养肝利胆颗粒对豚鼠胆囊胆固醇结石成石率和血浆胆囊收缩素含量的影响

养肝利胆颗粒对豚鼠胆囊胆固醇结石成石率和血浆胆囊收缩素含量的影响 word格式 养肝利胆颗粒对豚鼠胆囊胆固醇结石成 石率和血浆胆囊收缩素含量的影响 【摘要】 目的,探讨养肝利胆颗粒对豚鼠胆囊胆固醇结石成石率和血浆胆囊收缩素含量的影响。方法,80只豚鼠随机分为正常组、模型组、养肝利胆颗粒组和熊去氧胆酸,ursodeoxycholic acid, UDCA,组。除正常组外,采用高胆固醇致石食饵诱发法建立豚鼠胆结石动物模型,并于造模当天开始灌胃 治疗 ,养肝利胆颗粒组予养肝利胆颗粒1.81 g/(kg?d),UDCA组予UDCA 30.12 mg /(kg?d),模型组和正常对照组灌胃等容量的生理盐水,连续7周。疗程结束后观察各组豚鼠一般情况变化和胆囊成石率,并用放射免疫法检测血浆胆囊收缩素,cholecystokinin, CCK,的含量。结果,养肝利胆颗粒能明显改善胆结石豚鼠的一般情况及行为学体征,但不能恢复到正常水平。模型组豚鼠成石率,82.35,,明显高于正常对照组,5.26,,,P0.01),养肝利胆颗粒组和UDCA组豚鼠成石率分别为27.78%和38.89%,均明显低于模型组,P0.05,。模型组血浆CCK含量较正常对照组明显降低,P0.01,,养肝利胆颗粒组和UDCA组血浆CCK含量虽低于正常对照组,但均高于模型组,差异有统计学意义,P0.01,。养肝利胆颗粒组和UDCA组血浆CCK含量比较差异无统计学意义,P0.05,。结论,养肝 word格式论文 利胆颗粒能显著降低豚鼠胆结石的成石率, 其作用机制可能与养肝利胆颗粒能 提高豚鼠血浆CCK含量有关。 【关键词】 复方; 养肝; 利胆; 胆石症; 胆囊收缩素; 豚鼠 Objective: To explore the effects of Yanggan Lidan Granule (YGLDG), a compound traditional Chinese herbal medicine for nourishing liver and improving choleresis, on the rate of gallstone formation and content of plasma cholecystokinin in guinea pigs with induced cholesterol gallstones.Methods: Eighty guinea pigs were randomly divided into 4 groups, which were normal control group, untreated group, YGLDG treated group and ursodeoxycholic acid (UDCA) treated group (n=20). Except the normal control group, gallstones were induced by high cholesterol diet in the guinea pigs. YGLDG (1.81 g/kg daily) and UDCA (30.12 mg/kg daily) were given orally to guinea pigs in the corresponding group respectively for seven weeks; however, the guinea pigs of normal control group and untreated group were administered with normal saline. The physical signs of the guinea pigs and the rates of gallstone formation were examined, and the content of cholecystokinin (CCK) in the plasma was detected by radio immunoassay.Results: YGLDG could obviously improve the ethological signs of the guinea pigs. Gallstone formation word格式论文 rate of the untreated group (82.35%) was significantly increased as compared with that of the normal control group (5.26%) (P0.01), while the gallstone formation rates of the YGLDG treated group (27.28%) and UDCA treated group (38.89%) were lower than that of the untreated group (P0.05). The content of CCK in plasma of the untreated group was significantly lower than that of the normal control group (P0.01), while CCK content of the YGLDG treated group and UDCA treated group was lower than that of the normal control group, but both of them were significantly higher than that of the untreated group (P0.01). The difference of CCK levels between YGLDG treated group and UDCA treated group had no statistical significance (P0.05). Conclusion: YGLDG can significantly decrease the rate of gallstone formation in guinea pigs. It may be related to elevating the content of CCK in the plasma. Keywords: compounds (TCD); nourishing liver; choleresis; cholelithiasis; cholecystokinin; guinea pig 胆石病是一种世界范围内的多发性、难治性疾病。我国胆石病呈较快的上升 趋势,部分地区患病率达10%,1,,已接近世界发达国家胆石病10%,15%的 word格式论文 发病水平,2,。胆石病仍是我国良性胆道疾患中致死、致残的重要原因。前期研究工作表明,养肝利胆颗粒,Yanggan Lidan Granule, YGLDG,对胆石病具有一定的临床疗效,3, 4,。本实验以高胆固醇饮食诱发豚鼠胆结石,通过对胆结石豚鼠血浆胆囊收缩素,cholecystokinin, CCK,含量的研究,探讨养肝柔肝中药防治胆囊结石形成的作用机制。 1 材料与方法 1.1 实验动物 选用白色、红目豚鼠共80只,雌雄各半,清洁级,体质量,220?20,g,由上海中医药大学实验动物中心提供。实验动物合格证号,scxk (2002 0011)。 1.2 主要试剂、药物与仪器 1.2.1 实验试剂和药物 word格式论文 Fluo 3, AM荧光染料,美国Molecular Probes公司产品,养肝柔肝中药采用养肝利胆颗粒,何首乌、枸杞子、白芍、陈皮、甘草等,,8 g/包,每克含生药4.5 g,,由上海中医药大学龙华 医院 制剂室提供,熊去氧胆酸,ursodeoxycholic acid, UDCA,片,上海三维长江生化制药厂产品,批号为200304005,10 mg/片,CCK放射免疫试剂盒,由第二军医大学神经生物学教研室提供。 1.2.2 主要仪器 Mgna FTIR 750型红外光谱仪,美国Thermo Nicolet公司产品,LG 10低温高速离心机,北京医用离心机厂产品,Facscalibour流式细胞仪,美国Becton Dickinson公司产品。 1.3 动物分组、造模及药物处理 所有豚鼠饲养于上海中医药大学实验动物中心动物室,室温,23?3,?, word格式论文 适应性喂养1周,无怀孕及不良反应、饮食和饮水正常者,即可纳入实验。实验豚鼠随机分为正常对照组、模型组、UDCA治疗组和养肝利胆颗粒治疗组,每组各20只。采用高胆固醇致石食饵诱发法建立豚鼠胆囊胆固醇结石动物模型,5,,正常对照组喂正常饲料及青菜适量,模型组喂以致石饲料及少量青菜,各治疗组在喂以相当于模型组的致石饲料及青菜的同时给以药物灌胃。药物以成人用药剂量,60 kg体质量,养肝利胆颗粒18 g/d、UDCA 300 mg/d,按体型系数换算,6,,养肝利胆颗粒组给以养肝利胆颗粒1.81 g/(kg?d),UDCA组给以UDCA 30.12 mg 1次/d,连续7/(kg?d)灌胃,模型组和正常对照组豚鼠灌胃等容量的生理盐水, 周。 1.4 标本采集与处理 各组动物均于第7周末取材。以15,乌拉坦腹腔注射麻醉,活体下肉眼观察胆囊中成石情况,完整切除胆囊后,再仔细观察胆囊内成石情况,收集胆结石,从豚鼠心脏采血2 ml,注入预冷的、加有20 μl 1%肝素抗凝剂和1 000 U胰蛋白酶抑制剂的指行管,混匀,迅速置冰浴中,30 min内离心,取血浆置,20 ?冰箱待测。 1.5 胆石红外光谱定性 word格式论文 参照 文献 ,7,采用溴化钾压片法测定胆结石样品红外光谱。 1.6 放射免疫法检测血浆CCK的含量 随机抽取保存的豚鼠血浆,每组10份,测定血浆CCK含量。,1,采用顺序饱和加样程序,操作步骤参照试剂盒说明书,,2,标准曲线的绘制和样本含量的 计算 ,本法分离沉淀计数为结合,B,的每分钟循环数,cpm,。计算标准管与最大结合,B0,的比值,,B/B0,×100%,,以不同浓度的对数值为横坐标,B/B0的比为纵坐标,在半对数纸上找到所测样本抗原,神经肽,的含量,再换算成每亳升血浆神经肽的含量。 1.7 统计学方法 计量资料用x?s表示,组间比较采用方差分析。计数资料采用率或构成比表示,采用χ2检验方法。所有运算程序均在计算机上运用SPSS 11.0统计软件包进行。 word格式论文 2 结 果 2.1 豚鼠一般情况 正常对照组豚鼠表现为体质量 自然 增加,反应灵活,活动敏捷,被毛密集而有光泽,紧贴皮肤,鼻、唇湿润清洁,眼睛明亮,大便正常,在饲养过程中无死亡。模型组动物表现饮食减少,生长缓慢,被毛干枯、蓬松且易脱落,活动迟缓,反应迟钝,眼睛、鼻、唇、耳、尾部色淡少泽。UDCA组和养肝利胆颗粒组豚鼠行为学表现、体质量和营养状况等方面与模型组比较有明显改善,但不能恢复到正常对照组水平。模型组豚鼠在造模30 d后有3只动物死亡,经解剖胆囊发现有2只豚鼠胆囊发生结石。养肝利胆颗粒组和UDCA组各有2只动物死亡,这两组死亡豚鼠经解剖胆囊均未发现明显结石生成。由于上述3组共计7只豚鼠死时未达造模的时间要求,所以没有计入成石率的结果,也未作为标本采集的来源。 2.2 胆石红外光谱定性 word格式论文 肉眼见胆囊内有块状及絮状沉淀物,经红外光谱检测分析其为胆固醇结石。 2.3 豚鼠胆囊结石生成情况 正常对照组中1只动物无胆囊而没有计入成石率的统计,其余19只动物中有1只发生胆石,成石率为5.26,。模型组动物除3只死亡外,其余17只动物中有14只出现胆结石,成石率为82.35,,明显高于正常对照组,P,0.01,。养肝利胆颗粒组18只动物中有5只出现胆石,UDCA组18只动物中有7只出现胆石,养肝利胆颗粒组和UDCA组成石率分别为27.78%和38.89%,均明显低于模型组胆石生成率,P,0.05,。 2.4 各组实验豚鼠血浆CCK水平比较 模型组与正常对照组比较,其血浆CCK水平较正常对照组明显降低,P0.01,,养肝利胆颗粒组和UDCA组血浆CCK水平虽低于正常对照组,但却 word格式论文 均显著高于模型组,P0.01,,并且养肝利胆颗粒组和UDCA组两组血浆CCK水平比较差异无统计学意义,P0.05,。见表1。表1 各组豚鼠血浆CCK含量比较,略, 3 讨 论 随着人口的老龄化与饮食结构的改变,我国胆结石的患病种类发生了很大的变化,尤其是近20年来,胆囊结石约占胆石病发病的80,,8,,以胆固醇为主要成分的胆囊结石已成为我国胆结石的主要类型,1, 9,。因此,我们在本研究中选择了高胆固醇致石食饵诱发法建立豚鼠胆固醇结石的动物模型。 胆囊收缩素是一组广泛分布于中枢神经系统、周围神经系统及消化系统的多肽类物质。在体内既可以作为激素又可以作为神经递质发挥生理功能。促进胆囊收缩是CCK最早被发现也是最主要的生理作用,10,。临床与动物实验研究证实,CCK通过对胆囊运动功能的影响在胆结石的形成过程中发挥着重要作用,11, 12,。 朱培庭等,3,在 我院著名中医外科专家顾伯华教授和中西医结合专 word格式论文 家徐长生教授 治疗 胆石病经验的基础上,对274例慢性胆道感染、胆石症病人进行辨证分析发现,肝阴不足证型占66.66%,并且50岁以上年龄者高达72.37%。这与《素问?阴阳应象大论》“年四十而阴气自半也,起居衰矣”的理论及朱丹溪“阳常有余,阴常不足”之论相吻合。对肝阴不足证型胆石病患者予验方养肝利胆方药治疗显示了良好的效果,有效率达84.13%,3, 4,。养肝利胆颗粒剂由何首乌、枸杞子、白芍、陈皮、甘草等组成。方以何首乌、枸杞子、白芍滋养肝阴。其中何首乌补肝肾、益精血,枸杞子味甘平而润,性滋而补,能生精益气,白芍苦酸微寒,能养血敛阴,柔肝止痛,陈皮苦辛温,能理气健脾,且能防滋阴药过于滋腻之弊。纵览全方切合养肝柔肝的治疗大法,体现了“胆病从肝论治”之学术思想。然而,养肝利胆颗粒降低成石率的确切机制如何,是否影响CCK水平,目前尚缺乏实验研究证据。 本实验结果显示,模型组成石率明显高于正常对照组,而模型组动物血浆CCK水平却显著降低,提示CCK水平与胆囊成石率相关。血浆中CCK水平降低,胆囊收缩机能受损,胆囊内胆汁淤积,这可能是促使胆结石形成的重要原因。养肝利胆颗粒组和UDCA组CCK水平明显高于模型组,成石率低于模型组,这与药物直接升高CCK水平,从而刺激平滑肌,增强胆囊的收缩能力,促进胆囊的排空和胆汁的释放,最终达到防治胆结石形成有关。养肝利胆颗粒降低胆囊成石率的作用不亚于UDCA,同时具有明显改善胆结石动物行为学体征的作用。 word格式论文 【 参考 文献 】 1 Chen XG, Liu JQ, Peng MH, et al. 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