盐酸克仑特罗残留量的测定方法

盐酸克仑特罗残留量的测定方法 1 范围 本规定了可食性动物组织中盐酸克仑特罗残留量的测定方法。 本标准适用于可食性动物组织中盐酸克仑特罗残留量的测定。 第一篇 高效液相色谱法 2 原理 样品经有机溶机(甲苯+二氯甲烷混合液)抽提，提取液经酸性氧化铝小桩净化，洗脱液浓缩后用0.1mol/L盐酸溶解后供高效液相色谱仪进行检测。 3 试剂 除方法另有规定外，试剂均为分析纯，水为二次重蒸水或超纯水。 3.1 酸性氧化铝(100-200目)，层析用。 3.2 甲苯 3.3 二氯甲烷 3.4 乙腈，色谱纯 3.5 盐酸 3.6 氢氧化钠 3.7 磷酸二氧钾 3.8 乙二胺四乙酸二钠 3.9 盐酸克仑特罗贮备液:精密称取盐酸克仑特罗标准品，用0.1mol/L盐酸溶液配成100μg/ml，存放在冰箱中备用。 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器。 4.2 旋转蒸发器 4.3 匀浆机 4.4 超声波发生器 5 操作方法 5.1 提取 提取动物肝脏样品10.0g，加入0.1mol/L盐酸溶液25ml(乙酸乙酯饱和)匀浆1分钟(2000rpm)，超声5分钟，离心5分钟(400rpm)，取上清液用40,NaOH溶液调节至pH12。加甲苯-二氧甲烷(3:1V/V)三次萃取(每次20ml)，合并提取液。 5.2 净化 将提取液蒸发至约5ml，过酸性氧化铝小柱(直径1cm，长12cm)，用0.1mol/L盐酸溶液洗脱待测成份，蒸干后用0.1mol/L盐酸溶液0.5ml溶解，0.45μm滤膜过滤后供高效液相色谱仪检测。 5.3 色谱条件 5.3.1 色谱柱，C18柱。 5.3.2 流动相:乙腈:缓冲液[20mmol/L磷酸二氢钾+30μmol/L EDTA，Pμ3.9](20:80V/V) 5.3.3 流速:1ml/min。 5.3.4 柱温:30?。 5.3.5 检测波长:243nm。 5.3.6 进样量:20μl。 5.4 测定 根据样品液中盐配克仑特罗含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶 液和样品溶液中盐酸克仑特罗响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样品液等体系参插进样测定。 5.5 计算 X=A×Cs×V?(As×m) 式中:X—试样中克仑特罗含量，mg/kg; A—液中盐酸克仑特罗的峰面积，μV.S; As—标准工作液中盐酸克仑特罗的峰面积:μV.S; Cs—标准工作液中盐酸克仑特罗的浓度，μg/mL; V—样液量终定溶体积，mL; m—最终样液所代的试样量，g。 注:计算结果需将空白值扣除。?20, 6 精密度和灵敏度 在上述色谱条件下，本方法的检测限为0.002μg/g，回收率为80,?20,。 第二篇 气相色谱—质谱联用法 7 原理 样品用β—盐酸葡萄粮醛甙酶或芳基硫酸酯酶，在pH5.2的缓冲溶液中消化。萃取的组织样液通过离心和过滤分离。萃取液用C18和SCX小柱，固相萃取净化，分离的药物残留经过双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后用带有质量选择检测器的气相色谱仪测定。 8 试剂 8.1 乙酸铵缓冲液(20mmol/L，pH5.2)、溶解1.45g乙酸铵于500ml-700水中，用乙酸调整pH值至5.2并稀释到1升。 8.2 β—盐酸葡萄粮醛甙酶芳或基硫酸酯酶溶液30U/ml或相当者。 8.3 30mmol/L盐酸:30mL 1mo/L盐酸稀释到1升蒸馏水中。 8.4 甲醇:分析纯。 8.5 4,氨化甲醇(amonium methanol):用甲醇稀释4ml氨溶液(比重0.88)至100ml。 8.6 双三甲基硅基三氟乙酰胺，BSTFA。 8.7 甲苯:分析纯。 8.8 C18小柱:supelclean LC-18 Sep Pak 小柱500mg，3mL。 8.9 SCX小柱:supelclean Lc-SCX SEP Pak小柱500mg，3L。 8.10 标准溶液 8.10.1 盐酸克仑特罗储备液:精确称取适量的盐酸克仑特罗标准品，用氨化甲醇配成浓度约1mg/mL的标准储备液。 8.10.2 盐酸克仑特罗标准工作液:将储备液用氨化甲醇稀释为v(0.05-2.0) μg/ml，存放在冰箱中备用。 9 仪器及设备 9.1 离心瓶，50mL，具塞。 9.2 Sep-Pak真空接头。 9.3 具聚四氟乙和稀拧盖的试管。 9.4 匀浆机。 9.5 机械真空泵。 9.6 旋涡混合器。 9.7 恒温箱，精度为?3?。 10 操作方法 10.1 提取 准确称取已绞碎的动物肝脏样品(10?1.0)g，于50mL具塞的离心管中。加入20mmol/L的乙酸缓冲溶液20mL，均质5分钟。加入50μLβ-3000rpm离心5分钟，过滤上清液，收集滤液。 10.2 净化 装好真空泵和接管，将C18和SCX固相萃取柱按从上到下的顺序安装。依次用5mL甲醇、5mL水、5mL甲醇淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，保持抽气5分钟使柱中的液体逐渐枯竭，取下C18柱，用5mL4,氨化甲醇淋洗SCX柱并收集流出液于具塞玻璃试管中。 中华小吃论坛www.ku162.com 学习中国所有美味小吃技术就上www.ku162.com