鲑降钙素喷鼻剂稳定性考察

鲑降钙素喷鼻剂稳定性考察 【摘要】 目的 考察鲑降钙素喷鼻剂的稳定性～为制定其 合理的有效期、储存条件提供依据。方法 采用高效液相色谱法～分 别测定在强光、高温、高湿条件下放臵5 d和10 d～在25 ?加速试 验的条件下放臵6个月～在(5〒3)?的条件下放臵3个月的鲑降钙素 喷鼻剂的含量、有关物质等的含量变化情况。结果 鲑降钙素喷鼻剂 在40 ?、25 ?和强光条件下～含量及有关物质均发生明显变化～ 在(5〒3)?及高湿度条件下则未发生明显变化～各储存条件下的pH 值及外观装量等均无明显变化。结论 鲑降钙素的有效期可暂定24个 月～其合适储存条件为低温(2，8 ?)、避光贮存。 【关键词】 鲑降钙素;喷鼻剂;稳定性;有关物质 Abstract:Objective To investigate the stability of salmon calcitonin nasal spray to establish the useful life and storage conditions.Method HPLC was used to determine the salmon calcium nasal’s content and related substances,which were placed five days and ten days under the conditions of high temperature、high humidity and strong light respectively,half a year under the condition of 25 ?,three months under the condition of (5〒3) ?. Result The contents of salmon calcium in nasal spray declined under the 40 ?,25 ?,strong light condition and related substances increased obviously. While there were no obvious changes in relevant substances under the conditions of (5〒3) ? and high humidity,and in the pH,appearances and capacities under all tested conditions.Conclusion The useful life of the salmon calcium nasal spray is tentatively set for two years and the storage should be at low temperature (2-8 ? ) and avoiding light. Key words:salmon calcitonin; nasal spray; stability; related substances 鲑降钙素是一种蛋白质多肽～主要用于治疗变形性骨炎、恶 性高钙血症和骨质疏松症[1]～传统剂型为注射剂～其喷鼻剂是近年 来新开发的剂型～可以减少注射给药给患者带来的顺应性低、容易发 生过敏反应等缺点。与其他的多肽类药物相似～鲑降钙素对光、热不 稳定～其多肽链容易分解[2]。鲑降钙素喷鼻剂做为一种较新颖的剂 型～其所用的辅料、制备工艺与传统注射剂有明显的不同～因此有必 要对其稳定性进行考察～以保证临床用药安全[3]。于芝颖[4]等曾考 察鲑降钙素喷鼻剂在模拟流通和使用条件下的稳定性情况～但没有对 各种条件下特别是光线及长期储存等对其产生的影响进行全面考察。 本文以鲑降钙素及其主要降解物质降钙素C[3-4]的含量为主要指标～ 对鲑降钙素喷鼻剂的稳定性进行深入研究。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 Agilent1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);色谱柱:菲罗门C18(25 cm〓4.6 mm,5 μm);SPX 250C恒温恒湿培养箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂);PHS 3C酸度仪(上海雷磁创益仪器仪有限公司);YB ?照度仪(天津光学仪器仪表有限公司);XS 204分析天平(万分之一,梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。 1.2 试剂 鲑降钙素对照品(批号:140665-200811～中国药品生物制品检定所);降钙素C(质量分数为97%～批号:2008.9;Novartis Pharma S.A.S.);鲑降钙素喷鼻剂(Novartis Pharma S.A.S.);乙腈、甲醇(色谱纯～德国默克公司);四甲基氢氧化铵、磷酸氢二钠、磷酸(广州化学试剂厂～分析纯)。 2 实验方法 2.1 溶液的配制 对照品溶液的制备:精密称取鲑降钙素对照品0.016 0 g～臵10 mL的容量瓶中～用0.1 mol/L的磷酸二氢钠溶液稀释至刻度～摇匀～-4 ?保存备用。实验时分别移取1 mL对照品储备液臵2、5、10、25、50 mL的容量瓶中～加磷酸氢二钠溶液至刻度～配制成质量浓度为32、64、160、320、800 μg/mL的对照品溶液。 供试品溶液的制备:取鲑降钙素喷鼻剂样品直接进样。 2.2 色谱条件 色谱柱:菲罗门C18(25 cm〓4.6 mm,5 μm)～柱温为30 ?～检测波长为220 nm。以质量浓度为0.182%四甲基氢氧化铵 乙腈(体积比9?1)[用磷酸调节pH值至2.5]为流动相A～以质量浓度为0.201%四甲基氢氧化铵 甲醇(体积比2?3)[用磷酸调节pH值至2.5]为流动相B～进行梯度洗脱～流速为1 mL〃min-1～梯度洗脱程序如下:1?10 min～流动相A?流动相B为20%?80%;10?15 min～流动相A?流动相B为65%?35%;15?30 min～流动相A?流动相B为25%?75%。 2.3 降钙素C的专属性考察[3] 称取鲑降钙素对照品适量～用0.1 mol/L的磷酸二氢钠溶解～配成质量浓度为0.125 g〃L-1的溶液～在80 ?恒温水浴中放臵15 h。按“2.2”项下色谱条件～进样10 μL～降钙素C为溶剂峰与主峰间的最大峰～与主峰鲑降钙素峰的分离度应大于3.0。采用面积归一化法定量。 2.4 测定方法 精密吸取供试液10 μL注入HPLC色谱仪～图谱～理论塔板数按鲑降钙素峰计算应? 2.5 方法学考察 2.5.1 线性关系 精密移取各质量浓度对照品溶液10 μL进样～以峰面积(A)为纵坐标、溶液的质量浓度(ρ)为横坐标进行线性回归～得回归方程:A=10.3211ρ+0.0314(r=0.999 2)～表明鲑降钙素在32，1 600 μg/mL的范围内具有良好线性关系。 2.5.2 精密度试验 精密移取供试品溶液10 μL～连续进样5次(n=5)～记录峰面积～计算平均峰面积为52 832～RSD为2.12%～表明方法精密度良好。 2.5.3 回收率试验 取同一供试品9份～分别精密加入相当于样品含量80%、100%、120%的鲑降钙素对照品各3份,按“2.4”项下方法进行含量测定,计算回收率,得平均回收率为99.96%～RSD为1.54%(n=9)～表明方法回收率良好。 2.6 有关物质 采用“2.4”项方法进行含量测定～在色谱图上扣除溶剂峰、辅料峰、主峰外～降钙素C峰和其他峰均为有关物质峰。采用面积归一化方法定量。 2.7 其他 澄明度、总装量、pH值参考《中国药典》方法测定[3]。 3 实验结果 3.1 光照试验 取3批样品～每批15瓶。全部样品放臵于照度为(4 500〒50) Lx条件下～强光照射10 d～分别于第5天和第10天取样测定。结果 见表1。表1 鲑降钙素喷鼻剂光照试验结果 由表1可见:在强光照射条件下～鲑降钙素喷鼻剂的外观、pH值、装量无明显的变化;在5 d与10 d后～鲑降钙素含量下降较快～分别下降5%，10%。表明在(4 500〒500) Lx强光照射条件下～本品已经失去其药用规定的有效性。 3.2 高温试验 取3批样品～将全部样品放臵于40 ?恒温恒湿箱中～放臵10 d～分别于第5天和第10天取样测定～结果见表2。表2 鲑降钙素喷鼻剂高温试验结果 与第0天比较:**P<0.01 由表2可见:在40 ?高温加热条件下～鲑降钙素喷鼻剂的外观、pH值、装量无明显的变化～未见降解产物降钙素C峰出现。将(4 500〒500) Lx强光照射试验结果与40 ?高温加热试验结果进行比较～外观、pH值、装量项均无明显差异～但含量较光照条件下低(P<0.01)～表明鲑降钙素喷鼻剂在高温条件下的稳定性比光照条件下差～即其对热更加敏感。 3.3 高湿试验 取3批样品～将全部样品放臵于密闭容器中～于25 ?、相对湿度(90〒5)%条件下放臵10 d～分别于第5天和第10天取样测定～结果见表3。由结果可见:在高湿条件下～鲑降钙素含量稍微下降～但差异没有显著性～可见湿度对本品影响不大。表3 鲑降钙素喷鼻剂高湿度因素试验结果 3.4 加速试验 取3批样品～全部样品放臵于(25〒2) ?～相对湿度(60〒10)%的恒温箱中～放臵6个月～分别于0、1、2、3、6个月取样测定～结果见表4。 由表4可见:在(25〒2) ?加速试验条件下～鲑降钙素喷鼻剂的外观、pH值、装量无明显的变化;在第3个月时本品的含量下降达10%以上～有关物质项亦不符合中的规定～表明本品在室温条件下的有效期不超过3个月。 3.5 长期试验 取3批样品～全部样品放臵于(5〒3) ?、相对湿度(60〒10)%的恒温箱中～放臵12个月～分别于0、3、6、9、12个月取样测定～结果见表5。表4 鲑降钙素喷鼻剂加速试验结果表5 鲑降钙素喷鼻 剂长期试验结果 按照《中国药典》规定～对温度特别敏感的药物制剂的长期试验可在(5〒3) ?、相对湿度(60〒10)%的条件下进行。从表5可见:放臵第6个月后～鲑降钙素与第0月相比虽有所下降～但含量均符合《中国药典》的规定(90.0%，115.0%)～继续观察至24个月～仍符合规定。 4 讨论 4.1 鲑降钙素在酸性溶液中较稳定～在中性和碱性环境中容易降解[2～4]。因此本试验使用的流动相pH值为2.5～且选用磷酸二氢钠溶液为稀释液～以保证其在测定过程中的稳定性。 4.2 降钙素C是鲑降钙素的主要降解产物～《中国药典》对其提出了限量～其含量高低反映样品的生产工艺和稳定性～需作为考察的重点。 4.3 从影响因素试验的结果来看～在强光和高温加热条件下～鲑降钙素喷鼻剂极不稳定～因此需注意本品在运输流通过程中的稳定性问题～在使用时也应尽量保持低温及避光。 4.4 鲑降钙素为人工合成的生物制品～稳定性较差～从本文结果可见强光和高温会导致其他降解产物的产生～这些物质与临床的过敏现象[5]有无关系有待进一步研究。 【参考文献】 [1] 李梅,吴秀萍,翟凤英.鲑降钙素喷鼻剂治疗老年骨质疏松症临床观察[J].中国药师,2002,5(8):489-491. [2] 陈小平,郭庆东,张强.高效液相色谱法测鲑降钙素注射液的含量[J].自然科学杂志,2003,12(2):114-115. [3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版二部[M].北京:化学工业出版社,2010:1 103. [4] 于芝颖,任晓蕾,李玉.在模拟流通和使用条件下鲑降钙素鼻喷剂的稳定性[J].中国药学杂志,2007,42(4):298-230. [5] 叶顺萍.鲑降钙素注射液致过敏反应1例[J].海峡药学,2006,18(2):203-204.