离约0(7mm 取出正畸皮圈。向间隙内填 入丙烯酸自凝树脂，修整自凝树脂的形态，确保树脂高度不超出牙合面以 及相邻牙齿，骀面无树脂黏着。 B组 去除咬合紊乱组 :咬合干扰动物模型制备同A组，在咬合 干扰动物模型制备6周后，大鼠腹部注射3,的戊巴比妥钠2ml麻醉，拔出 研究论文 双侧造成尖窝接触不吻合的第一磨牙，以去除咬合干扰因素。 C组 正常对照组 :不做任何处理，相同环境下饲养至实验结束。 2(2标本采集 2(2(1血液采集 所有大鼠于喂养8周后IIIii采血。 2(2(2标本收集 A、B、C三组大鼠于实验8周后断颈处死，取左侧颞下颌关节用10, 用于HE染色;取右侧颞下颌关节，液氮冻存，用于RT(PCR检测。 2(3(血液及组织检测 2(3(1血常规检测 F820血球分析仪检测所有大鼠IIIii部采集血液的血常规。 2(3(2苏木精(伊红染色 周，常规脱水，石蜡包埋。将关节沿矢状方向切片，切片厚约59in，苏木 精 (伊红染色，光镜观察。 2(3(3RT-PCR 2(3(3(1RNA提取 大鼠颞下颌关节组织在液氮中充分研磨，每30(50mg组织加入lml TRNzol。4?12000 TI?zol 加入 rpm离心lOmin，取上清。每使用lml 12000 0(2ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡12s，室温放置3rain。4"C rpm 离 12000 混匀，室温放置20(30min。4"C rpm离心10min，取上清。加入 12000 lml75,乙醇 DEPC处理过的水配制 洗涤沉淀。4"C rpm 离心 RNase(flee 5min。去上清，室温放置晾干，加入20ul ddH20，反复吹 打，混匀，充分溶解RNA。 2(3(3(2 RNA定量分析 ND(1000分光光度计测定DNA NanoDrop OD260,OD280。1,琼脂糖凝胶鉴定RNA完整性。 研究论文 2(3(3(3反转录 RT Reverse eDNA第一链的合成:按M(MLV 0mM OpM ，2pl 1 oligo dT 16 I 加入4ul5xFirst-StrandO(1MDTT、l Buffer、l!al gl gl TIANScriptM―MLV，瞬时离心1 进行PCR反应。 2(3(3(4 2xPCRMix PCR反应体系 1 09l RT产物 1“l 上游引物 IOpM 1“l 1 下游引物 109M ul 补水至 209l 反应条件为:94。C预变性5min;94?变性30S; IL一161?;IL(666?; IFN(Y GAPDH 70?;TNF(0【61?; 72? 退火30S;72?延伸30S; 35个循环 GAPDH28个循环 ;72?延伸7min。 2-3(3(5 1,琼脂糖电泳凝胶鉴定RNA的完整性，1(5,琼脂糖凝胶鉴定 前沿时，终止电泳。 取出凝胶放入凝胶成像系统，在紫外灯下观察扩增 结果并留图像，系统进行吸光度扫描。 2(4统计学处理 数据均采用Microsoft 采用单因素方差分析，p 0(05为有统计学差异。 结 果 1(大鼠咬合干扰模型形成 见fig(1 一周后实验组大鼠 A组B组 右上颌及左下颌第一磨牙达到最大 前移距离 0(7mm ，可见大鼠磨牙区咬合面尖窝不吻合，咬合关系不稳定。 大鼠咬合干扰模型形成。 研究论文 2(血液学结果 见Table2 三组大鼠血常规检测结果与正常值【1】相比无统计学意义。 3(组织病理结果 C组 对照组 大鼠髁突软骨由纤维层、增殖层、肥大层及钙化软骨 层组成，各层细胞排列整齐，界限清晰。 见Fig(2A A组和B组均出现典型的退行性变，其附近软骨分层模糊，细胞排 列紊乱，软骨增厚，病变区域软骨细胞发生凝固性坏死。软骨细胞数目 明显减少，胞核固缩，核染色质浓缩，局部出现嗜均质染色。 见 Fig(2B;Fig(2C 4(RT(PCR检测炎性因子的表达结果 RT(PCR检测炎症相关细胞因子的表达显 其浓度及完整性，见Fig(3A。 表达，三组之间比较虽无统计学差异 p O(05 但实验组的表达均高于对 照组，实验组AIL(6和TNF(0【的表达高于实验组B。在各组大鼠中均未 检测到IFN吖 Fig(6 的表达。 研究论文 ―――――――――――――――――――――――――――――――― ―――――――――――――――――一一- 附 图 一 一――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――一一一_ Fig(2A ? Fig(2B 研究论文 ―――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――一一。 Fig(2C The resultof Fig(2 SDrats histopathology of innormal A:Cartilagelayersclearly control sagittalcondylar group hvX200 reduced cellsandnuclear B:Significantly were cartilage pyknosis in showed groupB HF x200 C:fibrosisofthearticular wereshowed caailage in groupA HFx200 11 研究论文 l 2 3 -| Ml 2 3 4 AILNA B 28S 18S 5S 330bp The the SDrat Fig(3 RNA A and of GAPDH B mRNAexpression Lane control 2:control 1:positive Lane Lane B Lane A 3:experiment 4:experiment M l 2 3 4 AIL-1 1(2 B 田 2000bp 自 0(9 山 1000bp 0。6 750bp 500bp 445bp 0(3 《! ?。J目 250bp 0 100bp l 2 3 4 IL-1mRNA ofSDrats Cytokine Fig(4 expression Lane control Lane2:control 1:positive Lane B Lane A 3:experiment 4:experiment 研究论文 M l 2 3 4 IL一6 2000bp 1000bp 750bp 500bp 250bp 242bp lOObp 1(6 田 虽1(2 啪 g0(8 翌0(4 目 0 l 2 3 4 IL一6 mRNA ofSDrats Cytokine Fig(5 expression Lane control Lane2:control 1:positive Lane B Lane A 3:experiment 4:experiment 13 研究论文 M1 2 3 4 405bp 2 l5 1 05 田 I山稻v乏k口 0 2 3 4 mRNA ofSDrats IFN-Y Cytokine expression Fig(6 Lane control Lane2:control 1:positive Lane B Lane A 3:experiment 4:experiment 14 Cyto Fig(7 Lane Lane 研究论文 附 表 Table1 RT-PCR and forGAPDH primersequences cytokines amplifiedfragment primersequences GAPDH upstreampremier GAPDHdownstream premier IL一1 upstreampremier IL-1downstream premier IL一6 CAGAAATACAA upstreampremier IL一6downstream premier IFN―Yupstreampremier IFN-丫downstreampremier TNF一0【upstreampremier TNF一?downstream premier 16 研究论文 Table2 Theresultof bloodserum B"VSControl A，Experimental Experimental p 0(05 17 研究论文 讨 论 一(大鼠咬合干扰模型建立 有关异常咬合与颞下颌关节紊乱病的动物实验研究，文献报道虽然较 多，但多数为突发性咬合改变，如拔除一侧后牙造成单侧后牙缺失继而被 动性偏侧咀嚼、戴用一些修复体或矫治器装置造成咬合加高、前导下颌等 急性咬合变化【2 】。本实验所建立的咬合干扰动物模型参考了王美青课题 组设计的渐进性咬合紊乱模型的制备方法，其特点是在上下颌第一磨牙置 入橡皮圈推第一磨牙向近中移动以造成与对颌牙形成非尖窝吻合的咬合 接触关系。由于橡皮圈的弹性特点使被移动牙齿受到一种持续渐进的加力 过程，实验结果证实:该方法与正畸临床上因牙齿移动尖窝关系的改变而 导致的暂时性的咬合干扰相一致，且方法简便，易操作，造模精确。为本 研究探讨正畸治疗与颞下颌关节紊乱病之间的关系提供良好的动物实验 模型。 二(实验大鼠血常规的变化 三组大鼠血常规检测结果与正常值相比无统计学意义。本实验观察到 颞下颌关节退行性病变，没有发现炎细胞浸润、水肿、充血等炎症反应现 象。反映炎症变化的重要的指标白细胞数目未见异常，与组织学的观察结 果一致。学者研究证实:炎症的基本病理变化包括局部组织的变质 此病理变化按照一定的先后顺序发生， 一般早期以变质和渗出变化为 主。后期以增生为主，但三者是相互密切联系的。炎症轻时，炎灶局部实 质细胞可发生细胞肿胀、脂肪变性;严重时，间质和实质可发生不同类型 的坏死，炎症过程中的变质性改变使炎区的酸中毒和渗透压升高，并因此 为局部血液循环障碍和炎性渗出等提供了重要的条件。最初组织受到致炎 因子刺激时形成炎性充血。随着炎症的继续发展发生血流停滞。白细胞通 过血管壁游出到血管外。血管反应是急性炎症的主要变化。炎细胞浸润是 炎症反应的重要形态学特征。本实验观察到的血常规结果中包括白细胞在 内的炎性细胞的数目未见异常，提示大鼠颞下颌关节软骨区的病理反应， 可能是局部炎性发展的初期阶段，由于本实验过程中所观察的时间点少， 研究论文 样本数量有限，有关大鼠颞下颌关节退行性病变是否伴有全身包括血液学 的改变仍需进一步的研究证明。 三(实验大鼠颞下颌关节软骨的组织学改变 jointTMJ 的退行性病变，是颞下 颞下颌关节 temporomandibular 颌关节紊乱症原称颞颌关节紊乱综合征主要的病理学改变之一【9】。一般认 01。 为退行性关节病是因组织所受的机械压力超出了其最大耐受能力所致【l TMJ为负重关节，其病理表现与其它滑液关节相似【ll】。王美青【12】等通过建 立大鼠渐进性咬合紊乱模型，分别于6(7(8周分别取材采用HE染色的方 法观察不同月龄组大鼠颞下颌关节矢状面和冠状面的组织学的变化，实 验结果显示:髁突肥大层变化最明显，且随着月龄增加，髁突软骨厚度逐 渐变薄，纤维成分逐渐增多，软骨细胞成分有所减少，骨小梁略变粗 大。最终导致软骨增殖层和肥大软骨层变薄，以纤维成分代替退行性变 的软骨组织。本实验实验组大鼠关节HE染色结果可见软骨分层模糊，细 胞排列紊乱，软骨增厚，病变区域软骨细胞发生凝固性坏死。软骨细胞 数目明显减少，胞核固缩，出现典型的退行性病变。与上述研究结果一 致。实验中观察到髁突的退行性改变，而未见炎症性表现，与以猴为实验 动物的同类实验结果一致[13-15】。实验中原有的尖窝相对稳定、广泛而紧密 的咬合关系被逐渐破坏，双侧后牙嚼细及研磨食物的功能均受到影响， 使得实验动物无法有效地进行咀嚼。为咀嚼食物，实验动物需作更多的咬 合运动，这种额外的咬合运动可能与正常咬合的运动方式不同【l61，进而导 致有关组织由增殖 代偿 到退变 失代偿 的逐渐变化，提示其病变机制与 局部生物力学变化有关。 四(实验大鼠颞下颌关节软骨中炎性因子的表达 刘文华等研究发现f17】应力作用于TMJ后，TNF(仅作为破骨细胞活化 因子可直接导致软骨细胞凋亡并伴有关节软骨退变。Spears等【18】和 Wajantt四】等将抗胸腺细胞血清和弗氏完全佐剂注入成年雄性兔双侧颞下 颌关节，采用基因微点阵分析、蛋白质斑迹法和酶联免疫吸附测定法等 方法检测TNF(0【，结果显示n盯一0【浓度较对照组增加。王美青掣20】 通过 建立大鼠渐进性咬合紊乱导致颞下颌关节退行性变的动物模型，采用HE 苏木精(伊红染色及免疫组化染色的方法观察咬合改变情况下TNF(Ot在髁 突软骨中表达的变化及规律。提示TNF(a参与了渐进性咬合紊乱所致的 研究论文 髁突软骨病理性改建活动。本研究采用RT(PCR方法通过对咬合干扰条 件下大鼠颞下颌关节中炎性因子TNF(c【的检测发现实验组的表达高于对 照组。与上述实验研究结果一致。 道尔顿的蛋白质。Wood等1983首次发现关节炎滑液中存在着高水平的 IL(1。在骨关节病的软骨组织中，中、上层软骨细胞及基质IL(1均呈强 阳性。因此，IL(1在骨关节病发病中的作用引起了学者的广泛重视。研 究【21】表明IL(1作为骨关节病的一种重要致病因子可诱导软骨基质的丢 失，抑制软骨细胞II型胶原的表达。焦岩涛等【22】利用体外培养兔髁状 突 软骨细胞，观察了IL(1对生长、增殖动力学的影响，得出IL(1抑制髁状 突软骨细胞的增殖，诱导细胞凋亡的发生，IL(1在骨关节病发病中发挥 24 浓度为1 IL(1p ng,mL 发现IL(1伐和IL(1p可诱导骨关节病患者关节滑液和组织的成纤维细胞均 合成MMP导致软骨基质蛋白质的破坏。 13缺氧 Yamaguchit28】等发现IL(1 通过提高某些MMP基因的表达，可以导致TMJ关节盘细胞外基质 extracellular MMP基因表达而提高MMP的合成从而导致关节软骨基质的破坏等来引 发颞下颌关节紊乱病的发生。在本试验中，实验A组和B组大鼠的关节 软骨中炎性因子IL(1的表达较正常组增强，进一步验证IL(1直接参与破 坏关节软骨导致TMD的病理过程。 的蛋白。IL(6在机体的免疫调节，炎症反应，造血调控等过程中均发挥 重要的作用。是多功能炎性细胞因子，是炎性介质网络的关键成份，在 炎症反应中起重要作用。作为抗炎症细胞因子或远期细胞因子可平衡前 炎症细胞因子或早期细胞因子的损伤效应，起到一定的保护作用。它的 作用与组织中的含量有关，正常水平对机体有利，产生过多会引起一系 研究论文 发现TMJ患者关节液中IL一6的水平明显高于正常对照组。研究表明骨关 且髁突发生退行性变的实验组IL(6浓度高于未发生退行性变组。IL(6可 能导致蛋白酶的释放破坏关节软骨，导致骨发生吸收【301。胡开进【31】 等用 自制撞击装置造成山羊双侧颞颌关节间接性创伤，分别于伤后2d，7d，lOd 和30d取材，并以正常TMJ作为对照，用免疫组化法进行观察。发现TMJ 创伤后髁突软骨中IL(6的表达明显强于正常对照组，其着色程度越靠近结 中起重要作用。本研究发现实验组大鼠关节软骨中IL(6的水平明显高于 对照组。与上述研究结果一致。提示IL(6参与了破坏颞下颌关节组织的 病理过程。 本研究同时观察了咬合干扰消除后炎性因子的表达情况，发现 有所降低，提示炎性因子其参与关节髁突软骨分解代谢的作用在咬合干 扰消除后有所减弱。 Takahashi 率29, ，而梁小龙等【29】研究结果却没有检测到IFN吖的表达，本研究 与 梁小龙等研究结果一致。干扰素是一类具有广泛生物学活性的蛋白质，具 有调节机体免疫功能、抗病毒、抗肿瘤等多种作用。IFN吖又称免疫干扰 素，主要由T细胞产生，是巨噬细胞活化因子，能够促进巨噬细胞吞噬 能力和炎症反应，主要活性是参与免疫调节，是体内重要的免疫调节因 子。考虑到本实验未检测到IFN(丫表达的原因可能与样本含量少或观察时 间短等因素有关，目前有关IFN(丫在大鼠关节软骨中是否存在尚未定论， 仍有待于进一步研究证实。 型大鼠肝脏中均有表达。 研究论文 结 论 1咬合干扰条件可造成大鼠颞下颌关节出现典型的退行性变，且炎性 因子IL(1，TNF(0【及IL(6在颞下颌关节软骨中的表达明显增强，提示 炎性 细胞因子与实验大鼠髁突软骨病理性改建活动有相关性。 2正畸临床治疗过程中应注意避免和及时消除咬合干扰因素，以减 轻颞下颌关节的负担。 参考文献 1 詹纯列，肖育华，李建军性别、年龄、微生物因素对Wistar大鼠血常规 值的影响中国比较医学杂志2004，1413】 2 Teramoto a1(Eddectof forcesonextracellular S，et M，Kaneko compressive matrixinmandibular Miner 1" Metab，2003(2 condylarcartilage【J】(Bone 276(286 3 RobieAB(She U(Functional acceleratesand TT(Hagg appliancetherapy enhances J OrthodDentofacial growth[J](Am Orthop(2003， condylar 123 1 :40―48 4 Rabie U(Forwardmandibular enhances H，hagg positioning AB，Xiong inadult JOnhod(2004，26:353―358 rats[J](Eur condylaradaptation 5 Rashed and MZ，Sharawy MM(Histopathological the studiesoftheeffectofraisedocclusalverticaldimensionon condylar ofthe 1―296 993，11:29 cartilagerabbit[J](cranio，1 6 PG intherat F'Scoa Mao，JJ，RahemtullaProteoglycanexpression to bite in unilateral Dent joint raise[J](J temporomandibularresponse Res(1998，77:1520-1528 7 induced D，SammanN，eta1(Experitimentally HuangQ，OpsteLten ofthe unilateraltoothLoss:histochemicalstudies 13 Dent l:209―2 joim[J】(JRes，2002，8 8 Johnson ofthe DL，Brand SK，et JW，Young a1(Adaptation 研究论文 toalteredmandibular J temporomandibularjoin Prosthodont，1995，8:445―455 9谷志远，张震康孙开华，等(颞下颌关节紊乱综合征患者髁状突与关节盘 的电镜和光镜研究(中华口腔医学杂志(1991，26:18 10GardnerDL(Thenatureandcauseofosteoarthrosis(BrMed 8 J，1983，286:41 11 Bont asthe B，de G(Osteoarthrosiscauseof Stegenga LGM，Boering craniomandibularand Oral pain dysfunction:Anunifyingconcept(J illofac 989，47:249 Surg，1 12陈金武，王美青，刘晓东(渐进性咬合紊乱导致兔髁突退行性变的研 究[J](中华口腔医学杂志，2003，38 2 :103(105 13元方，王美青，颜朝石，等(渐进性咬合紊乱导致猴颞下颌关节骨关节 病的实验研究初探(实用口腔医学杂志(2000(16:27(30 14王美青，元方，段小红，等(渐进性咬合紊乱对猴关节盘超微结构影响 的实验研究初探(口腔医学纵横，2002(18:135 15王美青，元方，颜朝云，等(渐进性咬合紊乱对猴颞下颌关节影响的扫 描电镜观察(实用口腔医学杂志(2001(18:6-9 16王美青，王惠芸(颅颌功能紊乱者咀嚼运动轨迹的研究(华西口腔医学 杂 1:245 志，1993，1 17刘文华，刘亚，邱玉余，等(压应力下兔软骨细胞的凋亡和IL(1( LIU of a1(Effects Wen??hua，LIUYa，QIUin，et Yu-j chondrocyte and under J IL-1，TNF-a apoptosis compressive Rehabilitation Medicine，2006，2 1 9 :800080 18 a1(Adeterminationof R，OakesR，MnoreC，et Spears factor inTMJinflammationwiththeuse expression ofmicroarray 13 Res，2003，82 1 analysis[J】Dent 0 :807―8 19 ant P(TheTNF??tumornecrosisfactor H，Henkler Waj F，Scheurich moleculesfor kinasesandtheir cytokine family:Scaffold receptors 89―400 Signal，2001，13 2 :3 regulators[J](Cell 20刘蕾，王美青，渐进性咬合紊乱对大鼠髁突软骨肿瘤坏死因子表达的 23 研究论文 影响华西13腔医学杂志，2008，26 4 21傅开元，马绪臣，张震康(关节腔注射人重组白细胞介素(1对家兔颞 下颌关节的影响_匕京医科大学学报，1995，27 4 :249 22焦岩涛马绪臣于世凤张震康IL(1诱导髁状突软骨细胞凋亡的实 验研究现代口腔医学杂志2000，14 03 23Kubota T(et E(ImamuraH(Kubota a1(Interleulkin一1and p of fluidas markersof Stromelysin MMP3 activitypossible synovial osteoarthritisinthe Oralillofac997( temporomandbularjoint(J Surg(1 55:20(27 24 P,GassnerR，et tensilestrain AganvalS,Long a1(Cyclic suppresses cataboliceffectsofinterleukin一1betain fromthe fibrochondrocytes temporomandibularjoint(ArthritisRheum(2001，44 3 :608―617 25Fuchs a1(Differentialinductionand of S,SkwaraA，BlochM，et regulation matrix inosteoarthritictissueandfuid metalloproteinases synovial fibroblasts(Osteoarthritis 18 Cartilage(2004，12 5 :409-4 26Yoshida ofmatrix K，TakausukaS，HatadaE，et a1(Expression inthe fluidsof with metalloproteinasesynovial patientssymptomatic disorder(Oral Med Oral OralPatholOralRadiol temporomandibularSurg Eendod(2006，1 02 1 :22―27 27 ima E(Roleofinterleukin一1inductionof M，Kubota matrix Ij Y,Kobayashi metalloproternasessynthesizedbyrat temporomandibularjoint anddisccells(EurJOralSci(200 chondrocytes 1，1 09 1 :50-59 of and 28 I,YoshidaH，etal，Role interleukin-1 YamguchiA，Tojyo hypoxia betain ofmatrix in geneexpressions metalloproteinases disccells(ArchOral temporomandibularjointBi01(2005，50 1 :81―87 关系现代口腔医学杂志2004，18 6 30 K N，NishimuraM，et of Kaneyamasegami a1(Importance in fluidfron121 ointswith cytokinessynovial j disorders(BrJOralillofac 18―423 Surg(2002，40 5 :4 3l胡开进，周树夏，戴毅敏(间接性TMJ创伤后髁突软骨中IL(6的表达 24 及其意义，第四 32TakahashiT( dete cytokines temporomandbul Fndod(1998(85:1 综 述 综述 正畸治疗与颞下颌关节紊乱病的研究 口腔正畸学是口腔医学的一个分支学科，其内容是研究错颌畸形的 病因机制、诊断分析及其预防和治疗。近代错颌畸形的概念已不只是牙 错位和排列不齐，而是指由牙颌、颅面间的关系不协调引起的畸形。正 畸治疗具有矫正先天或后天获得性牙颌面畸形，达到改变畸形容貌，改 善咬合关系，改进咀嚼及语音功能的优点。随着口腔正畸技术的日趋成 熟，选择正畸治疗的患者也越来越多。然而当正畸治疗结束后，有个别 TMJ 疼痛不适的症状Il珥】。 正 ioint 患者出现了关节 temporomandibular Disorders 畸治疗是否引起颞下关节紊乱病 TemporomandibularTMD ，目 前尚未定论。近年来，正畸医生已开始关注颞下颌关节问题。 颞下颌关节紊乱病是口腔临床常见病之一。一般认为颞下颌关节紊 乱病是由多因素导致的咀嚼肌功能紊乱、颞下颌关节异常和退行性改 变。正畸治疗与颞下颌关节紊乱病之间的关系一直是正畸医生研究和关 注的焦点。本文就两者之间关系的研究综述如下。 一正畸治疗与颞下颌关节紊乱病的相关性 1正畸治疗与颞下颌关节紊乱病的发生无关 正畸治疗是否会引起TMD的病理改变，目前已有大量文献报道。绝 大多数研究表明，正畸治疗与TMD的发生无关。Beattie等【5】回顾性地 研 究了63名安氏II类患者，按拔牙与否分为2组，其中拔除前磨牙组33 名，非拔牙组30名。对2组患者的头颈部肌群及颞下颌关节的功能状态 做了长效的比较，研究发现:2组患者无明显差异，提示拔牙与否对于颞 青少年时期接受过固定正畸治疗患者颞下颌关节的功能和咬合进行评 估，并以错雅未治疗组75例作为对照组，发现治疗组TMD的症状和体 患者未接受正畸治疗。调查包括量表和咀嚼系统功能检查，结果显示， 接受和未接受正畸治疗的患者间TMD的发生率并无明显差异。绝大多数 综 述 接受了正畸治疗的19岁患者拥有功能良好的咀嚼系统，发生严重TMD 者很少，且女性发病率高于男性，提示正常的正畸治疗和TMD的发生无 关。 2正畸治疗与颞下颌关节紊乱病的发病有关 另一些学者通过研究发现，正畸治疗与TMD存在微弱的因果关系， 正畸治疗中可能与颞下颌关节紊乱病有关的因素主要源自牙合干扰或正畸 治疗结束时新建的咬合，这会不可避免地产生一些暂时性的早接触点， 这类异常早接触的长期存在就可能导致TMD;且当拔除前磨牙内收切牙 时，常使髁突后移，而髁突相对地后退会造成对关节盘后区的压迫，当 超过其负载能力时，造成疼痛或弹响。刘怡等【8】等认为正畸治疗中所应 用的颌间牵引在引起下颌调位的同时，也会改变正常的盘一突关系，引 起关节结构的改变，更有可能造成临床上颞下颌关节的不适。此外在正 畸整平的过程中或多或少都将增加合平面的角度，髁突与关节盘的关系 因此发生改变，故可能会出现关节症状。陈玉梅等选择各类错合患者100 例，采用方丝弓技术矫正，通过比较治疗前后下颌关节正侧位片、全口 曲面断层片、X线头颅侧位片，观察颞下颌关节在治疗前后的组织结构 的变化，探讨正畸治疗与颞下颌关节紊舌L TMD 之间的相关因素，实验 结果表明:在正畸治疗中，牙齿移动牙合关系的改变的确对关节结构有明显 的影响。只是有些影响未带来临床不适而被忽略。王生等设计正畸组、 错胎组和正常组的调查表，建立相应的数据库，对173例已正畸治疗者、 95例有错骀畸形但未治疗者和32例正常对照进行TMD症状、体征及相 关情况的问卷调查和专科检查，结果显示:正畸组和错牙合组在主诉症状指 数、临床症状指数和咬合指数的分布上存在显著差异0 O(001 ;正畸组 和正常组在主诉症状指数和临床症状指数的分布上有显著差异 p O(001 ， 但在咬合指数的分布上无显著性差异? 0(05 。研究结论:正畸治疗后患 者在一定时期内易出现颞下颌关节紊乱病的症状和体征。Mohlin等【9】追 踪 因相关的流行病学调查研究概念和实验设计要求，探讨正畸治疗、遗传 因素与TMD危险因素之间的关系。该研究采用186名女性的前瞻性队列 研究，结果显示，有正畸治疗史的患者发生TMD的危险性高于无正畸治 综 述 疗史的患者，且两者差异有统计学意义。为了了解正畸治疗对患者颞下 例，结合其治疗前后颞下颌关节的临床情况进行分析，所得出的临床报告 显示正畸治疗后患者在一定时期内更易出现颞下颌关节紊乱的症状和体 征。 以往的研究通过对颞下颌关节在正畸治疗前后的X线片上组织形态 学变化的分析比较，颞下颌关节功能的临床检查以及问卷调查的方法， 探讨正畸治疗与颞下颌关节紊乱病之间的关系，绝大多数研究表明了正 畸治疗与TMD的发生无关。然而另有一些学者通过研究发现正畸治疗与 TMD存在一定的因果关系。许多专家根据临床经验也对此推测出了一些 假说，然而这些研究结果只代表统计学上有意义，并未给出确切的验 证，因此远远不能确定正畸治疗在TMD病因学方面的作用，两者之间的 关系有待于进一步的深入研究。 二正畸引起的颞下颌关节紊乱病病因的研究 由于TMD是一种多因素疾病，关于颞下颌关节紊乱病的发病机制迄 今未完全明了，近年来对于正畸引起的颞下颌关节紊乱病病因机制的研 究集中在神经免疫学尤其是各种促炎细胞因子的解释。目前，TMD的免 疫分子机制研究已成为国内外研究的热点。关节负荷过重、各种原因造 成的关节内的微小创伤或温度变化等各种伤害性刺激均可引发关节组织 内感觉神经元合成和释放多种炎性神经肽，从而刺激周围组织的多种细 necrosis 胞合成释放白介素(1 interleukinl，IL(1 ，肿瘤坏死因子 tumor 种功能。是重要的炎性介质，包括白细胞介素，肿瘤坏死因子等。IL家 节液中的存在及其参与关节组织的破坏已被多数学者认可【lmllJ。IL-6是由 多种细胞，包括T细胞，巨噬细胞和单核细胞等合成的多因子细胞因 子，参与有感染或创伤引发的炎症和免疫反应。骨关节病 突发生退行性变的实验组IL(6浓度高于未发生退行性变组。IL一6可能导致 综 述 蛋白酶的释放破坏关节软骨(导致骨发生吸收【l21。梁小龙等通过依据临床 检查和TMJ矢状位、中层X线断层片、关节上腔造影及MRI辅助检查结 果，根据马绪臣一张震康分类 1997 ，将患者分为?关节炎症性疾 检测发现患者的关节液中IL(6水平明显高于对照组。IshimiY等人【13】也持 有相同的观点:成骨细胞能分泌IL(6，而IL(6能诱导骨吸收参与关节的破 坏、改建等病理过程。Sato等【14】认为IL(8可能在关节内紊乱的病因机制中 起次要作用。但是对于IL(8与TMD关系还未有明确认识。而IL(1除了直接 参与破坏关节软骨等导致TMD的病理过程外，还通过诱导其他白介素的 生成间接参与关节的破坏机制，在细胞因子作用下引起TMJ疼痛，诱导 TMJ滑膜炎症反应，参与关节软件的吸收破坏增生，及TMD关节内自身 免疫反应。CK不是单独发挥作用，多种CK之间协同或拮抗作用，它们 之间形成免疫网络，维持机体正常生理状态及机能。外伤，牙合因素及不 良心理因素等原因可打破其平衡，使产生炎症的CK增多而引起系列的颞 下颌关节组织的病理变化，并使病程进展迁延。胡开进等【l5】通过用自制 撞击装置造成山羊双侧颞下颌关节间接性创伤。分别在伤后2h，7d，1,3个 月取材，并以正常TMJ做为对照，用免疫组化法进行羊颞下颌关节间接 伤后导致TMJ骨关节病过程中的作用。研究结果表明IL(8在州J创伤后导 致颞下颌关节病过程中发挥着重要的作用。 由于TMD的发病机制复杂，目前对于CK在TMD发病机制中所起 的作用还未真正清楚。随着分子生物学及细胞因子研究的不断深人，当 前的研究重点集中在细胞因子和细胞因子受体之间的平衡网络上，该平 衡网络的失调是导致TMD的重要因素。但是各个细胞因子及其受体以及 细胞因子拮抗物之间在TMD患者病理学的协同作用还不清楚。期待通过 许多种方法如免疫组织学分子生物学等研究从循证医学的角度进一步阐 明。对以上问题的深入研究将有助于进一步明确TMD的机制，开发对各 个因子针对性的治疗方法。这些研究将会为今后对TMD的预防，诊断， 治疗以及预后提供有用的参考价值，从而可以更好的指导正畸临床的诊断 与治疗。 综 述 参考文献 2 王春玲，赵艳红，郭杰，等(中华口腔医学杂志(2007，42 8 :471(474 3 Slade a1(SeminOnhod GD，DiatchenkoL，OhrbechR，et 2008， 14 2 :146―156 4王生，肖进，王光越等上海口腔医学(2007，16 3 :239(242 5 Beattie LEJr(AmJOrthodDentofacial DE，Johnston JR，PaqueRe Orthop( 1994，1 05 5 :444-449 6 Termstatusof C，BeGole tempommandibularjoint Sadowsky EA(Long functionandfunctionalocclusionafterorthodontic J treatment[J](Am 0rthod，1980，78:201??212 7 DentJ(1 I，CarlssonGE，Swed 998，22 5, LagerstromL，Egermark 6 :177-186 8刘怡，傅民魁(口腔正畸学(2005，13 2 :86(88 B Ret 9 MohlinO，DerweduwenK pilleya1(Angle 319(327 10KubotaE(ImamuraH(KubotaT(eta1(Interleukin_113 and of fluidas markerersof stromelysin MMP3 activitysynovial possible osteoarthritisinthe Oralillofac temporomandbularjoint(J 997(55:20-27 Surg(1 1l谷志远，孙永良，郭琦，等(月中瘤坏死因子在颞下颌关节紊乱综合征 中 的作用(中华口腔医学杂志(1993(28:203(205 12 of K，SegamiN，NishiumraM，eta1(Importance Kaneyama insvnovialfluidfrom121 witht proildlammatoo―cytokines joints J Oral disorders(Brillofac emporomandibular Surg，2002， 40 5 :418-423 13Ishimi a1(IL一6is osteoblastsand Y C，JinCH，et Miyaura producedby 30 综 述 inducesbone Immun01(1 45:3297-3303 resorption(J 990，1 14Sato of N，NishimuraM，et interleukin8in J，Segami a1(Expression tissuesin withintenml the synovial patients derangementof andits Mtb clinical temporomandibularjointrelationship OralMedOralPatholOralRadial Sm’g Endod(2007，103 4 :467― 474 15胡开进，周树夏，李新军，孔亮，彭莲(间接性颞下颌关节损伤后白介 素一8的表达及意义(中国临床康复(2003，7 8 :1262(1263 3l 致 谢 致 谢 光阴荏苒，硕士研究生的学习即将结束，三年的学习生活使我收益匪 浅，经历大半年时间的磨砺，硕士终于完稿，回首大半年来收集， 整理，思索，停滞，修改直至最终完成的过程，我得到了许多的支持和帮 助，现在要向他们表达最诚挚的谢意! 首先，我要深深感谢我的导师吴永生老师，吴老师为人谦和，平易近 人，在论文的选题，收集资料和写作阶段，吴老师都倾注了极大的关怀和 鼓励，在论文的写作过程中，吴老师在繁忙的工作之中不忘关心论文完成 情况，在论文初完稿之后，吴老师在百忙之中抽出时间对我的论文认真批 改，字字句句把关，提出许多中肯的意见，使我在研究和写作过程中不致 迷失方向，他严谨的治学之风和对事业的孜孜追求将影响和鼓励我的一 生，他对我的关心和教诲我更将永远铭记，借此机会，我谨向吴老师致以 深深地谢意! 其次感谢我的同事，石家庄医学高等专科学校冀联校区口腔教研室的 老师们，感谢他们在我论文的完成过程中给予的大力支持和帮助!还要感 谢我的家人，感谢他们给我极大的鼓励与朴素的帮助! 最后我要感谢参与论文评审和答辩的各位老师，他们给了我一个审视 几年来学习成果的机会，他们对我的帮助对我来说是一笔宝贵的财富，我 将在今后的学习和工作当中加倍努力以期能够取得更好的成绩回报他们， 再次感谢他们，祝他们一生幸福!安康! 个人简历 个人简历 一、一般情况 姓名:闰英剑 性别:女 民族:汉族