牛黄羚贝消炎片的抗病毒作用

牛黄羚贝消炎片的抗病毒作用 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月'1371' 牛黄羚贝消炎片的抗病毒作用 韩杨,李宜平. (1.长春中医学院药理学教研室,吉林长春130117;2.长春中医学院药剂学教研室, 吉林长春130117) 牛黄羚贝消炎片系由牛黄,川贝,金银花,人参, 大青叶等民问方药研制而成的中药复方制剂,具有 清热,解毒,清肺祛痰,止咳平喘之功效,主要用于感 冒风热证.本实验对其动物体内及组织培养中的抗 病毒作用进行了研究,为其临床用药提供药理依据. 1材料与方法 1.1药物:牛黄羚贝消炎片(每片含绿原酸不得少 于1.3mg)由长春中医学院药剂教研室提供,批号 0301050以片剂制成1O0混悬液,用时以蒸馏水 配成3O质量浓度,以0.45m微孑L滤器滤过除 菌备用,贮于4C.病毒唑注射液(1O0mg/mL)由 河南焦作市第二制药厂生产,批号990728—2,实验 前配制成0.8溶液,滤过除菌备用. 1.2细胞:Hep一2传代细胞,购于中国药品生物制 品检定所.FI细胞,由白求恩医科大学微生物教研 室保存. 1.3培养液:IMDM购于Sigma公司;胎牛血清,购 于长春生物制品研究所;胰蛋白酶,日本产上海分装. 1.4病毒株:流感病毒FM株,肠道病毒CoxB.均由 吉林大学医学部微生物教研室保存;单纯疱疹病毒I 型(HSV一1),购于中国药品生物制品检定所;腺病毒 ?型,来源于吉林大学第一临床医院儿科研究室. 1.5动物:昆明种小鼠,(2O?2)g,雌雄各半,购自 吉林大学实验动物中心. 1.6牛黄羚贝消炎片对小鼠流感病毒性肺炎的作 用_】]:取健康小鼠,雌雄各半,随机分为5组;病毒唑 (0.07g/kg)组,牛黄羚贝消炎片高,低剂量(6.o, 3.og/kg)组,正常对照组与模型组(蒸馏水),每组 10只,于感染(正常组除外)前一天开始ig给药,连 续5d.在乙醚浅度麻醉下滴鼻感染流感病毒FM 株10LD.,感染后96h解剖,取肺称质量,计算肺 指数和抑制率. 肺指数一肺质量/体重×100 肺指数抑制率一(模型组平均肺指数一实验组平均肺指 数)/模型组平均肺指数×100 1.7牛黄羚贝消炎片对病毒致细胞病变的作 用[1~43:?细胞准备:分别将Hep一2传代细胞和FI 细胞培养5d,使之成片,用胰蛋白酶消化,待细胞 面出现针尖样小孑L,吸尽消化液,取数毫升培养液吹 散细胞计数,至约5×104/mI后,接种于96孑L塑料 组织培养板内,待细胞长成单层.?药物的无毒界限 及病毒效价测定:将牛黄羚贝消炎片3O药液,病 毒唑注射液分别稀释至1:2,1:3,1:4,1:8,1: 16药液,并分别加入Hep一2,FL单层细胞上,每孑L 0.2mL,置37C,5Co孵箱培养,求出药物对细 胞的无毒界限.牛黄羚贝消炎片药液在1:8(37.5 mg/mI)以下稀释时对细胞无毒性作用,实验时选 用1:8(37.5mg/mL)稀释.病毒唑在1:2(10 mg/mL)以下稀释时对细胞无毒性作用,实验时选 用1:2(2mg/mI)稀释.将流感病毒FM,肠道 病毒CoxB.,腺病毒?型,HSV—I病毒进行10倍 稀释成10,106不同稀释度,并将各种稀释度的 病毒感染Hep一2和FL细胞,吸附0.5h后洗去病 毒液,每一病毒稀释度各加4孑L,置37C,5Co 培养箱内,每天在倒置显微镜下观察病变,连续3 d,各孑L病变情况,用改进寇氏法(Karber法) 分别求出流感病毒FM,肠道病毒CoxB.,腺病毒 ?型,HSV—I病毒滴度(TCID.).?抗病毒作用: 在96孑L塑料组织培养板上已培养成的单层Hep一2 传代细胞和FL细胞内分别加入1:8稀释度的药 液(37.5mg/mI),2mg/mL的病毒唑药液及3O TCID.的病毒,37C孵育培养后于显微镜下观察 细胞病变,病变程度可分为无病变,有病变,于孵育 的不同时问(第1,2,3天)观察细胞病变,以判断药 物能否延迟病毒的致细胞病变作用. TCID5o—lg一(X+1/2i一~Pi/1oo) X:最大病毒浓度病毒量的对数值;i:相邻两组病毒浓度病毒 量的对数值;?P:各组病毒稀释度病毒致细胞病变的总和 1.8统计学处理:各组数据以37?S表示,用t检验 进行显着性分析. 收稿日期:200502—15 基金项目:吉林省科技厅资助课题(吉科合字第962903号) 作者简介:韩杨(1959一),女,吉林长春人,副教授,主要从事药理学研 究.Tel:(0431)6172352E—mail:hanyang369@yahoo.corn.cn ? 1372?中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月 2结果 2.1流感病毒性肺炎小鼠肺指数值和抑制率:牛黄 羚贝消炎片高,低剂量组肺指数值明显低于模型组 (P<O.001),且高剂量组作用强于病毒唑组.表明 该药物对小鼠流感病毒所致肺炎具有抑制发生,发 展,使其炎症减轻的作用.结果见表1. 表1牛黄羚贝消炎片对流感病毒性肺炎 小鼠肺脂数的影响(?s,n一10) Table1EffectofNiuhuangLingbeiXiaoyanpian onlungindexofmicewithinfluenza viruspneumonia(?s,,l—10) 与正常组比较:』dO.O0i 与模型组比较:…尸<O.O01 ???尸<0.O01VSnormalgroup …尸<O.O01modelgroup 2.2病毒致细胞病变:在感染的4种病毒的30 TCID.剂量下,牛黄羚贝消炎片(37.5mg/mI)对 流感病毒FM.株,腺病毒?型的致细胞病变有抑制 作用,于第2天出现抑制作用;牛黄羚贝消炎片 (37.5mg/mI)对HSV一1病毒有一定的延缓作用. 结果见表2. 3讨论 小鼠流感病毒性肺炎是用流感病毒小鼠适应株 所致的出血性肺炎的模型,是最常用的病毒致整体 动物感染模型.小鼠感染病毒后引起肺炎,导致肺组 织内炎症细胞渗出增多,形成肝样实变,使全部肺质 量增加,肺质量增加和肺炎的严重程度相关.该模型 用于观察药物对流感病毒所致肺炎的预防和治疗作 用.本实验于感染流感病毒96h解剖称取肺质量, 表2牛黄羚贝消炎片对病毒致细胞病变活性的影响(,l一4) Table2EffectofNiuhuangLingbeiXiaoyanpianoncyto— pathogenicactivityinducedbyvirus(,l一4) p/流感病毒肠道病毒腺病毒 药物 (mg. ' mL一)FM1(:.xB3I型 HsV 病毒唑2++++ 牛黄羚贝消炎片37.5+一+? "+":抑制作用;"一":无抑制作用;"?":有延缓作用 "+":inhibition;"一";non—inhibition;"士":delay—action 计算肺指数值及肺指数抑制率,牛黄羚贝消炎片高, 低剂量组肺指数值明显低于模型组,表明该药物对 小鼠流感病毒所致肺炎具有抑制发生,发展,使其炎 症减轻的作用. 细胞培养抗病毒试验常用抑制病毒致细胞病变 (CPE)法,是因为许多病毒对感染细胞可产生明显 的病变,在光学显微镜下可见细胞变圆,折光增加, 空泡形成,细胞融合和细胞溶解.这些变化很容易与 药物毒性所造成的细胞损害相区别,所以CPE法是 最常用于研究药物的抗病毒试验的方法.牛黄羚贝 消炎片(37.5mg/mI)对流感病毒FM株,腺病毒 ?型的致细胞病变作用有抑制作用.对HSV一1的 致细胞病变作用有一定延缓作用.本实验结果表明 牛黄羚贝消炎片具有较好的体内,体外抗病毒作用, 在防治病毒性疾病方面具有较大的临床应用价值. References: [1]XuSY.MethodologyinPharma~ologi<alExperiment(药理 实验方法学)EM].Beijing:BeijingPeopleSMedicalPub— lishingHouse,2002. [2]YangzW,ZhouY,ChaoxQ.AntiviraleffectofSophot?d alopecuroidesalkaloidsonCoxsackievirusB3invitt0EJ].J SichuanTraditChinMed(四川中医),20O3.21(3):14—16. [3]WangCH,YangZQ,XiaoH.Researthofantiviralactivity ofPenciclovirtoherpesvirusinvitroEJ].VirolSin(中国病 毒学),2002,17(2):102—105. E42HeimA,GrumbachIP,AkerblomP,el".Inhibitionof coxsackievirusBscarrierstateinfectionofculturedhumanby ribaririnandmyocardialfibroblastsnaturalinterferonalpha _J].Alph口AntiviralRP,1997,34(1):101111. 《中国医院药学杂志))2006年征订启事 《中国医院药学杂志》系中国科协主管,中国药学会主办的综合性医院药学专业 性学术核心期刊.栏目有 研究论文(制剂研究,新药研究,治疗药物监测,药动学,药品质量,药物配伍和相互作 用,药物应用再评价), 药物与临床(临床疗效观察,临床用药分析,临床合理用药,药物不良反应及其防治), 综述,药事管理,科研简 报,药物不良反应,读者园地,信息动态,医药企业及产品介绍等. 本刊为月刊,大16开,从2006年起每期为12O页,每期定价12.50元全年150元. 每月18日出版,国 内邮发代号38—50,国外代号:M65—38. 编辑部地址:武汉市胜利街155号邮政编码:430014电话:027—82836596 传真:(027)82856411E—mail:pharmacy@vip.163.COrn