【doc】 寒凝血瘀证动物模型的创建

【doc】 寒凝血瘀证动物模型的创建 寒凝血瘀证动物模型的创建 中国中医基础医学杂志 ChineseJournalofBasicMedicilieinTreditionalChine8eMedicine 2005年第11卷第8期 20o5.V01.11.No.8 【动物模型】 寒凝血瘀证动物模型的创建 成秀梅,杜惠兰,李丹 (河北医科大学中西医结合学院,河北石家庄050091) 摘要:目的:探索寒凝血瘀证动物模型的制作.方法:将大鼠置于0oC一1?冰水中 20min,每日1次,连续2周,造成寒凝血瘀模型.结果:模型组大鼠出现寒战,蜷缩少动,爪尾部紫 暗等症状;耳部微循环,血液流变学异常;血浆ET升高,NO降低,与正常组及对照组比较有显着性 差异,经温经汤治疗上述情况明显改善.结论:上述方法建立寒凝血瘀大鼠模型,符合中医证侯特 点,具有一定的理论和实践意义. 关键词:寒凝血瘀;动物模型 中图分类号:R2.031文献标识码:A文章编 号:1006.3250(2005)08.0604.02 EstablislunentofSyndromeModelofBloodStasisDuetoColdAccumulationinRats CHENGXiu—mei,DUHui—lan,LIDan (CollegeofIntegratedtraditionalandwesternmedicine, HebeiMedicineUnwe~ity,Shijiazhuang05009l,胁Bei.China) Abstract:Objective:ToexplorehowtoproducetheanimalmodelofbloodstasisduetOcold accumulation.Methods:Theratmodelofbloodstasisduetocoldaccumulationwasinducedbykeepinginwater at0—1? f0r20minitesperdayfortwoweeks.Theappearance,microcirculationofratsauricle,thechangesof bloodrheologyandthelevelofplasmaET一 1andNOwereobserved.Results:Comparedwithnormalandcntroul groups,modelratappearedchill,hunched,lazyandcyanosisintailandclaw,microcirculationofratsauricle andbloodtheologychanged.Comparedwithnormalandcontroulgroups.theplasumET—1wasincreased. Meanwhile,thelevelofNOwasdecreased.AfterthetreatmentofmodifiedWenjingdecoction.thesymptoms andsignswereimproved.Conclusion:Thisnewanimalmodelofbloodstasisd uetocoldaccumulationaccorded withthecharacteristicofsyndromoftraditionalchinesemedicine.whichwag valuablefortheoryandpractice. Keywords:bloodstasisduetocoldaccumulation;animalmodel 寒凝血瘀是由于寒邪侵袭机体而引起体内血行 不畅,血脉不通,血液瘀滞等中医病理变化.本实验 模拟寒凝血瘀证形成的病因,将大鼠置于冰水中造 成寒凝血瘀动物模型,简便实用,符合中医证候形成 的特点. 1材料与方法 1.1动物及分组 选用健康SD雌性大鼠48只,鼠龄3个月,体重 230g?20g,由河北医科大学实验动物中心提供,清 洁级动物.随机分为4组:A:正常组,B:对照组,C: 模型组,D:温经汤组,每组l2只. 1.2造模方法 A组正常饲养;B组将大鼠置于低温冰柜,在零 下15?的冷环境中,持续受冻4h,每日1次,连续2 周.C,D组大鼠置于0oC1?冰水中20min.每日1 次,连续2周.D组于造模的第1天开始,给予温经 汤14.66g/kg体重,相当于成人剂量的10倍,以蒸馏 水按10ml/kg配成混悬液灌胃给药,每日1次,连用 2周.A,B,C组给予同体积的蒸馏水灌胃. 1.3观察指标 ?症状现:观察造模前后及温经汤治疗前后 大鼠的症状表现.?微循环测定:用3%戊巴比妥 钠溶液,按0.1ml/lOOg体重的剂量腹腔注射麻醉,令 大鼠侧卧,将左耳廓置于耳托上,平面展开,观察耳 部微循环的情况.?血液流变学:心脏采血,用 0.1%肝素1:10抗凝,进行血液流变学检测.?血 浆内皮素(ET.1)和一氧化氮(NO)测定:ET.1采用放 射免疫法测定,试剂盒由北京解放军总医院放 免研究所提供;NO采用硝酸还原酶法,试剂盒由南 京建成生物研究所提供. 2实验结果 2.1症状表现 B组大鼠冷冻后,出现精神萎靡不振,蜷缩少 动,反应迟钝等症状.c组大鼠受冻后开始出现寒 战,继而表现蜷缩少动,反应迟钝,爪尾部紫暗,耳色 暗红,喜扎堆,呼吸微弱,被毛无光泽,饮水量少,小 便色清,大便湿烂等症状.D组大鼠仅表现有轻微 的畏寒喜暖,少动等症状. 2005年第11卷第8期 2o05.Vo1.11.No.8 中国中医基础医学杂志 ChineseJoumalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine605 2.2微循环变化 结果提示,对照组和模型组大鼠毛细血管清晰 度下降,管径减小,血流减慢,与正常组比较有显着 性差异.且从血流状态,血色及渗出等情况来看,都 说明两组大鼠的耳廓微循环发生障碍,经温经汤治 疗上述各异常情况得到明显改善(结果见表1). 表1各组大鼠耳廓微循环变化(i?s) 表2各组血液流变学指标变化比较(i?s,n=12) 注:与正常组比较:P<0.05,?P<0.Ol;与对照组比较:?P<0.05: 模型组与温经汤组比较:?P<O.05,??P<O.Ol 由表2可以看出,模型组,对照组大鼠的全血比 黏度,血浆比黏度,红细胞压积,红细胞聚集指数,红 细胞变形指数皆升高,与对照组比较有显着性差异; 模型组和对照组比较,全血比黏度,红细胞聚集指数 之间有统计学意义,其他无明显差异;经温经汤治疗 后模型组的上述异常情况得到明显改善,模型组与 温经汤组比较各指标有显着性差异. 2.4血浆内皮素和一氧化氮测定 表3各组血浆内皮素和一氧化氮含量比较(i?,n:12) 注:与正常组比较:’P<O.05,?P<O.Ol;与对照组比较:?P<O.05,??P<O.Ol;与模型组温经汤组比较:??P<O.O1 由表3可见,对照组,模型组的血浆ET含量升 高,NO降低,与正常组比较有显着性差异;对照组和 模型组比较,模型组血浆ET比对照组增高,NO降 低,差异显着;经温经汤治疗后模型组的上述异常情 况得到明显改善,模型组与温经汤组比较各指标有 显着性差异. 3讨论 寒凝血瘀证的形成或因冒雨涉水,感受寒邪,或 因过食生冷,血为寒凝,血行不畅.有关寒凝血瘀动 物模型的研究,江苏省中医药研究所吴垦莉等…曾 将家兔后肢被毛除去,用冰袋上下左右围置,冷冻 1.5h,成功建立了家兔的寒凝血瘀模型.浙江中医 学院的郑小伟将大鼠置于低温冰柜,在零下l5? 的冷环境中,持续受冻4h,建造了大鼠的寒凝血瘀 模型.我们曾对天津市种植水稻区226名经龄妇女 进行普查,下水田者发病率为62.1%,不下水田者 发病率为45.5%,经期下水田者发病率为68.8%, 非经期下水田者发病率为39.0%.邢桂芝等对 接触低温和冷水的200名女工进行了一次调查,结 果其月经病的发病率高达57.5%,而未从事此项工 作的女性月经病的发病率为27.5%.我们根据妇 科寒凝血瘀证形成的病因特点,实验建造动物模型, 并与以往的模型进行了比较. 实验中我们观察到,模型组大鼠在冰水中开始 出现寒战,多动,烦躁,继而表现蜷缩少动,反应迟 钝,爪尾部紫暗,耳色暗红,喜扎堆,呼吸微弱,朦胧 欲睡,被毛无光泽,饮水量少,小便色清,大便湿烂等 寒证的症状.说明开始时其生理功能代偿性增强, 继而引起血管内皮细胞损伤,血管通透性增高,血液 处于高凝状态.检测耳廓微循环障碍显示,血流速 度减慢,血液颜色变暗,血流状态异常等;血液流变 学提示,血浆比黏度,全血比黏度及红细胞聚集指数 等升高;血浆内皮素升高,一氧化氮含量降低,与正 常组有非常显着性差异.与对照组比较,全血比黏 度,红细胞聚集指数,血浆内皮素升高有显着性差 异,其他无差异.经温经汤治疗后上述症状和指标 异常得到不同程度的改善. 本实验从模拟病因,症状表现,实验指标及药物 反证4个方面结合建立寒凝血瘀大鼠模型,符合中 医对证候的认识特点,也与现代医学的观点相一致. 且造模方法简便,易于学习掌握,实用性强,重复性 好,为研究寒凝血瘀证的本质及药物治疗干预机制 提供了又一新的实用动物模型,尤其为妇科寒凝血 瘀证的实验研究提供了前提条件,奠定了基础. 参考文献: [1]吴垦莉,张姗姗.寒凝血瘀证动物模型的研制[j].中国中医基 础医学杂志,1996,2(2):49.51. [2]郑小伟.寒凝血瘀证动物模型的量化研究[J].浙江中医学院 ,1999,23(2):43.45. [3]杜惠兰,柴丽娜.月经病寒凝血瘀证的病理机制初探[J].中医 杂志,1993,34(7):428—430. [4]邢桂芝,郑引,刘欣.低温和冷水作业对女工月经的影响[J]. 中国自然医学杂志.2000.2(3):158—159 收稿日期:2005.01.07 作者简介:成秀梅(1964.),女,河北省邯郸市 人,医学博士,教授,从事中医药结合治疗糖尿病及 妇科疾病的研究. 流红一?晏薹姚 0,.;蓦肌燃姒少一 一? ; .卜地蹴一 一 039或有一?., 一一一袍有一一7一粒一丑057.??或有一.一,啦有一,化粒一模F粒变3?流一OF?缦一<?.一一姚无一,一盯缦一较,一,一一一一一一一一状一粕?3晰期径挞流一清清模管血血渗一一