高效液相色谱法测定肝速康胶囊中齐墩果酸含量

高效液相色谱法测定肝速康胶囊中齐墩果酸含量 高效液相色谱法测定肝速康胶囊中齐墩果 酸含量 2008年第17卷第8期 高效液相色谱法测定肝速康胶囊中齐墩果酸含量 药物鉴定 姚惠平,杜慧 (湖南省常德市药品检验所,湖南常德415000) 摘要:目的建立肝速康胶囊中齐墩果酸含量的测定方法.方法采用高效液相色谱(HPLC)法, 色谱柱为cts枉(200mm×4.6mm,5txm), 流动相为乙腈一0.1%磷酸溶液(67:33),检测波长为210nm.结果齐墩果酸进样量在 0.82—4.92~g/mL范围内与峰面积线性关系良 好,平均加样回收率为98.0%,RSD为0.58%(n=6).结论HPLC法稳定可靠,可用于肝速康胶囊 的质量控制. 关键词:肝速康胶囊;齐墩果酸;高效液相色谱法;含量测定 中图分类号:11284.1;11286.0文献标识码:A文章编号:1006—4931(2008)08—0041一O1 肝速康胶囊是由齐墩果酸粗品和云芝多糖2味药物组成的复 方制剂,为《卫生部药品?中药成方制剂(第十三册)》收载品 种,lJ缶床上用于急,慢性及迁延性肝炎.原标准采用紫外分光光度 法对齐墩果酸含量进行测定…,但标准曲线制作过程烦琐,水浴温 度控制,降温速度对浓度的影响,高氯酸性质的不稳定等使样品含 量测定结果重现性差】.笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定主 要活性成分齐墩果酸含量,现报道如下. 1仪器与试药 Waters515HPLCPump并联双泵,Waters2487型双波长紫外 检测器,HS色谱数据工作站.齐墩果酸对照品(中国药品生物制品 检定所,批号为110709—200304);肝速康胶囊(样品A,四川省仁德 制药有限公司,批号为050501;样品B,海口奇力制药有限公司,批 号为051201;样品c,哈尔滨松鹤制药有限公司,批号为061007); 阴性对照品(自制);试剂(分析纯或色谱纯). 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:cts柱(200mm×4.6mm,5txm);流动相:乙腈一 0.1%磷酸溶液(67:33);溶剂:75%乙醇;检测波长:210nm;流 速:1.0mL/min;柱温:30?. 2.2溶液制备 取本品适量,研细,取细粉约0.23g,精密称定,置具塞锥形瓶 中,精密加入75%乙醇50mL,称定质量,超声处理30min,放冷, 用75%乙醇补足减失的质量,滤过,弃去粗滤液,续滤液用微孑L (0.45txm)滤膜滤过,得供试品溶液.取齐墩果酸对照品,精密称 定,用75%乙醇溶解制成每1mL含齐墩果酸0.4104mg的溶液, 得对照品溶液. 2,3测定法 取对照品溶液,供试品溶液各20L,注入液相色谱仪测定.色 谱图见图1. U/mVU/mVU/mV ABC =:=:=t/mln 20 A.供试品溶液B.对照品溶液C.阴性对照品溶液 图1高效液相色谱图 2.4方法学考察 测定波长确定:取对照品溶液,测定紫外吸收光谱.结果对照 品在210nm波长处有最大吸收,故选210nm波长为检测波长. 标准曲线制备:精密吸取齐墩果酸对照品溶液(质量浓度为 0.4104mg/mL)1,2,3,4,5,6mL,分别置10mL量瓶中,加75%乙 醇稀释至刻度,摇匀,进样20L,记录色谱图,测定其峰面积.以峰 中国药业ChinaPharmaceuticals 面积值对进样量进行线性回归,得标准曲线方程y=88387.957+ 21604.58X(r=0.9996).结果表明,齐墩果酸进样量在0.82, 4.92g范围内与峰面积值有良好的线性关系. 阴性干扰试验:取缺齐墩果酸的阴性对照品,按2.2项下的供 试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液,并进行测定.结果在齐墩 果酸出峰位置上无干扰峰(图1). 精密度试验:精密吸取质量浓度为0.4104mg/mL的齐墩果 酸对照品溶液20,重复进样5次.结果齐墩果酸峰面积值的 RSD为0.62%,表明仪器精密度良好. 稳定性试验:取同一供试品溶液,分别于0,2,4,6,8,12h时各 进样20L.结果峰面积的RSD为0.59%,表明溶液稳定性良好. 重现性试验:按拟订方法对同一批样品分别进行测定.结果样 品中齐墩果酸含量的RSD为1.2%,表明方法重现性较好. 加样回收试验:精密量取含量为0.982mg/mL的样品6份,每份 0.5mL,置10mL表1齐墩果酸加样回收试验结果(n:6) 量瓶中,分别精密 加入不同量的齐 墩果酸对照品, 按供试品溶液制 备方法操作,进 样量为20L,结 果见表1. 2.5样品含量测定 取样品0.23g,依法测定.结果批号为050501,051201,061007 的3批样品的齐墩果酸含量分别为86.76,84.74,86.92mg/g. 3讨论 3.1比较了A甲醇一水一冰醋酸(87:13:0.2),B乙睛,水一 0.1%磷酸(75:25:0.1),c乙腈一0.1%磷酸溶液(67:33)等几种 流动相,结果样品在A中不稳定,峰形偏宽,理论塔板数较低;在B 中分离效果不好,主峰重叠;在c中分离效果最好,峰形对称,理论 塔板数不低于6000. 3.2在流动相,甲醇,75%乙醇几种溶剂中,75%乙醇的溶解性最 好,采用75%乙醇时峰形最好,还能减少操作过程中滤头堵塞溶 剂喷出对检验人员健康造成的损害.通过比较,超声时间(20,30, 40min),发现30min即能满足样品中齐墩果酸的溶出. 3.3肝速康胶囊中齐墩果酸粗品为主药,具有降低转氨酶,防止 肝硬化的作用,是目前治疗肝病的有效药物之一…I.用HPLC法测 定该制剂中齐墩果酸含量,操作简便,重现性好,阴性样品无干扰. 参考文献: 【1]WS3一B一2527—97,卫生部药品标准[S]. [2]邢波,杨林,杜英俊.肝速康胶囊质量标准的研究[J].黑龙江医 药,2003,16(4):253—254. (收稿日期:2007—08—20:修回日期:2007—10—23) ? 41?