雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎差异表达基因的呈现_cropped

雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎差异表达基因的呈现_cropped ( ) SN 0 37 9 - 4 17 IS遗 遗 学 遗A c ta G e n e tic a S in ic a , M a rc h 2 00 5 , 32 3 : 25 23 ,26 3 S c re e n o f D iffe re n tia lly E xp re s s e d G e n e s B e tw e e n G a s tru la Em b ryo s a n d Ta il B u d Em b ryo s in G yn o g e n e tic G ib e l C a rp L IU J un , SH I Yao 2H ua , Y IN J u n , GU I J ia n ?2F a n g ( S ta te Ke y L a bo ra to ry o f F re shw a te r Eco lo g y a n d B io te ch no lo gy, W uh a n C e n te r fo r D e ve lo pm e n ta l ( ) A b s t ra c t: S up p re s s io n su b tra c tive hyb rid iz a tio n S SH cDNA p la sm id lib ra rie s w e re co n s tru c te d be tw e e n ga s2 ( ) . tru la em b ryo s a n d ta il b ud em b ryo s in g yno g e ne tic g ibe l c a rp C a ra s s iu s a u ra tu s g ibe lio 7 39 a nd 81 6 PC R p o s itive c lo ne s w e re re sp e c tive ly se le c te d to p e rfo rm do t b lo t, a n d 7 2 do t b lo t po s itive c lo ne s a nd 98 do t b lo t p o s itive c lo ne s w e re o b ta in e d from the S SH p la sm id lib ra rie s sp e c ific fo r g a s tru la em b ryo s a n d ta il b ud em b ryo s. S e qu e n c ing a n a ly s is a nd da ta ba se se a rch e s ind ic a te d tha t th e re w e re 1 9 know n ge ne s a n d 3 1 u nknow n cDNA fra gm e n ts in th e se qu e n ce d 7 2 do t b lo t po s itive c lo n e s sp e c ific fo r ga s tru la em b ryo s , a n d 5 2 know n g e n e s a n d 3 7 u nknow n cDNA fra gm e n ts in the se q ue nc e d 9 8 do t b lo t p o s itive c lo ne s sp e c ific fo r ta il b ud em b ryo s. M o reo 2 ve r, sp e c ific e xp re s s io n s o f p a rtia l g e n e s w e re fu rth e r co n firm e d b y v irtu a l N o rthe rn b lo ts a n d R T2PC R. Th e sc re e n o f the se d iffe re n tia lly e xp re s se d ge ne s w ill h e lp u s to u nd e rs ta nd th e m o le c u la r m e c ha n ism in g ib e l ca rp em b ryo g e n e s is. 雌核发育发发原发期胚胎和尾芽 期 胚胎差异表达基因的呈 发 摘 要 : 构建了雌核遗育遗遗原遗期胚胎和尾芽期胚胎遗的抑制性差减遗交 cDNA 遗粒文遗 。遗原遗期 73 9 个和尾芽期 8 16 个 PC R 阳性克隆遗行斑点遗交 , 得到 7 2 个原遗期和 9 8 个尾芽期斑点遗交阳性克隆 。遗序和基因 据遗数比遗遗果表明 : 72 个原遗期斑点遗交性克阳隆中 ,包括 19 个已知基因的 cDNA 片段和 31 个没有同源性的 cDNA 片段 ; 9 8 个尾芽期斑点遗交阳性克隆中 ,包括 5 2 个已知基因的 cDNA 片段和 3 7 个没有同源性的 cDNA 片 段 。采用遗虚 N o rthe rn 遗交和 R T2PC R 遗遗了部分基因在遗遗胚胎遗育遗程中的差表异达 。遗些差异表达 收稿日期 : 20 0 4 - 0 6 - 1 1; 修回日期 : 2 0 04 - 07 - 1 6 () ( ) () 基金发目 :国家自然科学基金重点遗目 遗号 : 3 01 3 02 4 0 、家国高技遗研究遗展遗划 8 63 遗 划遗号 : 2 0 01AA2 22 0 77 1 和中国科学院遗 () (新 方向性遗目 遗号 : KXCX2 2SW 230 3 [ S up po rte d b y N a tio n a l N a tu ra l S c ie nc e Fo u n da tio n o f C h in a N o. 30 1 30 2 4 ) () 0 , C h in e se N a 2 tio n a l P ro g ram s fo r H ig h Te c h no lo g y R e se a rc h a n d D e ve lopm e n t N o. 2 0 0 1AA2 22 0 7 71 , a n d Know le d ge Inno va tio n P ro g ram o f () C h in e se A c a d em y o f S c ie n ce s N o. KXC X2 2SW 23 0 3 ] ( ) :1 9 66 - ,,,,,::作者发介 刘 遗男 湖北南人漳 博士 副教授 遗遗方向 遗育遗遗学 。遗工作遗位 武遗工遗学院生物化与学工程系 E 2m a il: jfg u i@ ih b. a c. cn? 通遗作者 。 的呈遗遗遗一步研究遗遗胚胎遗育的分子机制奠定了基遗 。 : ; ; ; SMAR T cDNA; ; 发发发 遗遗 抑制性差减遗交 差表异达基因 原遗胚 尾芽胚 ( ) 03 79 241 72 2 00 5 03 202 中发分发号 : S 文献发发发 : 文章发号 53 21191 7A: 遗遗是一遗可遗行雌核遗育生殖的天然多倍体不同 遗 育 遗 期 的 胚 胎 分 遗 用 三 氟 乙 [ 1 ] 酸 遗 遗遗遗 ,但其他与雌核遗育物遗相比有两个遗著的 特点 ( )C sTFA 密度 梯度 超 速离 心提 取 遗 RNA , : 它 的 天 然 群 体 中 存 在 5 % , 20 % 的 ( ) 用生 物 素遗遗的寡聚 dT 探遗和遗遗合素包的裹磁雄 性 个[ 2 ] ( 珠遗 化 m RNA ,步遗遗遗 RNA E x tra c tio n Kit P ha 体 ;它有遗遗遗遗雄遗的同源精子和其他遗遗的 异源精,[ 5 ] 3) rm a 2 c ia 和 Po lyA T ra c t m RNA Iso la tio n S y 子不同的生殖遗答方式 。当遗遗卵子用 ( s tem P ro 2异源精子受精遗 核生殖的方式遗生后代 ,,以雌所遗 ) 生的后代不但与其母本相似 ,个体遗也表遗出高度 m e ga 。操作手册 的相似性 。当遗遗卵子用同源精子受精遗 ,以两性 1. 2. 2 SMAR T cDNA 合生殖的方式繁殖后代 ,后代个体遗以及后代其与遗成 本遗存在遗大的差 异,并且出遗一定比例的雄性 个体 按 C lo n te c h SMAR T PC R S yn the s is Kit[ 6 , 7 ] [ 1 3 , 1 4 。因此 ,遗遗被遗遗是遗遗遗化遗遗 学和 遗合成 遗 遗 卵 母 遗 胞 、原 遗 期 、尾 芽 期 和 以遗,按本遗遗室已遗道的方法遗原遗期],[ 8 1 0 ] 育生物学研究的特殊材料 。遗物胚胎遗育遗胚胎 和 尾 芽 期 胚 胎 遗 材 料 , 用 PC R 2S e 程可以分遗受精 、卵裂 、原遗形成 、器官遗生和孵le c t cDNA 化 等遗段 ,并且每一物遗都有其特定的遗育模式 。遗 ( ) S u b tra c tio n Kit C lo n te c h 遗行差遗交减 。主育是物遗遗遗信息按照特定的遗遗和空遗表的遗 果 达,是要步 遗如下 :取遗遗原遗期胚胎和尾芽期胚胎 m RNA 生物遗遗信息与内外遗境因子相互作用的遗 果 。多遗各 胞生物起始于受精卵 ,因此 ,遗成生物的 多体众遗胞2 m g 遗 反 遗 遗 合 成 双 遗 cDNA合 成 的 分。具有相同的遗遗信息 。差的异基因活性遗 致遗胞分化 双 遗 ,遗而遗致胚胎遗育 。所遗与胚胎遗育 相遗的差表异达 遗 用 遗 消 化 化 遗 物 分 遗 cDNAR sa , 分?消不遗然e r cDNA a d ap to r , 与 接 后 遗 行 两 遗 遗 的基因 ,是指那些在胚胎遗育遗程交 。次加 1 D rive r cDNA 第 遗 交 是 将 遗 量 的 中 ,其表达模式在遗遗上或者在空遗上存在明遗差 异到 每 份 的基因 。正是由于基因的差异表达 ,物遗才按各Te s te r cDNA 中 ,遗 98 ?遗性后 , 68 ?遗交 8 h。[ 1 1 ] 自的特性遗行遗育 遗了遗遗找遗胚胎遗育遗。差 表异达的基因片段保持遗遗状遗 ,因遗遗它既不与遗也遗合D rive r cDNA ,Te s te r cDNA 合 没与自身 。程中差表异达的基因 ,本研究建构了雌核遗育遗遗 原 次次并2 1 ,遗交是将第 遗交的两份遗品混合 再第 遗期 胚胎 和 尾芽 期胚 胎 抑制 性差 减 遗交 次加入遗性的 D rive r cDNA ,遗遗遗交 10 h。遗果 , 差cDNA 异表的达遗遗 cDNA 重新退火而形成遗有不同 粘遗粒文遗 ,,遗文遗遗遗 到了一些在遗遗胚胎遗通得 性末端的遗 双 cDNA 分子 。随后遗行两遗 PC R , 育中差表异达的基因 ,包括一些与早期胚胎遗育相 特地异遗增差表异达的 cDNA 片段 。1材料和方法α以 2tub u lin 基因作遗遗指遗 ,比遗遗基因在差 减 遗交前后的 cDNA 中丰度相差多少倍 ,估遗差 遗减发1. 1 发及其雌核发育胚交的效率 。胎减 1. 2. 4 cDNA 差文遗的构遗遗取自中国科院水学生生物究研所遗遗遗遗 建基地 。按文献 [ 12 ]的方法遗遗遗遗遗行人工催遗 遗卵 将 第 2 次 PC R 遗 物 遗 接 到 p G EM 用遗遗的精子与其授精遗遗雌核遗育 ,遗得雌 核遗育胚胎 ( ) 2T 遗 体P rom e g a ,并将遗接遗物遗化大遗杆菌 取不同遗育遗期的胚胎遗行遗遗 。 JM 109 , 在 X2ga l/ IP TG 遗脂平板上挑取白色菌落 方1. 2 法。PC R 遗 遗入插片段 , 遗果得到两个差 减 cDNA 遗粒 文 遗 遗的提的遗化1. 2. 1 RNA m RNA 取和 即雌核遗育遗遗原遗期 胚胎 差 减 cDNA 遗 粒文 遗 L IU J un e t a .l : S c re e n o f D iffe re n tia lly E xp re s se d G e ne s B e tw e e n 255G a s tru la 斑点遗交1. 2. 5 遗遗差表异达的基因片段交 、洗膜和遗色的方法与斑点遗交相同 。 1. 2. 7以自差 来减 cDNA 文遗克隆的 LB 培遗物作模 R T2P C R 分析基因在不同胚胎遗育遗期的板 ,用 N e s te d 1 和 N e s te d 2R 引物遗行 PC 表达 ( 用R。 将PC R 遗物等量与 016 m o l/L N aO H 混匀 ,SV To ta l RNA Iso la tio n S y s temP ro 2) 在遗尼 两遗膜遗遗位置各点 1 m L 混合液 。膜遗 015 m e ga 提取遗遗不同胚胎遗育遗期遗 RNA ,用 S u2 ( ) m o l/L逆 遗 遗 遗 随 机 引 p e rS c rip t G IB CO ?和 ( ( )物 2T ris HC l pH 7. 5 ,,5 和 水漂洗后 2中蒸遗自然晾′ )干 ,NNNNN 2C 23 ′, N = G , A , T, C 合成遗遗 cDNA。8 0 ?膜烤 2 h。分遗以正向和反向差遗减交的第二 遗 用 基因的正向引物和反向引物遗行 PC R ,以遗遗的 αPC R 遗物做探遗遗行遗交 ,探遗用地高辛遗遗 。2 tu bu lin 基因作遗遗照 。 6 8 ?遗遗交 1 h ,加入探遗后 68 ?遗遗遗交 20 h。 遗2遗果 交后于室温洗膜 2 次 ,每次各 10 m in , 洗膜液遗 含 0 1 % SD S 2 S SC01 % SD 再用含 1的×。1抑制2. 1 性差减发交的差减效S 的率 0 11 ×S SC 于 68 ?洗膜次两 ,每次 1 5 m in。用遗,以遗遗原遗期胚胎和尾芽期胚胎遗材料 行碱性 酸磷遗偶遗的地高辛抗体和 B C IP /NB T 底物正反向差减遗交 。 Te s te r和 D rive r遗遗两遗遗 交 遗行 免疫遗遗 。和遗 两 PC R 后 , 在第 2 次 PC R 遗物中 , 那些1. 2. 6 N o rthe rn 虚遗遗交在原 遗期胚胎和尾芽期胚胎表达没有差的基异因的 将遗遗不同胚胎遗育遗期的 SMAR T cDNA 各差, 异表 达的 基 因得 到了 数已大大地减少 了 拷遗 富 集 。μα2 0 L 在 112 %遗脂糖上遗泳 。遗泳遗束后 ,将胶凝 以 2tu bu lin 基因作遗遗指遗 ,遗遗遗基因在差减遗 ( 于数倍遗的遗体性液 115 m o l/L N aC l, 015 m o l/L 交前后的 cDNA 中丰度相差多少倍 ,估遗差减遗交 ) N aO H 中浸泡 3 0 m in ,并温和地振遗 ,用蒸遗水漂 ( ) 的效率 。如遗 1 所示 , 在原遗期 G S 未遗遗差减 ( 洗数次后于倍数体遗的中和液 1 m o l/L T ris 2HC α遗交的 2 cDNA 中 ,tub u lin 基因在 PC R 18 个l,循遗 后就可遗到遗增遗 ,而在遗遗差遗减交的 cDNA 中 ) p H 7. 5; 1. 5 m o l/L N aC l中 浸 泡 2 次 , 每 直到 2 8 个循遗才遗到遗 增 遗 。因 此 , 差减 遗交 ( 2 8 ,2 0 次 1 5 m in。将硝酸遗遗素膜浮在蒸遗 水的 表 面 , 富cDNA 2将集了大遗 原遗期胚胎中特有的 ?)直到 遗 膜从下向上湿透遗止 ,再用 20 ×S SC 浸泡 倍尾芽也256 ,cDNA 。同遗地 期胚胎特异的 被 富1 0 m in。 以 1 0 ×S SC 作遗膜液 , 用遗遗的毛遗管作 集了遗 。25 6 倍用遗膜 1 6 h ,cDNA 移到硝酸遗遗素膜上 。遗膜遗束将遗 α 发 1 P C R 发发2tu b lin cDNA 的差减效 率 A: 原遗期 ; B : 尾芽期 。1 ,4: 未差减 cDNA 的遗物 ; 5 ,8 : 差减 cDNA 的遗物 ; 1 , 5: 1 8 个循遗 ; 2 , 6: 2 3 个循遗 ; 3 , 7: 2 8 个循 遗 ; 4 , 8 : 3 3 个循遗 ; M : DL2 0 0 0 DNA 分子量遗准 。 α F ig. 1 S u b t ra c t io n e ff ic ie n c y o f 2tu b lin cDNA b e tw e e n s u b t ra c te d a n d u n s u b t ra c te d cDNA s d e te c te d b y P C R A: G a s tru la tio n s ta ge ; B : Ta il bu d s ta ge. 1 4 : P ro d uc ts o f un su b tra c te d cDNA s; 5 8 : P ro d uc ts o f sub tra ,, c te d cDNA s; 遗斑点遗交阳性克隆遗行遗序分析 。遗果表明差2. 2 异表达基因的发() 表 1 ,原遗期 72 个斑点遗交性阳克隆中包括 19 发 个已知基 因 的 cDNA 片 段 和 31 个 没 有 将差遗交第减 2 次 PC R 遗物遗接到 p G EM 2T ( ) 同 源 性 的 cDNA 片段 。在 19 个已知的基因中 遗体 P rom e ga , 并 将 遗 接 遗 物 遗 化 大 遗 杆 , 6 个在其他物 遗中遗有核酸序列遗道 ,并且其他与物菌 遗的相遗序JM 10 9 ,Xga l/ IP TG 脂平板上挑取白色菌落 在2遗 ,列同源 性 很低 , 功 能尚 不清 楚 。 11 个 已知 遗果得到两个差 减 cDNA 遗粒文遗 ,即雌核遗育遗 遗原基因 的 cDNA 片段出遗 2 次或 2 次以上 。在 遗期胚胎差 减 cDNA 遗 粒 文遗 和尾 芽 期胚 胎 98 个尾芽期 斑点遗交性克隆中阳 ,包括 52 个已知差 减 cDNA 遗粒文遗 。基因的 cDNA 片段和 37 个没有同源性的 遗 73 9 个遗遗原遗期和 816 个尾芽期 P C R 阳 cDNA 片段 。在 52 个 已知的基因中 , 11 个在其性克隆遗行点遗交遗遗 。每个克隆分遗点在遗膜两他物遗中遗有核酸序列遗 上相遗遗的位置 ,并分遗用原遗期胚胎和尾芽期胚 胎道 ,功能尚不清楚 。 7 个已知基因的 cDNA 片差 减 cDNA 的第 2 次 PC R 遗物遗遗的探遗做点 遗段出 遗 2 次或 2 次以上 。在已知的基因中 ,有一交 。遗 些是遗 控 胚 胎 遗 育 的 重 要 基 因 2 所示的是部分点遗交的遗果 。在遗膜 上两, 包 括 与 [ 1 5 , 1 6 ] [ 1 7 ]相同的位置 遗 遗 育 相 遗 的 ,遗交信号强度相差 5 倍以上的是阳 PO U 2 、MD K2 基因与差异2. 3 表达基因在胚胎不同发育发期差异性克隆 ,分遗得到原遗期 7 2 个和尾芽期 98 个斑点表达 的确发 从原遗期和尾芽期斑点遗 交阳 性 克隆 中提 取 克隆的 段制遗探遗遗行虚遗 20 cDNA N o rth2个片 e rn 遗交 , 以遗遗卵母遗胞及原遗期 、尾芽期 、和心 跳期胚胎 4 遗 SMAR T cDNA 做遗交模板 。在遗泳 遗遗遗遗 不 同 遗 期 的 模 板 量 相 一 致 的 情 况 (下 遗 ) 3 ,有 15 个 cDNA 片段在遗 4 个胚胎遗育遗期呈 () 遗差异表达 表 1 。遗些基因有遗表两达模式 : 有 的存在母源性遗遗本 ,但在随后的胚胎遗育中表 达减 弱 ,如 G S 1 基因 ,遗基因在成熟卵母遗胞表达最 强 ,在原遗期表达减弱 ,尾芽期和心跳期遗遗不到遗 遗遗 物 ;另一遗是不存在母源性遗遗本的差异表 的基因达 。其中 , G S 30 和 G S 3 6 在原遗期表遗达强 ,() 发 2 发发原发A 和尾芽胚 在尾芽期表达极弱 ,在心跳期遗遗不到表达 ; G S 31 ()胚B 差异 cDNA 片段的发从原遗期遗始表 达 , 在 尾芽 期和 心 跳期 表达 发 减 弱 ; TB S 9、TB S 14、TB S 30、TB S 4 4 和 ( ) 每克个隆点在两遗膜上相同的位置 , 分遗用遗遗原遗胚 G S 和 ( ) 尾芽胚 TB S 差减 cDNA 的第二次 PCR 遗物作探遗遗交 , 遗TB S 58 遗 5 个基 因原从遗期遗始表达 , 随后表达增交信号相差 5 倍以上的是阳性克隆 。性阳克隆用箭遗遗出 。强 ; TB S 52 基因 从尾芽期起始表达 ,随后表增达F ig. 2 S c re e n o f d iffe re n t ia l cDNA f ra gm e n ts f 强 ; 而 TB S 39 基因 e s u b t ra c te d p la sm id lib ra r ie s b e tw e e n g rom th从原遗期起始表达 ,后的表达没强度有明遗差异随 s t ru laa() 3 遗。() () em b ry o s A a n d ta il b u d em b ryo s B b y d o t b lo ts我遗遗遗部分斑点遗交阳性克隆采用 R T2PC R 分Tw o id e n tic a l m em b ra n e s w e re h yb rid iz e d w ith p ro b α析了它遗在胚胎遗育遗程中的表达遗律 。以 2 tu bu ( ) e s from the su b tra c tive cDNA s o f g a s tru la s ta ge G S lin 基因做遗照 , 遗遗各 个遗 期 的模 板遗 度 , 使( ) em b ryo s a n d ta il b u d s ta g e TB S em b ryo s. The d iffe () 它遗的遗度相一致 遗 4 。从原遗期和尾芽期斑点 遗 L IU J un e t a .l : S c re e n o f D iffe re n tia lly E xp re s se d G e ne s B e tw e e n 257G a s tru la 表 1 斑点发交阳性克隆发序 cDNA 片段的同源性发发和差异表 达发发 Ta b le 1 H om o lo g u e s e a rc h in g a n d d iffe re n t ia l e xp re s s io n c o n f irm a t io n o f th s e q u e n c e d A ra gm e n ts rom th e d o t b lo t p o s e c lo n e e cDNffitivs克隆代号同源基因 大小 克隆遗数同源物遗 e nB a n k登遗号相同率 x / y差异表达cDNAG 遗遗C lo ne N Hom o lo gu cDNA s iz e o. o fSp e c ie A c c e s s io n N Ide n titie s x / No.eso.y( )bp c lo n e D iffe re n ( )% stia l e xp re s s io n ( 4 0 82 C 0 0 39 1 19 /5 6 34 % R VN S 1 ,遗遗遗遗子 F u r家族黄遗胞菌G9)2T ra n sc rip tio n re g u la Xy le lla fa s tid io to rsa F u r fam ily( AJ 3 0 6 42 1 34 /2 31 5 8 % N S 3 ,牛G6 9 255 2脂氧化遗4)7B o s Ta u ru s5 2lipo xyg e na ( 1 54金遗AB 0 0 69 5 9 8 / 10 2 9 6 3NG S 8 ,1 se3)% 2C a ra s s iu s a u ra C 1遗胞色素 氧化遗 遗遗位 tu s( G S 1 6 2 61AB 0 0 69 5 1 89 /2 08 9 0 % Cyto ch rom e C o xida se subun 3金遗3)it 1C a ra s s iu s a u ra ( G S 1 1 8 21Y1 3 65 55 /6 0 91 % Rb遗胞色素 tu s43)C y to c h ro som e 斑遗遗b A 2?前阿朴脂蛋白 ( 6 42NM 200 4 81 8 1 / 10 0 8 1 3 S 1 5 ,1 人G)9% 6Hom o sap ie n s体 ( 6 04野遗AB 0 0 93 0 7 6 / 11 9 6 2 N4G S 1 7 ,2 遗固醇脱遗遗4)% 0A n a s p la ty rh ync S te ro id de h yd ro g e n a ho sse( 3 04A F4 0 84 3 1 30 /1 40 9 2 % N4 S 2 1 ,2 GRRM RNA N SA P 1鼠4遗合蛋白 )4 R RM RNA b ind in g p ro te M u s m u scu lu in( G S 2 5 5 41NM 201 7 80 31 /8 3 37 % 人N SA P 15)1Hom o sap ie n sFLJ 20 3 9 推断蛋白 ( G S 2 4 9 91人XM 208 5 36 4 0 / 12 2 3 2 66)8% Hom o sap ie n sH ypo the tica l p ro te in FLJ ( G S 2 3 4 91金遗N C 200 2 0 1 09 /1 15 9 5 % 203967)79C a ra s s iu s a u ra 推断蛋白tu s( 7 32U 9 3 56 3 6 / 14 0 2 5 4G S 2 8 ,2 H yp o th e tic a l p ro te in 遗人4)% 9胞色素 C 氧化遗遗遗位 ? Cyto Hom o sap ie n sch rom e C o xida se subun it?( G S 3 3 3 01A F2 6 34 5 3 0 /8 0 3 7 R Vp 1 推断蛋白 鼠08)5 M u s m u scu lu ( 4 3 72AJ 2 3 6 88 9 0 / 10 3 8 7 G S 3 1 ,3 阿朴脂蛋白 E 前体sR V2)% 2Ap o lipo p ro te in E p re c u 斑遗遗rso rG S 3 4 9 61XM 201 7 08 D a n io re ( 25 /2 6 96 % FLJ 21 4 3 3推断蛋白 0rio)24 9 32Z8 1 0 G S 3 4 ,3 人( 12 /3 5 34 % 50Hypo the tica l p ro te in FLJ 5Hom o sap ie n s)21432( 8 42X8 4 22 82 /8 5 96 % R V5 S 3 6 ,3 G遗虫RNA 遗合蛋白4)7C a e no rh a b d itis e le RNA b ind ing p ro te ga n( 2 4 22A F2 6 79 8 48 /7 4 64 % G S 3 8 ,3 in7)9斑遗遗po u2同源异形盒蛋白 D a n io re ( G S 4 5 4 91AL1 2 17 4 21 /6 8 30 % Hom eo tic p ro te in p o rio01)u2人R a n 1 3遗合蛋白 Hom o sap ie n sR a n b ind ing p ro te in 1 2 624G S 4 1 ,4 32 液泡形成遗遗遗因子G S 4 3 ,7 R e g u la to r o f ve sc 2u le fo rm a tio n( TB S 15 5 21D 8 3 95 1 06 /1 75 6 1 % 青遗R V无同源基因0) C ho r i o l y s i n H O r y z i a s l a t i p e s 遗表 1 克隆代号同源基因 大小 克隆遗数同源物遗 e nB a n k登遗号相同率 x / y差异表达cDNAG 遗遗C lo ne N Hom o lo gu cDNA s iz e N o. o fSp e c ie A c c e s s io n N Ide n titie s x / o.eo.ys( )bp c lo n e D iffe re n ( )% stia l e xp re s s io n c o n f i r m a t i o n( TB S 2 5 41 1 4 96 1 10 /1 38 7 9 % 6U核糖体蛋白 L5人6)R ibo som a l p ro te in Hom o sap ie n sL5( TB S 36 6 51人A F2 1 59 3 1 90 /2 00 9 5 % Np44 s10蛋白体遗遗遗粒遗遗位 5)Hom o sap ie n sP ro te a som e re g u la to ry p a rtic u le sub u n it p ( 7 52D 6 4 03 7 6 / 13 2 5 7 3 S 4 ,青遗TB4 4 s1 03)% 5O ryz ia s la tip e 遗遗蛋白s( TB S 65 7 21A F2 0 09 5 34 /3 7 91 % 0斑遗遗)T ra n sfe rrin 血小板衍生 生遗因子 A 遗 P la te le t2d e D a n io re rive d g row th( 1TB S 73 7 21A F1 4 38 1 10 /1 23 8 9 % 牛fa c to r A c ha 5)B o s Ta u ru sin ( TB S 83 8 51人B C 0 1 00 2 1 04 /1 21 8 5 % 6 0 s 核糖体蛋白 6)Hom o sap ie n sL10( 1 02遗遗虎遗A F2 6 61 6 1 31 /1 33 9 8 % R V4TB S 9 ,1 60 s ribo som a l p ro te in L1 6)00G illic h thy s m ira b ilisL 27核糖体蛋白 ( 7 73A F2 4 03 7 9 6 / 11 7 8 2 4TB S 1 1 ,1 遗非遗遗6)% 3R ibo som a l p ro te in L2 7O reo c h rom is m o s sam b ic u ( TB S 14 5 61U 4 1 44 76 /7 8 97 % R V4核糖体蛋白 S 26s8)R ibo som a l p ro te in S 2 人6( TB S 154 1 31L09 7 431 10 /1 37 8 0 % Hom o sap ie n s角蛋白) 金遗Ke ra tin( 3 2 33NM _1 3 09 5 33 /3 5 94 % R S 1 6 ,1 TBC a ra s s iu s a u ra D e lta A4)8tu s( TB S 19 1 11A F2 4 61 4 9 3 / 10 3 9 0 3磷酸遗醇式丙遗酸梭激遗斑遗遗9)% P ho sp ho e no lp y ru D a n io re va te c a rbo xyk in a se ( 26 S 蛋白遗体遗位 p 5 5TB S 205 3 11AB 0 0 31 0 1 43 /1 63 8 7 % 人3)2 6 S p ro te a som e su b un it p Hom o sap ie n s5 5( TB S 213 0 51人NM 205 3 05 25 /3 7 67 % NS P T3 42相遗因子 )3Hom o sap ie n sS P T3 2a s so c ia te d fa c to ( TB S 224 0 91人AJ 2 7 7 54 54 /8 4 64 % r 4 26)Hom o sap ie n sZN F1 4 鼠TB S 235 2 41B C 0 0 57 2 3( 18 /6 1 29 % 1M u s m u scu lu )sγ( TB S 245 2 31A Y0 5 05 0 45 /6 9 65 % R遗遗遗遗因子 遗基斑遗遗7)Co ne tra n sd uc in g am D a n io re m a su b un it ( 未命名蛋白TB S 255 1 81A K0 2 28 2 8 7 / 10 5 8 2 N人2)% U n n am e d p ro te in p ro du Hom o sap ie n sc tTB S 264 4 51人( NM 200 2 21 49 /7 6 64 % In te g rin , a lp h a Hom o sap ie n s)0( TB S 27 2 81日本遗AB 0 4 62 0 36 /7 7 46 % R V51 4 kD 阿朴脂蛋白9)A n gu illa jap o n 14 kD ap o lipo p ro te ic ain( TB S 285 5 81U 6 1 39 69 /7 0 98 % NR a n斑遗遗5) D a n i o r e r i o L IU J un e t a .l : S c re e n o f D iffe re n tia lly E xp re s se d G e ne s B e tw e e n 259G a s tru la 遗表 1 克隆代号同源基因 大小 克隆遗数同源物遗 e nB a n k登遗号相同率 x / y差异表达cDNAG 遗遗C lo n e N Hom o lo g cDNA s iz e N o. o fSp e c ie A c c e s s io n N Ide n titie s x / o.ueso.y( )bp c lo n e D iffe re n ( )% stia l e xp re s s io n c o n f i r m a t i o n( TB S 2 3 81 F4 0 28 1 1 30 /1 31 9 9 % 5A4 0 S 核糖体蛋白 S 斑真98)10Ic ta lu ru s p un c ta tu s4 0 S ribo som a l p ro te in S ( TB S 3 0 23 5 5 02L27 1 721 65 /1 82 9 1 % R V10遗遗)1遗氨酸蛋白遗抑制遗C yp rin u s c a rp ( S 3 11 34 /1 53 8 7 % NTBinoS e rine p ro te in a se in h ib 6 1 1B C 0 0 43 6 2)4ito r R IKEN cDNA 2 61 0 0 人( S 3 6 2 11Y1 1 25 8 5 / 11 9 7 1 RTBHom o sap ie n s33 c09 ge n e34)% 青遗( S 3 9 61NM _0 0 30 9 2 8 / 28 1 0 0 TB2小核核糖蛋白多遗 FO ryz ia s la tip e 45)% Sm a ll n u c le a r ribo n uc sleo p ro te in po lyp e tid e F( TB S 3 5 0 11B C 0 0 44 4 52 /5 8 89 % N人57)Hom o sap ie n s ( TB S 3 0 71斑遗遗81 /8 7 93 % 3核苷酸遗原遗蛋白 r1 C la s s ?NM _1 3 14 5 6)D a n io re R ibo nu c leo tid e re d uc 5riota se p ro te in r1 c la s s ? ( TB S 3 FLN 2 9 ge n 3 6 61NM _0 0 67 0 20 /6 3 31 % 人7e0)Hom o sap ie n s C G17 2 87 TB S 3 5 2 01果遗A E0 0 38 0 ( 18 /4 5 40 % 82PA4D ro sop h ila m e la no ga )s te r( TB S 3 9 24 7 22AB 0 5 61 0 10 5 / 10 5 1 0 0 R V3延伸因子 21 4金遗)0% α C a ra s s iu s a u ra E lo n ga tio n fa c to r21 a ( TB S 4 6 6 01B C 0 2 55 0 21 /7 5 28 % tu slp h a11)鼠( S 4 3 9 51S 5 1 11 1 11 /1 13 9 8 % TB蛋白体遗基 XC 3M u s m u scu lu 21)P ro te a som e sub u n it XC s3( 1TB S 4 5 2 31A F4 0 15 6 21 /1 48 8 1 % 爪蟾L1 3 3核糖体蛋白 8) a( TB S 4 3 1 81A Y0 0 88 3 84 /8 6 98 % R V斑遗遗46)R ibo som a l p ro te in L1 3 D a n io re rio( TB S 4 8 2 31A F0 6 00 8 2 24 /2 50 8 9 % 蛋白体遗基 C 85鼠9)P ro te a som e sub u n it C M u s m u scu lu 8( TB S 4 6 0 51Y1 7 11 53 /7 3 72 % sL2 463核糖体蛋白 )爪蟾R ibo som a l p ro te in ( TB S 4 4 7 51A K0 2 77 9 8 8 / 11 5 7 7 L24Xe nop u s la e v 79)% is未命名蛋白( TB S 4 2 4 0142 /8 0 52 % R人U n n am e d p ro te NM _0 1 93 4 8)Hom o sap ie n sin4 G 8 蛋白信号 遗遗子( TB S 4 2 2 21AJ 3 1 5 14 68 /7 2 94 % 虹遗R e gu la to r o f G 2p ro 90)O n co rh yn c h u s m yk te in s ig na lin g 8is s( S 5 3 1 81U 1 4 96 8 0 / 10 0 8 0 TB核糖体蛋白 S 809人)% R ibo som a l p ro te in S Hom o sap ie n s8( TB S 5 2 8 71Z2 9 5 72 /7 9 91 % 1牛55)L2 8核糖体蛋白 B o s Ta u ru sR ibo som a l p ro te in ( TB S 5 6 8 31D 8 3 95 7 1 / 15 4 4 6 R VL28青遗20)% L3核糖蛋体白 O ryz ia s la tip e ( TB S 5 5 2 71M 9 6 17 8 0 / 10 6 7 6 R VsR ibo som e p ro te in 30)% C h r i o l y s i n O r y z i a s l a t i p e s 遗表 1克隆代号同源基因 大小 克隆遗数同源物遗 e nB a n k登遗号相同率 x / y差异表达cDNAG 遗遗C lo n e N Hom o lo g cDNA s iz e N o. o fSp e c ie A c c e s s io n N Ide n titie s x / o.ueo.ys( )bp c lo n e D iffe re n ( )% stia l e xp re s s io n c o n f i r m a t i o n( TB S 5 2 41AB 0 7 14 2 1 12 /1 81 6 1 % R V5孵化遗 EH E4日本遗43)C h rio ly s in e nz ym e EH A n gu illa jap o n E4ic a( TB S 5 6 1 41A F1 0 40 5 9 9 / 10 0 9 9 S 1 5核糖体蛋白 大西洋遗9)% S a lm o sa la 5( S 5 3 7 01A F0 0 96 6 9 4 / 10 1 9 4 TBr65)R ibo som a l p ro te in S % 虹遗15( S 5 3 6 41B C 0 1 70 9 9 7 / 10 5 9 2 TBO n co rh yn c h u s m yk S 6核糖体蛋白 73)% is sR ibo som a l p ro te in S ( S 5 6 2 61A F4 0 15 6 1 33 /1 46 9 1 % R VTB人680)Hom o sap ie n sS 3 5 核糖体蛋白 ( TB S 5 3 6 21A E0 0 36 4 20 /5 7 35 % 斑真a93)Ic ta lu ru s p un c ta tu s( TB S 6 0 26 3 5 21A F0 3 46 0 8 0 / 11 9 6 7 遗化物通道 AB P7)1% 果遗C h lo ric le ch am e l AB PTB S 6 2 29 无同源基因8 N o hom o l o g y 注 : G S :原遗期 ; TB S :尾芽期 ; N :非差异表达 ; V:虚遗 N o rthe rn 遗交遗遗遗遗 ; R : R T2PCR 遗遗遗遗 。 N o te : G S : g a s tru la s ta ge ; TB S : ta il bu d s ta g e ; N : no d iffe re n tia l e xp re s s io n; V: d iffe re n tia l e xp re s s io n co n firm e d b y v irtua l no rthe rn h yb rid 2 iz a tio n; R : d iffe re n tia l e xp re s s io n co nfirm e d b y P T2PC R. () 特保PC R , 异的 遗增 遗 了其 具有 法遗交和两步 遗差异表达 表 1 。它遗有两遗表达模式 : 一遗存 遗在母源性遗遗本 , G S 1 基因在成熟卵母遗胞及胚胎 遗 高的特异性 。外另 , S SH 技遗最大的遗遗是遗低丰 育早期表遗达强 ,尾芽期后表达减弱 ,而 G S 3 6 和 度基因的富集作用 ,遗是由 S SH 技遗本身固有的均 TB S 9 两个母源性遗遗本 , 在胚胎遗育的特定遗期 一化作用定的决 。因此 ,低丰度 、差表异达的基起始表达 。其中 , G S 36 从桑椹胚期起始表达 , 因在神遗 胚后已遗遗不到遗遗遗物 , TB S 9 从尾芽期起始表 遗用 遗遗也容易克隆到 。遗是非常有意遗S SH 技达 ;是不存在母源性遗遗本的差表异达基因 。另一遗 的 ,因遗往往低丰度 、差表异达的基因在生命活遗中 其 中 的 在 胚 胎 遗 育 早 期 起 始 表 达 , : 有 起着重要作用 。 S SH 技遗已被遗用于越来越多的 TB S 39、 研究遗域 ,如我遗遗遗室已采用 S SH 技遗已分遗从而 ; 期 、囊胚期 、囊胚 期 起始 表达 TB S 3 TB S 58G S 30 G S 3 1 遗 从 受 精 4 0 m 、和分 0和TB S 4 4 遗遗卵母遗胞胞中遗定出一批与卵母遗胞成熟和分,[ 1 3 , 2 1 2 3 ] () 分遗从原遗胚期 、尾芽期起始表达 4 遗。裂相遗的基因 ,从被病毒感染的遗遗培遗遗 胞,[ 2 4 2 8 ] [ 2 9 ]中遗定出 一批 遗 遗干 遗素 系遗 基 因 , 遗 构文遗。但抑制性差减遗交技遗用于克隆遗物胚遗遗3 [ 1 4 ] 胎遗育中差表异达基因的遗道遗遗少 。 本究遗研果 ( ) 表明 ,抑制性差减遗交能遗有效地S SH 抑制性差减遗交 是近来建立的一遗遗,[ 2 0 2 3 用于克隆遗物胚胎遗育遗程中差表的异达基因 。以找差异表 达 基因 的十 分 有效 的方 法 α, 它是 以 抑制 PC R 遗基遗的消减遗交 。所遗抑制 2因遗遗 差减 效 率提 示 遗 差 减 遗 tu bu lin , 基遗P C R ,是交 , 利用非目遗序列两端的反向重遗序列在退火遗遗生 遗 2遗遗原遗期胚胎和尾芽期胚胎差表的异达基因均被 富8 柄遗 构,无法与引物配遗 ,从而遗遗性地抑制非 目遗序集了 2倍 。通遗斑点遗交遗得了 1 00 多个阳性列的遗增 。在用 S SH 技遗克隆差异表达基 因片克 隆 。遗 部 分 阳 性 克 隆 遗 行 R T2PC R 段的遗程中 ,由于遗生了均一化和富集化作用 , 虚 遗7 遗胚胎 遗 育遗 程中 呈 差或异 表达 的 比率 超遗 。0 % 使得 S SH 技遗具有明遗的遗遗 。用遗方法克隆差 异在所得到的性克阳隆中有一些是遗控胚胎遗育的重表达的基因 ,假阳性比率低 ,遗是因遗它的步两减 L IU J un e t a .l : S c re e n o f D iffe re n tia lly E xp re s se d G e ne s B e tw e e n 261G a s tru la R T 2P C R 发发部分 cDNA s 发 4在发发胚胎发育发程中的差异表 达 G S 1、G S 3 0、G S 3 1 和 G S 3 6 来自原遗期差 减 cDNA 文遗 α 其 余克隆来自尾芽期差减 cDNA 文遗 ,以 2tub u lin 基因做发 3 虚发 N o r th e rn 发交发发在发发遗照 。胚胎1: 未受精 ; 2: 受精 40 分遗 ; 3 :多胞期 ; 4 :桑椹胚 ; 5 :囊胚 ; 发育发段差异表达的 cDNA 6: 原 遗胚 ; 7 :神遗胚 ; 8 :尾芽期 ; 9 :肌肉效遗期 ; 1 0 :心跳克隆期 ;G S 1 , G S 3 0 , G S 3 1 和 G S 3 6 来自原遗期差减 cDNA 文遗 1 1 :; 12 :; M : DL2 0 0 0 DNA 出苗前期 出苗期 分子量遗准 ,其 余克隆来自尾芽期差减 cDNA 文遗 。 Sm a rt cDNA 用做遗。照 。 O 、G、T和 H 分遗代表遗遗成熟卵母遗胞 、原遗期 、尾芽F ig. 4 C o n f irm a t io n o f p a r t ia l d iffe re n t 期和ia l e xp re s s io n cDNA s d u r in g em b ry o g e Sm a rt cDNA s 心跳期 所在的泳道 。n e s is o f g ib e l c a rp b y R T 2P C RF ig. 3 C o n f irm a t io n o f s ta g e 2d iffe re n G S 1 , G S 3 0 , G S 31 a nd G S 3 6 cam e from th e G S su b t ia l e xp re s s io n cDNA s in em b ry o g e n e s tra c tive is o f g ib e l c a rp b y v ir tu a l N o r th e rn b lo αcDNA lib ra ry. 2tu bu lin w a s u se d a s co n tro l. Th e tso the rs cam e from th e TB S sub tra c tive cDNA lib ra ry. G S 1 , G S 3 0 , G S 3 1 a nd G S 3 6 cam e from th e G S su b 但者两的遗果是一致的 。遗一遗遗遗于确遗遗遗胚tra c tive cDNA lib ra ry. Sm a rt cDNA w a s u se d a s co n tro .l Th e o the rs c am e from TB S su b tra c tive cDNA lib ra ry. O 胎遗育遗程中差异表的基因达十分有用 。我遗可以 用 [ 1 5 , 1 6 ] Sm a rt cDNA 代替 RNA 做遗交 ,即虚用遗 N o rth2包, PO U 2 括 与 遗 遗 育 相 遗 要 基 因 [ 1 7 ][ 1 9 ] 的、e rn 遗交 替代 N o rthe rn 遗 交以 研究 基 因的 表MD K2 基因 ;与幼遗出壳相遗的孵化遗基因 ; 达 特 性 ,遗遗于究研象遗遗遗遗一年繁殖一次 、RNA 在胚胎遗育早期大量表达的脂蛋白 ,以及一些不知 功能的 、在胚胎遗育中差表的异达新基因 。不 易遗得的物遗特遗有用 。遗然 ,遗些差表异达基因 比遗 R T2PC R 和虚遗 N o rthe rn 遗交的遗果可 以的克隆 ,遗遗一步了解遗遗胚胎遗育的分子机制奠 定了遗遗 : 遗 同 一 个 克 隆 , 例 如 G S 1、G S 30、G S 基遗 。 31、 G S 36、TB S 9、TB S 30、TB S 39、TB S 44 和 TB S 5 8 ,遗 然 R T2PC R 和遗虚 N o rth e rn 遗交灵敏 ( ) ve lo pm e n ta l B io lo g y, 20 0 4 , 2 6 5 2 : 3 4 1 ,3 54.[ 1 1 ]( R e fe re n c e s 参考文献 GU I J ia n 2F a n g , Y I M e i2S he n g , e d s. D e ve lo pm e n ) :ta l B io lo 2g y. B e ijin g: S c ie nc e P re s s , 2 00 2 , 8 [ 1 ]Zho u L , G u i J F. Ka ryo typ ic d ive rs ity in po lyp lo idy ,15.g ib e l c a rp , C a ra s s iu s a u ra tu s g ib e lio B lo c h. G e ,,. . : , 20 0 桂建芳 易梅生 主遗遗育生物学北京 科学出版社 1 2 ][ ne tic a , 20 0 2 ,2 , [ 2 ]1 15 : 2 2 3 ,23 8 1 ,2.5.J IAN G Yi2G u i, L IAN G S hao 2C h a ng , C H EN B e n W U Q ing 2J ia n g , GU I J ia n 2F a ng , e d s. F ish G e n e 2D e , YU H ao 2X ia n g , S HAN S h i2X in , YAN G D e tic s a nd B re e d in g En g in e e rin g. S h a ng h a i: S h a n g [ 1 3 ]2Lo ng , L IN S u i2E n , SH EN G e n 2Q u a n. B io lo g ic a l ha i S c ie n tific a nd Te c h n ic a l P ub lishe rs , 1 99 9 , 41 ,e ffe c t o f h e te ro lo go u s sp e rm o n g yno g e ne tic o ffsp 62.ring in C a ra s s iu s a u ra tu s g ib e lio. A c ta H yd ro b io l S ,,. . : 吴清江 桂建芳 主遗遗遗遗遗育遗工程上海 上海科学[ 1 4 ]( ) in ic a , 19 8 3 , 8 1 : 1 ,1 3., 1 99 9 , 4 1 6 技遗出版社 ,蒋一 " ,梁遗昌 ,遗本德 ,遗豪祥 ,遗仕新 ,遗德遗 ,林遗恩 ,沈 根[ 3 ]2.泉. 异源精子在遗遗雌核遗育子代中的生物学效遗. 水生X ie J , W e n J J , C he n B , G u i J F. D iffe re n tia l g e ne e ( ) , 19 8 3 , 8 1 : 1 生物学集刊 ,xp re s2 s io n in fu lly2g row n o o cy te s b e tw e e n gyno [ 1 5 ]1 3.g e n e tic a nd go no c ho ris tic c ru c ia n c a rp. G e n e , 2 0 GU I J ia n 2F a n g , L IAN G S hao 2C h a n g , ZHU L a n 2F e 01 , 27 1 : 1 09 ,11 6.i, J IAN G Yi2G u .i D isco ve ry o f tw o d iffe re n t rep ro d S h i Y H , L iu J , X ia J H , G u i J F. S c re e n fo r s ta g e uc tive d e ve lop 2 m e n t m o de s o f th e e g g s o f th e a 2sp e c ific e xp re s s io n ge n e s b e tw e e n ta il bu d s ta g rtific ia l m u ltip le te trap lo id a llo g yno g e ne tic s ilve r c ru c e a n d h e a rtbe a t b e g inn ing s ta g e in em b ryo g e n e s ia n c a rp. C h in S c i B u ll, 1 9 92 , 37[ 4 ]is o f gyno ge n e tic s ilve r[ 1 6 ]( ) 11 : 10 3 0 ,1 03 ( ) c ru c ia n ca rp. C e ll R e s , 20 0 2 , 1 2 2 : 13 3 3.,1 4 2.桂建芳 ,梁遗昌 ,朱遗菲 ,蒋一 " . 人工遗合四倍体异育遗遗 卵B e ltin g H G , H a up tm a nn G , M e ye r D , A b d e lila h 2S e 子遗答父本遗精子和母本遗子遗两不同遗育方式的遗遗. 科学通遗 , 1 yfrie d S , C h itn is A , E sc h b a c h C , So ll I, Th is se C , Th ( ) 9 92 , 37 1 1 : 10 3 0 ,1 03 3.is se B , A rtin ge r K B , L u n d e K, D rie ve r W. S p ie l o hn e [ 1 7 ]GU I J ia n 2F a n g. R e tro sp e c ts a nd p ro sp e c ts o f s tu g re n z e n /p o u2 is re 2 q u ire d d u rin g e s ta b lishm e n t o [ 5 ]d ie s o n th e m e c h a n ism o f na tu ra l g yno g e ne s is in f th e ze b ra fish m idb ra in 2h ind 2( ) s ilve r c ruc ia n c a rp C a ra s s iu s a u ra tu s g ibe lio . S c b ra in bo u n d a ry o rg a n iz e r. D e ve lopm e n t, 2 0 0 1 , 1 28 [ 1 8 ]i Fo u n d C h in a , 19 9 7 ,: 4 16 5 ,1 1: 1 1 ,1 4 1 76.[ 6 ]6. B u rg e s s S , R e im G , C h e n W , Ho p k in s N , B ra n d M. 桂建芳. 遗遗天然雌核遗育机理研究的回遗与展望. 中国科 学 ( ) Th e ze 2 b ra fish sp ie l2o h n e 2g re n z e n sp g g e n e e ( ) 基金 , 19 9 7 , 1 1 1 : 1 1 ,1 6. n co d e s th e PO U dom a in p ro te in re la te d to m am m a lia Zho u L , W a n g Y, G u i J F. G e n e tic e v id e n c e fo r go no [ 1 9 ]n O c t4 a n d is e s se n tia l fo r fo rm a tio n o f m id b ra in a n c ho ris2 tic rep ro d u c tio n in g yno g e n e tic s ilve r c ru c ia d h in db ra in , a nd fo r p re 2ga s tru 2( ) n c a rp C a ra s2 s iu s a u ra tu s g ib e lio B lo c h a s re ve [ 7 ] la m o rp ho g e n e s is. D e ve lo pm e n t, 2 0 02 , 12 9 : 90 a le d b y RA PD a s sa y s.5 ,9 1 6.J M o l E vo l, 20 0 0 , 5 1: 4 9 8 ,W in k le r C , M oo n R T. Ze b ra fish m dk2 , a no ve l se c 5 0 6.[ 8 ]re te d m idk ine , p a rtic ip a te s in po s te rio r n e u ro g e ne s Zho u L , W a n g Y, G u i J F. A n a ly s is o f ge n e tic h e te ro is. D e v B io l,ge n e ity am o n g five g yno g e ne tic c lo n e s o f s ilve r c ru c [ 2 0 ]2 0 01 , 22 9 : 1 02 ,1 ia n ca rp , C a r2 a s s iu s a u ra tu s g ib e lio B lo ch b a se d o 1 8.n d e te c tio n o f RA PD m o le c u la r m a rke rs. C y to g e ne [ 9 ]Ya sum a su S , Yam a da K, A ka sa ka K, M itsu n a g a K, Iu c tic s a n d C e ll G e n e tic s , 20 0 0 ,h i I, S h im a d a H , Yam a g am i K. Iso la tio n o f cDNA s fo 8 8: 1 3 3 ,1 r LC E a nd HC E , tw o co n s titue n t p ro te a se s o f th e h a 39.[ 1 0 ]tc h ing e n zym e o f O ryz ia s la tip e s , a n d co n cu rre n t e Zho u L , W a n g Y, G u i J F. M o le c u la r a na ly s is o f s [ 2 1 ]xp re s s io n o f th e ir m RNA s( ilve r c ru 2 c ia n ca rp C a ra s s iu s a u ra tu s g ib e lio B d u rin g de ve lo pm e n t. D e v B io l, 1 99 2 , 15 3 : 25 ) lo c h c lo ne s by SCAR m a rke rs. A q u a c u ltu re , 2 0 01 , L IU J un e t a .l : S c re e n o f D iffe re n tia lly E xp re s se d G e ne s B e tw e e n 263G a s tru la Q Y, G u i J F. M o le c u la r c lo n in g a n d c ha ra c te riz a m a in s in fish o o g e n e s is. S c ie n c e in C h in a , 20 0 1 , 4 4 : 5 4 1 ,( ) tio n o f c ru c ia n ca rp C a ra s s iu s a u ra tu s L. in te 5 53.rfe ro n re g u la to r[ 2 2 ]W e n J J , X ie J , G u i J F. cDNA c lo n ing a n d ch a ra c te fa c to r 7. F ish a nd S h e llfish Im m u no lo gy, 20 0 3 , 1 5: riz a tio n o f a no ve l SN X ge n e d iffe re n tia lly e xp re s se d 4 53 ,[ 2 7 ]4 6 in p re v ite llo 2 g e n ic oo c y te s o f g ib e l c a rp. C om p a ra 6.( () ) tive B io c hem is try a nd P h y s io lo g y B , 2 00 3 , 13 6 3 [ 2 3 ]Zha n g Y B , G u i J F. M o le c u la r c ha ra c te riza tio n a : 4 5 1 ,4 61.nd IFN s ig n a l p a thw a y a n a ly s is o f C a ra s s iu s a u ra X ie J , W e n J J , Ya ng Z A , W a ng H Y, G u i J F. C yc lin tu s C a S TA T1 ide n tifie d from the c u ltu re d c e lls in re A2 is d iffe re n tia lly e xp re s se d du ring o o c y te m a tu ra [ 2 8 ]sp o n se to v iru s in fe c 2 tio n. D e ve lo pm e n ta l a n d C tio n b e tw e e n g yno ge n e tic s ilve r c ru c ia n c a rp a nd [ 2 4 ]om p a ra tive Im m u no lo gy, 20 0 4 ,go no c ho ris tic co lo r2 8 : 21 1 ,2 2 ( ) c ru c ia n c a rp. J Exp Zo o l, 2 00 3 , 29 5 1 : 1 [ 2 9 ]7.,1 6.Zh a ng Y B , G u i J F. Id e n tific a tio n a nd e xp re s s io n a ZHAN G Yi2B ing , SH I Yao 2H u a , GU I J ia n 2F a n g. C o n a ly s is o f tw o IFN 2ind u c ib le g e n e s in c ru c ia n c a rp n s tru c 2 ( ) . [ 2 5 ]C a ra s s iu s a u 2 ra tu s L. G e ne , 2 00 4 , 3 2 5 : 4 3 ,5 tio n o f a n tiv ira l su b tra c tive cDNA lib ra ry o f c u ltu re 1.( ) d fish c e lls. A c ta H yd ro b io l S in ic a , 2 0 03 , 27 1 : 1 XU D e 2Q ua n , ZHAN G Yi2B in g , X IO N G Yu a n 2Zh 13 ,11 8. 遗遗兵 ,石耀遗 ,桂建芳. 遗遗培遗遗胞抗病毒差减 u , GU I J ia n 2F a n g , J IAN G S i2W e n , SU Yu 2Ho n g. ( ) cDNA 文 遗的构建. 水生生物学遗 , 2 0 03 , 2 7 1 : 1 1 3 ,1 [ 2 6 ]Co n s truc tio n o f fo rw a rd a nd re ve rse su b tra c te d 18. cDNA lib ra rie s b e tw e e n m u sc le tis su e o f m e ish a n a 《发发学发 》发发第三届国家期刊发 本遗了新遗[] ,刊遗 遗一步推遗期刊出版事遗繁遗遗展 出版遗署遗遗了第三届国家期刊遗遗遗活遗 。遗遗大会于 20 05 年 2 月 2 8 日在北京隆重遗行 ,中央宣遗部出版局局遗遗小影主持大会 ,科技部副部 遗刘燕遗遗遗 ,新遗出版遗署署遗石宗源作了遗面遗遗 。国家新遗出版遗署副署遗石 峰宣遗“遗于表彰第 三届国家期刊遗遗遗期刊的决定 ”和遗遗期刊名遗 。《遗遗学遗 》遗遗第三届国家期刊遗提名遗 ,遗遗部主 任李遗武加了参遗遗大会 ,遗回遗状和遗杯 。 我国有科技期刊 4 90 0 遗 ,有 491 刊角逐第三届国家期刊遗 ,中 180 技期刊遗遗 ,余共遗科技期其遗科《遗遗遗 学》排名第 3 2 位 ,遗“国家期刊遗提名遗 ”第二名 。同遗遗得提名遗的生物 、遗林 、医学遗期刊有 :林 遗科学 、发发学发 、生遗学遗 、中国遗遗科学 、第二遗大医学学遗 、作物学遗 、中遗心血管病遗志 、植物 () 学遗 英文版 、中草遗 、遗床皮遗科遗志 、中遗用国内科遗志 、中遗遗国医科技 、江遗遗遗科学 、中国血吸虫病防治 遗志等 。 遗得本届“国家期刊遗 ”的生物 、遗林 、医学遗科技期刊有 :中遗医学遗志 、中遗内科遗志 、中国危重病急 救医学 、园遗遗学 、中遗遗国学遗志 、遗江蔬菜 、遗村百事通 ; 遗本届“国家期刊遗百遗重点科技期刊 ”的有 : 北 京林遗大遗学学 、中遗耳鼻咽喉科遗志 、中遗遗遗科遗志 、中国医学科院学学遗 、中遗放射学遗志 、第 () 三遗 医大学学遗 、遗南遗遗大学学 、遗浙江大学学遗 遗遗与生命科学版 、中遗病理学遗志 、中遗外科遗志 、生理学 () 遗 、世界胃遗病学遗志 英文版 、遗遗遗学 、遗床遗遗遗志 、中国遗理学通遗 、湖北遗遗科学 、中国中遗遗志 、遗床耳鼻咽喉科遗志 、山遗遗遗科学 、中国南方果遗 、中国遗生育划学遗志等 。