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肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性

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肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性 中国组织工程研究 第20卷 第41期 2016–10–07出版 www.CRTER.org Chinese Journal of Tissue Engineering Research October 7, 2016 Vol.20, No.41 ?研究原著? 肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性 朱永生,邓青富,利 军(泸州医学院附属医院泌尿外科~四川省泸州市 646000) 引用本文:朱永生,邓青富,利军. 肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生...
肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性
肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性 中国组织工程研究 第20卷 第41期 2016–10–07出版 www.CRTER.org Chinese Journal of Tissue Engineering Research October 7, 2016 Vol.20, No.41 ?研究原著? 肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性 朱永生,邓青富,利 军(泸州医学院附属医院泌尿外科~四川省泸州市 646000) 引用本文:朱永生,邓青富,利军. 肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性[J].中国组织工程研究,2016,20(41):6197-6202. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.41.018 ORCID: 0000-0001-8271-5664(朱永生) 文章快速阅读: 朱永生~男~1979年生~肾脂肪囊来源与腹股沟来源脂肪干细胞:体外增殖和向软骨诱导分化的能力 四川省荣县人~汉族~主 治医师~主要从事泌尿方 面的研究。 肾脂肪囊内脂肪组织 (1)细胞增殖 (2)软骨诱导分化能力 中图分类号:R394.2 各项指标均无文献标识码:B (3)Collagen?表达 明显差异 文章编号:2095-4344 (4)Collagen?、Aggrecan mRNA 脂肪干细胞 (2016)41-06197-06 表达 腹股沟区脂肪组织 稿件接受:2016-08-27 文题释义: ?型胶原:主要分布在透明软骨、玻璃体、髓核、胚胎角膜、视网神经膜,由于?型胶原中富含羟赖氨 酸,并且羟赖氨酸的羟基几乎全部和糖结合,因而糖化率高,含糖量约为10%。?型胶原是软骨和玻 璃液中的主要胶原,是构成软骨基质的主要成分之一,能够促进软骨细胞的分化,对类风湿性关节炎有 特异性的治疗作用。 聚集蛋白聚糖(aggrecan):最初从软骨组织分离得到的一种蛋白聚糖,其核心蛋白质由多种结构域组成, 并接有大约100条硫酸软骨素链,在软骨细胞合成的细胞外基质中聚集蛋白聚糖所占的比例大于其他 蛋白聚糖。 摘要 背景:脂肪组织来源丰富,不同部位脂肪组织分离培养的脂肪干细胞在体外生物学特性上是否存在差异, 目前相关研究较少。 目的:观察肾脂肪囊来源与腹股沟来源脂肪干细胞的体外增殖和成软骨诱导分化能力。 方法:收集大鼠肾脂肪囊来源与腹股沟区来源组织进行脂肪干细胞培养与鉴定,MTT法检测两组细胞 的体外增殖能力。取第3代细胞进行软骨定向诱导2周,免疫荧光检测诱导后细胞Collagen?表达, RT-PCR检测两组细胞诱导后Aggrecan、Collagen ?mRNA表达水平。 结果与结论:?肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞经原代与传代培养,形态基本一致;?经流式 细胞仪检测,不同来源脂肪干细胞的CD44阳性率均达到95%以上;?两组细胞的体外生长曲线均呈 “S”型;?诱导后两组细胞均表现出Collagen?阳性表达;?两组细胞的Aggrecan、Collagen ? mRNA表达水平比较差异无显著性意义(P > 0.05);?结果显示,肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干 细胞均在体外生长稳定,迅速增殖,经定向诱导向软骨细胞发生分化,二者无明显区别。 关键词: 干细胞;培养;脂肪组织;脂肪干细胞;肾脂肪囊;腹股沟;体外培养;细胞增殖;软骨细胞;细胞分化; 定向诱导 主题词: 干细胞;脂肪组织;肾;腹股沟;组织工程 ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 6197 www.CRTER.org . 朱永生,等肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性 Zhu Yong-sheng, Attending Biological characteristics of adipose-derived stem cells derived from renal fat physician, Department of capsule and groin in vitro Urinary Surgery, Affiliated Hospital of Southwest Zhu Yong-sheng, Deng Qing-fu, Li Jun (Department of Urinary Surgery, Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China) 646000, Sichuan Province, China Abstract BACKGROUND: Adipose-derived stem cells have different sources, but it is unclear whether these cells from different sources have difference in their biological properties. OBJECTIVE: To detect the in vitro proliferation and chondrogenic differentiation of adipose-derived stem cells derived from renal fat capsule and groin. METHODS: Adipose-derived stem cells from renal fat capsule and groin of rats were isolated, cultured and identified. MTT assay was used to detect in vitro proliferation ability of these cells. Passage 3 cells were under chondrogenic induction for 2 weeks. After induction, the expression of type II collagen was observed by immunofluorescence detection, and RT-PCR was employed to detect the expression levels of Aggrecan and type II collagen mRNA in the two groups. RESULTS AND CONCLUSION: After primary culture and passage, adipose-derived stem cells from the renal fat capsule and groin of rats exhibited similar morphology, and over 95% of cells expressed CD44 in the two groups. Adipose-derived stem cells from two sources showed an S-shaped growth curve in vitro and were positive for type II collagen. After RT-PCR detection, the expression levels of Aggrecan and type II collagen mRNA had no difference in adipose-derived stem cells from renal fat capsule and groin (P > 0.05). Experimental results show that adipose-derived stem cells from both renal fat capsule and groin exhibit stable growth, rapid proliferation and chondrogenic differentiation under orient induction in vitro, indicating there is no difference between these cells from two sources. Subject headings: Stem Cells; Adipose Tissue; Kidney; Groin; Tissue Engineering Cite this article: Zhu YS, Deng QF, Li J. Biological characteristics of adipose-derived stem cells derived from renal fat capsule and groin in vitro. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(41):6197-6202. 0 引言 Introduction 1.2 时间及地点 实验于2015年8至12月在泸州医学 脂肪干细胞是从脂肪组织中分离获得的具有自我院附属医院实验室完成。 更新及多向分化潜能的一种成体干细胞,其具有来源丰1.3 材料 富、取材方便、细胞贴壁能力强、易于体外培养等优点,1.3.1 实验动物 纳入雄性SD大鼠20只,8周龄,体质 已成为组织工程种子细胞的研究热点。以往的研究证量300 g左右,健康状况良好,由北京金牧阳实验动物 实,在体外特定条件下脂肪干细胞可以向骨细胞、软骨养殖有限责任公司提供,许可证号SYXK(京)2015- [1]细胞、脂肪细胞、神经细胞等方向分化,还可以分泌0008。研究相关均符合动物伦理学要求。 多种细胞生长因子,在组织修复再生中发挥重要作用。 1.3.2 主要试剂与仪器 水合氯醛(上海斯丹赛(干细 肾脂肪囊包绕在肾和肾上腺周围,并在肾门处与肾胞)生物技术有限公司);PBS (上海翊圣生物科技有限公 窦内的脂肪相续,由大量脂肪组织构成,其形成过程与司);?型胶原酶(美国Worthington公司);DMEM培养 肾脏发育过程以及发育来源具有一定的近似性。关于不液(上海源培生物科技股份有限公司);胎牛血清、山羊 同部位脂肪组织分离培养的脂肪干细胞在体外生物学血清(上海今迈生物科技有限公司);胰蛋白酶(上海弘顺 [2-3]特性上是否存在差异,目前相关的研究和报道较少。生物科技有限公司);MTT(北京恒奥生物科技有限公 为此,实验收集大鼠肾脂肪囊来源与腹股沟来源组织进司);二甲基亚砜(生兴生物技术(南京)有限公司);转化 行脂肪干细胞培养与鉴定,观察细胞体外增殖能力及成生长因子β1(美国Beckman Coulter公司);维生素C(海 软骨诱导分化能力的差异,分析不同来源脂肪干细胞的德创业(北京)生物科技有限公司);地塞米松(美国 体外生物学性能,以期为进一步利用脂肪源性干细胞进PeproTech公司);多聚甲醛(上海威奥生物科技有限公 行相关研究提供基础依据。 司);Triton X-100(南京海克尔生物科技有限公司); Collagen ?单克隆抗体(北京博润莱特科技有限公司); 1 材料和方法 Materials and methods 山羊抗小鼠二抗(北京百奥莱博科技有限公司);酶联免 1.1 体外观察性实验。 疫检测仪(上海揽宝仪器设备有限公司);离心机(美国 P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org 6198 . www.CRTER.org 朱永生,等肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性 Falcon公司);CO培养箱(德国Forma公司);倒置显微1.4.5 RT-PCR检测Collagen?、Aggrecan mRNA表2 [13-15]镜(日本Olympus公司);流式细胞仪(瑞典Mettler Toledo 诱导2周后,收集细胞,Trizol试剂进行细胞裂达 公司)。 解,提取细胞总RNA,用RT试剂盒将RNA反转录为1.4 实验方法 cDNA,最后进行PCR扩增,PCR产物经电泳、DNA吸 [4-5]1.4.1 不同来源脂肪干细胞分离与培养 腹腔注射光度扫描检测,以目的基因与内参基因mRNA比值表示 目的基因表达量。 10%水合氯醛麻醉处死大鼠,无菌条件下获取肾脂肪囊 内脂肪组织与腹股沟区脂肪组织,PBS彻底冲洗血细胞1.5 主要观察指标 ?两组细胞的体外增殖能力;?及组织碎屑,剔除肉眼可见的血管和筋膜,用眼科剪剪两组细胞成软骨诱导后免疫荧光鉴定结果;?两组细胞 成软骨诱导后Collagen?阳性表达;?两组细胞成软骨碎为糊状,添加0.1%?型胶原酶在37 ?水浴箱中消化 诱导后Aggrecan、Collagen ? mRNA表达水平。 60 min,加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养 液终止消化,100目筛网过滤,在离心机中以1 000 r/min1.6 统计学分析 使用SPSS 18.0软件进行统计学分 析,组间比较予以t 检验,P < 0.05为差异有显著性意离心5 min,去掉上清液及油脂后用DMEM培养液重悬 义。 细胞重新接种在培养瓶中,置于37 ?,体积分数为 5%CO培养箱中培养48 h,大部分细胞贴壁,吸弃培养 2 液,PBS洗去红细胞及杂质,继续加入DMEM培养液培2 结果 Results 2.1 肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞形态 养,每3 d换液1次,当细胞生长达80%左右融合时进行 传代培养,收集第3代细胞流式细胞仪检测细胞表面特培养1 d,两种细胞均开始贴壁,培养7 d,细胞均呈星异性抗原。 形或多角形。传代后,细胞呈漩涡样生长,呈长梭形, [6] 两种细胞形态无明显区别,见图1。 1.4.2 不同来源脂肪干细胞增殖情况 收集不同来源 2.2 肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞鉴定 第3代脂肪干细胞,胰蛋白酶消化后调整细胞悬液浓度 7-1为1×10 L,接种在96孔培养板中,置于37 ?,体积经流式细胞仪检测,不同来源干细胞的CD44阳性率均分数为5%CO达到95%以上,提示为实验所需脂肪干细胞,见图2。 培养箱中培养,每日取3孔添加20 μL 2 2.3 肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞增殖情MTT,继续置于培养箱中培养4 h,去掉上清液,添加 100 μL二甲基亚砜,充分振荡溶解后用酶联免疫检测仪况 两组细胞生长曲线均呈“S”型,培养一两天处于检测各组在490 nm波长处的吸光度值,连续观察7 d,潜伏期,培养3 d后进入对数期,并于培养6 d达到最大描绘两组细胞的体外生长曲线。 值,之后进入平台期,曲线逐渐下降,见图3。 [7-9]1.4.3 不同来源脂肪干细胞向软骨方向定向诱导 收2.4 肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞成软骨 7-1集不同来源第3代脂肪干细胞,调整细胞浓度为1×10 L,诱导结果 诱导后2周,免疫荧光鉴定两组细胞均呈现待细胞融合达60%左右,加入软骨定向诱导DMEM培出Collagen?阳性表达,可见绿色荧光颗粒分布于胞浆养液(含胎牛血清、转化生长因子β1、维生素C、地塞内,见图4。 米松)进行成软骨诱导培养,另设置一对照组,不加入经RT-PCR检测,诱导后两组细胞的Aggrecan、成软骨诱导试剂培养。每3 d进行1次半量换液,连续Collagen ?mRNA表达水平经比较差异无显著性意义诱导2周。 (P > 0.05),见表1,图5。 1.4.4 免疫荧光检测诱导后细胞Collagen?表达情 [10-12]况 诱导2周后,取2组细胞进行细胞爬片,PBS 表1 肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞Aggrecan、_洗涤后吸干表面液体,多聚甲醛固定10 min,添加Triton Collagen ?mRNA表达 (x?s) Table 1 The expression of Aggrecan and type II collagen X-100反应15 min,PBS洗涤3次,吸干表面液体,添加 mRNA in adipose-derived stem cells from the renal fat 山羊血清进行封闭,置于室温条件下反应20 min后滤纸 capsule and groin 吸干,添加Collagen ?单克隆抗体,置于4 ?条件下孵 组别 Aggrecan Collagen ? 育过夜,弃去一抗,PBS洗涤3次,添加山羊抗小鼠二 肾脂肪囊来源组 0.536 7?0.012 5 0.682 8?0.118 5 抗,置于室温条件下孵育2 h,弃去二抗,PBS洗涤3次, 腹股沟区来源组 0.521 5?0.013 4 0.683 1?0.112 5 吸干表面液体,置于荧光显微镜下观察。 ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 6199 www.CRTER.org . 朱永生,等肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性 A B 图1 肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞培养结果(×200) Figure 1 Culture of adipose-derived stem cells from the renal fat capsule and groin (×200) 图注:图中A,C为肾脂肪囊来源脂肪干细胞;B,D为腹股沟区来源脂肪干细胞。 A B 肾脂肪囊来源脂肪干细胞 腹股沟区来源脂肪干细胞 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 吸光度值 0.20 0.15 0.10 图2 肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞流式细胞仪鉴定0.05 结果 0 1 d 2 d 3 d 4 d 5 d 6 d 7 d Figure 2 Identification of adipose-derived stem cells from the renal fat capsule and groin by flow cytometry 图3 肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞体外生长曲线 图注:图中A为肾脂肪囊来源脂肪干细胞;B为腹股沟区来源脂Figure 3 The growth curves of adipose-derived stem cells 肪干细胞。 from the renal fat capsule and groin Aggrecan 0.8 Collagen ? 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 mRNA相对表达 0.2 0.1 图4 肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞Collagen?免疫0 荧光检测结果(×200) 肾脂肪囊来源组 腹股沟区来源组 Figure 4 Immunofluorescence assay of type II collagen II in 图5 肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞Aggrecan、adipose-derived stem cells from the renal fat capsule and groin Collagen ?mRNA表达 (×200) Figure 5 The expression of Aggrecan and type II collagen 图注:图中A为肾脂肪囊来源脂肪干细胞;B为腹股沟区来源脂mRNA in adipose-derived stem cells from the renal fat capsule 肪干细胞。两组细胞均呈现出Collagen?阳性表达,均可观察到and groin 胞浆内绿色荧光颗粒(箭头)分布。 [26-29][30]3 讨论 Discussion 。以往Lee等还通过研究组织工学种子细胞之一 干细胞是一类多潜能细胞,具有自我更新以及多向报道,在增殖能力方面,脂肪干细胞明显优于骨髓间充 [31]分化能力。在一定条件下,干细胞可以定向分化为人们质干细胞,具有更高的应用价值。Kim等也通过研究 [16-18]所需的不同类型组织细胞。2001年,Zuk等学者指出,将脂肪干细胞作为基因治疗的靶细胞,可以发挥从脂肪组织中分离获得一种特殊的成体干细胞,此类干出十分理想的抗氧化和抗炎等效果,是一种重要的干细细胞具有一定的多分化潜能。自此,脂肪干细胞开始得胞移植种子细胞。脂肪干细胞可以来源于不同的脂肪组 [32]到人们的广泛关注。通过大量的分析研究也发现,脂肪织,通过对不同来源脂肪干细胞增殖、分化能力的分 [19-25]干细胞可以分化为软骨细胞等多种类型的细胞。脂析,可以为临床不同疾病的治疗寻找更加准确的细胞来肪干细胞具有易于获得和纯度较高等特点,成为重要的源。 P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org 6200 . www.CRTER.org 朱永生,等肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性 以往有研究证实,人皮下脂肪和网膜脂肪分离的脂文章版权:文章出版前杂志已与全体作者授权人签署 肪干细胞增殖能力相似,皮下脂肪干细胞诱导分化能力了版权相关。 [33]更强。但是,关于肾脂肪囊内脂肪干细胞的相关研究, 4 参考文献 References 相关的报道较少。实验对肾脂肪囊来源与腹股沟区来源 [1] 张慧,郑红光,张德伟,等.雌激素影响冻存肾脂肪囊来源脂的脂肪干细胞进行培养和诱导分化,并分析其生物性肪间充质干细胞的成脂分化[J].中国组织工程研究,2013, 能。两组细胞形态基本一致,CD44阳性率均达到95%17(27):4998-5004. 以上,细胞曲线均呈“S”型。上述结果表明,肾脂肪[2] 常春娟,贾赤宇,胡永亮,等.大鼠肾脂肪囊来源干细胞修复 囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞均具有良好的体外深??烫伤创面的实验研究[C].中国康复医学会修复重建 外科专业委员会第19次学术交流会暨中国医师协会烧伤增殖能力。脂肪干细胞可以分化为不同的组织细胞,其 [34]科医师分会2012年年会集,2012:357. 中,软骨细胞是一种重要的类型。 [3] 常春娟,贾赤宇,田甜,等.大鼠肾脂肪囊来源干细胞修复深人的软骨没有血液供应和软骨组织缺乏软骨母细??烫伤创面的实验研究[C].第八届全国创伤修复(愈合) 胞,所以关节炎或损伤的软骨部位不能治愈。干细胞移与组织再生学术交流会论文集,2012:190. 植治疗退行性关节炎所导致的软骨损伤等疾病,可以有[4] 訾利影,郑红光,张德伟,等.氯甲基苯甲酰胺标记大鼠肾脂 [35-38]肪囊来源脂肪间充质干细胞的可行性[J].中国组织工程效促进软骨再生。实验选择肾脂肪囊来源与腹股沟 研究,2012,16(19):3520-3524. 区来源脂肪干细胞进行软骨定向诱导,并观察其分化结[5] 付勤,王勇,于冬冬,等.外源性TGF-β1及IGF-1诱导大鼠脂果。免疫荧光检测两组细胞均呈现出Collagen?阳性表肪干细胞向软骨细胞分化的实验研究[J].中国骨质疏松 达,提示脂肪干细胞均向软骨细胞发生分化。RT-PCR杂志,2007,13(12):848-853. [6] 王勇.外源性TGF-β1及IGF-1诱导大鼠脂肪干细胞向软检测还发现,诱导后两组细胞的Aggrecan、Collagen ? 骨细胞分化的实验研究[D].沈阳:中国医科大学,2008. mRNA表达水平均显著高于空白对照组,且两组之间经[7] 柴仪.BMP-9通过BMP信号通路诱导鼠脂肪源性干细胞比较差异无显著性意义(P > 0.05)。上述结果表明,不分化为成骨细胞及经皮椎体后凸成形术治疗高龄骨质疏[39-40]同来源脂肪干细胞均可以向软骨细胞发生分化。 松性椎体压缩骨折及并发症的防治[D].石家庄:河北医科 综上所述,实验初步对肾脂肪囊来源与腹股沟区来大学,2013. [8] 吴畏,郑红光,张德伟,等.肾脂肪囊来源脂肪千细胞的体外源组织进行培养,均可获得脂肪干细胞,并经定向诱导 培养及其生物学特性的研究[J].细胞与分子免疫学杂志, 能够向软骨细胞发生分化。但受研究时间的限制,关于2010,26(11):1078-1081. 向其他组织细胞分化方面的差异等问题,还有待在今后[9] Kølle SF, Fischer-Nielsen A, Mathiasen AB, et al. 予以进一步分析。 Enrichment of autologous fat grafts with ex-vivo expanded adipose tissue-derived stem cells for graft survival: a randomised placebo-controlled trial. Lancet. 作者贡献:实验设计、实施、评估为朱永生~邓青富~ 2013;382(9898):1113-1120. 利军。 [10] 赵建辉,李龙,梁丽华,等.人与家兔脂肪来源干细胞体外培利益冲突:所有作者共同认可文章内容不涉及相关利养特性的比较[J].中国组织工程研究,2012,16(14):2540- 益冲突。 2544. [11] Koh KS, Oh TS, Kim H, et al. Clinical application of 伦理问题:实验过程中对动物的处置符合2009 年 human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells 《Ethical issues in animal experimentation》相关动物伦 in progressive hemifacial atrophy (Parry-Romberg 理学的条例。 disease) with microfat grafting techniques using 文章查重:文章出版前已经过CNKI反剽窃文献检测3-dimensional computed tomography and 3-dimensional 系统进行3次查重。 camera. nn Plast Surg. 2012;69(3): 331-337. [12] 江波,廖毅,童庭辉,等.脂肪来源干细胞诱导表皮细胞化的文章外审:文章经国内小同行外审专家双盲外审~符 研究现状与进展[J].中国组织工程研究与临床康复,2011, 合本刊发稿宗旨。 15(27):5104-5107. 作者声明:第一作者对研究和撰写的论文中出现的不[13] Han DS, Chang HK, Kim KR, et al. Consideration of 端行为承担责任。论文中涉及的原始图片、数据(包括计算bone regeneration effect of stem cells: comparison of 机数据库)记录及样本已按照有关规定保存、分享和销毁~bone regeneration between bone marrow stem cells and adipose-derived stem cells. J Craniofac Surg. 可接受核查。 2014;25(1):196-201. ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 6201 www.CRTER.org . 朱永生,等肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性 [14] 李力群,高建华,鲁峰,等.人脂肪来源干细胞与?型胶原支[27] Marappagounder D, Somasundaram I, Dorairaj S, et al. 架体外复合培养的研究[J].中华实验外科杂志,2012, Differentiation of mesenchymal stem cells derived from 29(3):421-423. human bone marrow and subcutaneous adipose tissue [15] Derby BM, Dai H, Reichensperger J, et al. into pancreatic islet-like clusters in vitro. Cell Mol Biol Adipose-derived stem cell to epithelial stem cell Lett. 2013;18(1):75-88. transdifferentiation: a mechanism to potentially [28] 安荣泽,赵俊延,王兆杰,等.脂肪干细胞与骨髓间充质干细 improve understanding of fat grafting's impact on skin 胞成软骨能力的比较[J].中国组织工程研究,2013,17(32): rejuvenation.Aesthet Surg J. 2014;34(1):142-153. 5793-5798. [16] 杨杰,郭能强,孙家明,等.体外诱导乳房内脂肪来源干细胞[29] 王和庚,黎洪棉,崔世恩,等.带血管肌筋膜包埋脂肪干细胞 向上皮细胞分化的实验研究[J].中华整形外科杂志,2014, 载体复合物构建血管化组织工程脂肪[J].中国组织工程 30(3):209-214. 研究,2013,17(18):124-132. [17] Aarum J, Sandberg K, Haeberlein SL, et al. 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