高效液相色谱法测定复方银杏注射液中银杏总黄酮醇苷含量

高效液相色谱法测定复方银杏注射液中银杏总黄酮醇苷含量 高效液相色谱法测定复方银杏注射液中银杏总黄酮醇苷含量 作者: 于莲， 钟尉方，刘娟，胡盛全【摘要】 目的建立复方银杏注射液中银杏总黄酮醇苷的含量测定方法。方法高效液相色谱法， Zorbax-Extend,C18柱(5 μm ,4.6 mm ×150 mm );甲醇 0.4%磷酸溶液(45?55)为流动相，流速为 1.0 ml?min-1，柱温30?，检测波长360 nm。结果槲皮素浓度在2.07,69.00 μg?ml-1，山柰素浓度在 1.91,63.60 μg?ml-1，异鼠李素浓度在0.73,24.20 μg?ml-1范围内呈良好线性关系。结论该方法分析时间短、专属性好、稳定，可以作为复方银杏注射液质量控制方法。 【关键词】 复方银杏注射液; 总黄酮; 高效液相色谱法 Abstract: ObjectiveTo establish a method for determining the flavonoids in Compound Ginkgo biloba Injection by HPLC. MethodsHPLC, Zorbax-Extend,C18 column (5 μm ,4. 6 mm×150 mm) was used. The mobile phase consisted of methanol 0.4% phosphoric acid (45?55)with flow rate of 1.0 ml?min- 1.The detection wavelength was set at 360 nm .The column temperature was set at .ResultsThe linear range of quercetin, kaempferol and isorhamnetin were at 30? the range of 2.07,69.00 μg?ml-1, 1.91,63.60 μg?ml-1 and 0.73,24.20 μg?ml- 1. ConclusionThe method is rapid ,exclusive and steady, and can be used for the quality control for the injection. Key words: Compound Ginkgo biloba Injection; Flavonoids; HPLC 复方银杏注射液是根据中医临床经验而开发的复方注射剂，由银杏叶提取物、丹参等药材组成，具有增加血管流量、改善血液循环、抑制血小板聚集、防止血栓形成等作用。其中银杏黄酮为主要成分，目前，国内外对银杏黄酮定量的方法有: 络合分光光度法、库仑滴定法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等,1,，参考相关文献,2，3,，比较各方法的优缺点，本实验选择建立了采用反相高效液相色谱法测定复方银杏注射液中黄酮含量的方法，为该复方银杏注射液质量标准的建立提供依据。 1 仪器及材料 1.1 仪器 Agilent 1100 Series: 四元泵，真空在线脱气机，自动进样器，柱温箱，可变波长扫描紫外检测器，Agilent 色谱工作站。 1.2 药品及试剂 槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品购于中国药品生物制品检定所(批号: 10081-9905，110861-201705，110860-201706)，甲醇(色谱纯，天津市科密欧化学试剂开发中心)，磷酸(分析纯，天津市化学试剂一厂)，水为娃哈哈饮用纯 净水(杭州娃哈哈集团)，复方银杏注射液(佳木斯大学化学与药学院提供，批号060414，060415，060416) 。 2 方法及结果 2.1 色谱条件与系统适用性色谱柱Zorbax SB-C18柱(5 μm ,4. 6 mm ×150 mm )，流动相为甲醇 0.4%磷酸溶液(45?55)，检测波长为360 nm，流速 1.0 ml?min-1，柱温30?，进样量10 μl。经确认，出峰顺序为: 槲皮素、山柰素、异鼠李素。理论板数按槲皮素峰计算不低于2 500，异鼠李素分离度大于 1.5。 2.2 对照品溶液及标准曲线的制备 精密称取五氧化二磷干燥的槲皮素、山柰素、异鼠李素，甲醇溶解并定容作为贮备液，浓度为0.345，0.318，0.121 mg?ml-1，分别精密吸取3种对照品贮备液各0.06，0.1，0.3，0.7， 1.0，2.0 ml，于10 ml量瓶中，甲醇定容，0.45 μm微孔滤膜过滤，作为对照品混合液，在上述色谱条件测定，记录峰面积积分值，分别以对照品的浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行回归计算，结果表明: 槲皮素浓度在2.07,69.00 μg?ml-1范围内呈良好线性关系，回归方程: A=57.375C-14.757，相关系数r=0.999 7;山柰素浓度在 1.91,63.60 μg?ml-1范围内呈良好线性关系，回归方程: A=50.194C+15.311，相关系数r=0.999 6;异鼠李素浓度在0.73,24.20 μg?ml-1范 围内呈良好线性关系，回归方程: A=54.857 0C+ 1.230 9，相关系数r=0.999 4。 2.3 供试品溶液的制备 精密吸取复方银杏注射液5 ml于圆底烧瓶中，加甲醇 10 mol/L盐酸溶液(4?1)混合液25 ml，恒温回流 1.5 h，冷却，转移至50 ml量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。 2.4 专属性实验 取不含银杏叶提取物的阴性对照注射液，按供试品溶液的制备方法，制备阴性对照溶液，分别取供试品溶液、对照品溶液与阴性对照溶液，相同色谱条件进样测定，测定结果见图1。检测结果证实: 样品中槲皮素、山柰素、异鼠李素与其它组分分离较好,且阴性对照在相应的保留时间无干扰。