【doc】B组链球菌血清型分布和抗生素敏感性试验研究

【doc】B组链球菌血清型分布和抗生素敏感性试验研究 B组链球菌血清型分布和抗生素敏感性试验 研究 B组链球菌血清型分布和抗生素 敏感性试验研究 申阿东朱荫芝杨永张桂荣王咏红江载芳 【摘要】耳的获得在中国北京地区B组链球菌(GBS)血清学型分布特点和抗生素耐药菌谱情 况.方法76株GBS分别由待产产妇和正常妇女阴遭拭子分离培养并经协同凝集(COA)抗原检 测明确所获.采用Lancefiled方法对所获76株GBS进行血清学分型用标准的琼脂稀释法对 其中47株GBS进行抗生素最小抑菌浓度(MIC)测定.结果76株GBS菌可分为7个血清型,其 中II(33),HI(23),Ia(16)是主要血清型,100GBS对青霉豢类,头孢菌豢类和红霉素敏感.青 霉寨和氨苄青霉豢MIC均?0.06~g/ml,头孢唑啉,头孢呋新,头孢哌酮Mlc范围为0006~0.03 ttg/m1.淳,霉素M是0.OO3,O..3~g/mt,庆大霉素Ml,32~g/mt,丁胺卡那霉素MIC,?64 ~g/ml他们的耐药率分别是12.8和40.4H.结论该结果为在我国进一步研究优势荚膜多糖 菌苗进行免疫预防GBS感染及对指导临床医师合理选择抗生素治疗GBS感染提供了重要的理论依 据,实验室常规GBS敏感性结果,对GBS菌抹连续药物敏感性监测,了解耐药变迁情况也具有 重要I晦床意义. I关键词】链球菌,无乳;血清分型,抗生紊类'药物筛选 DistribtltionefSeretypesandAatimierobialPatternsofgroupBstreptococcusStrainsIsolatedinBei— jingsHENAdong,zHUYinzhitYANGYonghvngtetat.DepartmentofMicrobiologyand Immunology,8egP积iatricResearchInstitute,CapitalVni~ersityofMedicalSciences,8iin Children'sHospita1.Beijing100~45,C^in 【Abstract]ObjectiveToobtaininformationonthedistributionofserotypesandantimicrobial agentssusceptlbilitiestogroupBstreptococcus(GBS)strains.MettIedsBatter[81jsolatesofGBS wereobtainedfromvaginalandcervicaltractofpregnantandnonpregrmntwomeninBeljingTisn TanHospita1.Atota1of76GBSstrainswereidentifiedfinallybyCoagglutination.Serotypingwas determlntedbyStandardLancefieldmethod.Susceptibilitytotestagentswassessedbydetermin— ingthemlninuminhibitoryconcentrations(MICs)withagardilutionmethodthatwasestablishedby theNationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards(NccLS).ResultsSevenserotyPes wereidentifiedamong76GBSstrains;solates.TypeII(33),nI(23)andIa(16)werethePre— dominantlyserotypesinpregnantandnonpregnantwomen.MlCsofpenicillinGandanpicillinwere ?0.06~g/ml;MICsofeephazolni,cefuroxime.cefoperozonewere0.006, 0.03z/m1;MICsof erythromycinwas0.OO3,0.03t~g/ml~MICsofgentamycinwas1, 32ttg/ml,Mlcsofamikacinwas 4,?64vg,/mi,nearly12.8and40.4thestrainswereresistanttogentamycinandamikacin, spectively?ConclusionOnrstudyprovideusefu1epidemiologicdataforpreparationofGBStype specificvaccineswhicheflnpreventGBSinfectionsandantimierobialagentssusceptibilityp atternsin China.RoutinereportsOnGBSsusceptlbolitiesbyclinicallaboratoriesandcontlnuoussurve illance forchangesinthesusceptibilityisofconsiderableClinicalimportance. [KeywardslStreptococcusagalactiae;Serotyplng~AntibioticsDrug?creeniE B组链球菌(groupBstreptococcus,GBS)是妇 女生殖道泌尿道携带菌,并与围期产妇和新生儿感 染关系密切,是主要致病菌].为了解我国北京地 作者单位:首都医科大学附属北京儿童医院微生物免疫室(申阿 东,橱承弘.张挂荣,王咏红,江载芳);北京天坛医院妇产科(朱荫芝) ?233? ? 论着? 区GBS血清型分布特点及GBS菌对常用抗菌药物 的耐药菌谱,为进一步在国内制备优势荚膜多糖菌 苗ff/Jl=GBS感染,以及向临床医师提供最佳抗生索 选择依据,我们采用了标准血清学分型及标准琼脂 稀释法,对1991,1996年分离培养鉴定为GBS菌 株,进行了血清学分型及抗生素敏感性研究,现报告 如下. 材料和方法 一 ,菌株来源及鉴定 76株GBS菌分别由待产产妇和正常查体妇女 阴道拭子分离培养,并经协同凝集抗原检测明确所 获.GBS鉴定是根据在Todd—Hewitt血平皿中典型 菌落形态,溶血/革兰染色为阳性链球菌,CAMP,色 素和马尿酸水解试验阳性,最终采用协同凝集血清 学方法明确. 二,抗菌药物 标准品青霉豢,氨苄青霉素,苯唑青霉素,红霉 素,头孢唑啉,头孢呋新,头孢哌酮,庆大霉素和丁胺 卡那霉素均购自卫生部生物制品检定所. 三,血清学分型 采用标准Lancefield法对76株GBS菌进行分 型.新鲜分纯GBS菌落接种在Todd—Hewitt液体培 养基中,37?培养16h,离心细菌沉淀加1toolHC1 0.2ml,加酚红指示剂1滴,52?水浴2h,加1tool NaOH0.2ml中和,离心取上清即为所需GBS荚膜 多糖抗原. 四,抗生素MIC测定 采用标准琼脂稀释法对47株GBS进行最小抑 菌浓度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)测 定.先将上述各种抗生素(庆大霉素,丁胺卡那霉素 除外)配成原液并倍比稀释,待高压融化M—H冷却 到50?左右加5羊血后,以1t20比例混匀制备 成所需平皿,使各M—H平皿中最终抗生素浓度为 0.003~2vg/ml.庆大霉素和丁胺卡那霉素在M—H 各平皿最终浓度分别为0.125,64g/ml.待测GtLS 和质控金黄色葡萄球菌(ATCC25923)悬液浓度为 10.Ctu/ml,应用多头接种器接种到M—H平皿后,置 37U孵箱培养并观察结果,无菌生长最低抗生素浓 度为MIC,判断标准按NCCLS规定以vg/ml计算. 结果 如1所示,76株GBS可分为7个血清型(Ia, Ib,Ic,?,?,?,v,8个).其分布特点为:Ia16 (一12),Ib5一4),Ic8:6),?33(= 25),?23(:17),IV1=1),V6(一5), NT8(一6),其中?,?和Ia是主要血清型.NT 为不可分型(nontypable).如表2所示,47株GBS 菌100对青霉素类,头孢菌素类和红霉素抗生素 敏感.MIC范围:青霉素和氨苄青霉素为0.006, 0.06vg/ml;苯唑青霉素0.03,0.25vg/ml,红霉 素0.003,0.03vglml,而庆大霉素1,32vglml, 丁胺卡那霉素4,64~g/ml,它们的耐药率分别为 12.8和40.4%. 表176株GBS菌血清学分型结果(例数) 讨论 根据GBS苗细胞壁型特异荚膜多糖抗原性不 同进行分型,即血清学分型方法.目前在世界范围内 绝大多数学者认为血清学分型是GBS分型黄金标 衰247株B族链球菌MIC检测结果例数 准,是GBS流行病学研究的重要工具.鉴于不同国 家和地区由于地理位置,气候条件,种族差异及随年 代推移,GBS感染菌型谱可能存在明显差异,因此 不同国家和地区进行GBS血清型分布研究,能够为 在本国进一步研制优势荚膜多糖菌苗防止GBS感 染提供重要的理论依据.GBS血清型主要包括Ia, Ib,Ic.1,?,?,v,NT型.近年有学者报道?型存 在.国外研究表明,在婴螭儿及早发型GBS感染中I (Ia,Ib,Ic),?,?是主要致病血清型;与之相反,在 脑膜炎和晚发GBS感染中,9o是?l_2].美国对妊 娠妇女和非妊娠妇女生殖道GBS携带菌血清型分 布特点研究表明,l型(33)和?型(33)是主要 血清型3;来自美国另一研究及加拿大对妊娠妇女 生殖道GBS携带菌血清型研究也?型(15, 25)和?型(10,37)是主要血清型一;西班 牙研究表明,从健康孕妇分离出72株GBS菌中,Ia (27)Ib(27)?(27)是主要血清型].本研究 所分离76株GBs菌中,共分离出7个血清型,其中 ?(33%),?(23)和Ia(16)是主要血清型.另 外发现6株GBS为不可分型(NT),可能是国内感 染流行的一种新血清型,有待进一步研究该研究结 , 果提示,国内制备优势GBS菌时可能应包括?,?Ia型,并为在全国进一步开展GBS研究奠定基础. 选择性应用抗生素是清除临产及分娩时产妇生 殖道GBS携带菌及防止GBS感染发生的有效预防 方法.为了解北京地区GBS菌耐药菌谱,我们对常 用9种抗生素最小抑菌浓度进行测定,发现100 GBS菌株对青霉素类,头孢菌素类,红霉素抗生素 敏感.青霉素和氨苄青霉素MIC值均?0.06g/ ml,与国外研究结果是相似的美国休斯顿贝勒医 学院Green等:,和美国纽约Berkowitz等口3对156 株从妊娠妇女生殖道分离出GBS菌药敏监测结果 表明,100青霉素,氨苄青霉素对GBS菌敏感,青 霉素MIC~0.06oglml但有91GBS菌对庆大霉 素耐药,明显高于我们12.8%研究结果. 红霉素抗菌活性较强,MIC范围0.003,0.03 #g/ml,由于红霉素是抗生殖道多种病原菌(GBS, 衣原体,支原体)的广谱抗生素,存在毒性小,口服方 便,使用安全,仅有偶发胃肠道反应之优点,故在孕 V 妇GBS感染时,可做为治疗GBS感染的选择药物. 头孢唑啉,头孢呋新,头孢哌酮均具有较强抗菌活 性,三者间抗菌活性无明显不同.抗菌活性与青霉素 相似,故我们认为头孢菌素不做为GBS感染首选抗 生素,当青霉素过敏或耐药时可作为替代治疗药物. 综上所述,我们认为实验室常规准确报告GBS 敏感性结果对指导临床医师合理选择抗生素治疗具 有重要临床意义;青霉素抗菌活性强,毒性小,是首 选药物;当青霉素过敏或耐药时;选择红霉素,头孢 菌素抗菌药物替代治疗;加强抗生素对GBS菌株连 续药物敏感性监测,了解耐药变迁情况对临床具有 重要指导意义;对GBS菌血清型研究,在国内提出 北京地区GBS菌血清型分布特点,提供了重要的流 行病学资料,为更广泛深入开展GBS研究及国内研 制GBS菌苗提供了理论依据. 叁考文献 1BILLmbel3gHM?StephensDS—LicitraC?etalMolecularepidemi o]ogyotgroupBstreptococcaliniectloas:Useofrestrictionen— donue]easeanalysisofchromosomalDNAandDNArestriction fragmentlengthpolymorphiismsofrJbc~omalRNAgenges(Ri— bo*yping).JInfectDist1992,166:514579. 2BakerCJ.GroupBstreptococcalinfection.In:RemingtonTA, KleinJO.ets.Infectiordiseasethefetusandnewborninfant. dedsPhilade曲iaISau~derCot1990.742809. 3BalcercJ,GoroffDK,AlpeS,eta1..Vaginalcoloni~tioaswith groupBStreptococcus:astudyincollegeme?JInfectDis, 1977.1B5t392-3e7. 4MacdonaldSW,ManuelFR,EmboIJA,eta1.Locali~fioaof groupBbetahemolyticstreptococciinthefemaleurogeniatal tract.JOhstetGyaecol,1979,133t5759. 5HervasJA,GonzalezL,C-flJteta1.NeonatalgroupBstrepto- cocea]iafeetio~inMallor~Spain.ClinIrdectDiS,19g3,16:714 718 6GreenPA,ShnghKV,MurrayBE,eta1.RecurrentgroupB stTeptococca]lnfecd0lininfants:clinicalaadmicrobologieas— pects.JPediatrt1994,125{931938. 7BarkowitzK,ReganJA,GreenbergE.Antlbootieresistancepat- terB$ofgrooupBstreptococciinpregnantJClinicM crohio,1990,28I57. (收稿日期{2000-1Z-20) (本文编辑;徐福兰)