气相色谱法测定维生素E乳膏中维生素E的含量
气相色谱法测定维生素E乳膏中维生素E
的含量
中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2006年第27卷第4期237
气相色谱法测定维生素E乳膏中维生素E的含量
李国忠,赵云燕,管玉云,程正
(1.铜陵市人民医院,安徽铜陵244000;2.铜陵市药品检验所,安徽铜陵244000) 摘要:目的建立一种用气相色谱法测定维生素E乳膏中维生素E含量的方法.方法采用硅酮0V一17填充
枉(涂布浓度为2%);柱温:275?;进样口温度:295~C;FID检测器,检测器温度320~C.结果维生素E在2.02,
6.06ug/mL范围内呈良好线性关系(r=0.9993),平均加样回收率为99.4%,RSD为1.5%(n=9).结论该法简便
快速,结果准确,可以有效地控制该药品的质量.
关键词:气相色谱法;维生素E乳膏;维生素E
中图分类号:R977.25;R927.2文献标识码:A文章编号:1005—1678(2006)04—0237—02
DeterminationofVitaminEinVitaminEcreambygaschromatography
LIGuo—zhong,ZHAOYun—yan,GUANYu.yun,CHENGZheng2 (1.ThePeopleSHospitalofTongling,Tongling244000,China;
2.ProvincialInstituteforDrugControl,Tongling244000,China)
维生素E作为一种基本营养剂,具有增强细胞
抗氧化作用,可延缓机体衰老过程,是临床常用药
品.维生素E乳膏是由维生素E配以适量乳膏基
质制成的软膏剂,用于手,足皴裂,能有效防治冻疮,
滋润和保护皮肤及抗细胞褐色素生成,亦是临床常
用防裂护手药品.《安徽省医院制剂规范》(1999年
版)llj收载有此品种,其含量测定方法为二阶导数 法,但在实际测定中含量偏高.本文参考《中国药 典》(2005年版)并根据实验室条件建立了用气相色 谱法测定维生素E乳膏中维生素E含量的方法,取 得了较为理想的实验结果.
1材料
维生素E对照品(含量:99.2%),中国药品生物 制品检定所,批号:100062—0007;正三十二烷(色标); 维生素E乳膏,铜陵市人民医院制剂中心,批号: 051212,051226,051230;无水乙醇,正己烷均为分析 纯.
6820气相色谱仪及色谱工作站,Agilent公司; AE一240(0.01n1g)电子天平,瑞士Metfler公司. 2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:硅酮OV.17填充柱(涂布浓度为2%); 收稿日期:2006.0420;修回日期:2006.06.28 作者简介:李国忠(1958).男,安徽铜陵人.副主任药师,药剂科 主任.主要研究方向为临床药学,新制剂开发与研究. 柱温:275?;进样口温度:295?;FID检测器温度: 320?;进样量:2.在上述色谱条件下,维生素E 峰与内标峰之间的分离度大于1.5,理论板数按维 生素E峰计算大于500,符合试验要求,见图1. 2.2溶液的制备及线性关系的考察
2.2.1内标溶液的制备精密称取正三十二烷适 量.加正己烷溶解,并稀释制成每1mL中含1mg的 溶液,即得.
2.2.2对照品溶液的制备精密称取维生素E对 照品适量,加正己烷溶解,并稀释制成每1mL中约
含10mg的溶液,即得对照品贮备液.
2.2.3供试品溶液的制备取本品2.5g,精密称 定,置50mL棕色量瓶中,加无水乙醇适量,80oC水 浴振摇使溶解,放冷至室温,加无水乙醇至刻度,摇 '匀,放置冰箱冷藏1h后,迅速过滤,精密吸取续滤 液10mL,水浴蒸干,精密加入内标溶液5mL,振摇 使溶解,经0.45"m微膜过滤,作为供试品溶液. 2.2.4空白试验按处方组成比例,取除维生素E
外的乳膏基质制成空白供试品,按2.2.3项方法制备阴性对照溶液,在上述色谱条件下测定,记录色谱 图,在与维生素E峰保留时间相同处,无色谱峰出 现.
明其他组分对维生素E的测定无干扰,符合 测定要求(见图1C).
2.2.5
曲线的制备精密吸取对照品贮备液 1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mL,分别置10mL量瓶中,加 内标溶液稀释至刻度,摇匀,照上述色谱条件测定,
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510152o
t/min
A.对照品
A.Chromatogramofreferencesubstance
5101520
t/min
B.供试品
B.Chromatogramofsample 1.正三十二烷;2.维生素E
1.n-C32H66:2.VitaminE
图1GC色谱图
Fig1GCchromatogram 记录色谱图,以对照品峰面积与内标物峰面积的比 值为纵坐标,进样量()为横坐标,进行线性回归, 绘制标准曲线,得回归方程为:A=0.6622C一 0.508,r=0.9993.结果表明,维生素E在2.02, 6.06g范围内呈良好线性关系.
2.3精密度试验
精密吸取2.2.5项下的同一份对照品溶液重复 进样5次,以维生素E对照品峰面积与内标物峰面 积的比值计算,RSD为0.9%.
2.4重复性试验
取同批供试品5份,按2.2.3项方法处理,在上 5101520
t/min
C.空白对照品
C.Chromatogramofblanksamples
述色谱条件下测定,结果平均含量为19.75mg/g, RSD为1.6%(n=5).
2.5稳定性试验
取制备好的供试品溶液,按上述色谱条件,每隔 2h测定1次,RSD为2.1%(n:6),结果表明供试 品溶液在12h内比较稳定.
2.6回收率试验
取已知标示量的供试品适量,分别加入一定量 的维生素E对照品,按2.2.3项方法制备,在上述色 谱条件下测定,平均回收率为99.4%,RSD为1. 14%(n=9),结果见表1.
表1回收率试验(n=3),
Tab1Theresultsofedaravonerecovery(n=3)
2.7供试品的含量测定
取不同批号的3批供试品,在上述色谱条件测 定,按内标法以峰面积计算供试品中维生素E的含 量,其中最高值为20.6mg/g,最低值为19.2mg/g, 结果见表2.
表2供试品含量测定(n=3)
Tab2Thecomtentsoftheproducts(n=3)
批号瓦
2.8与二阶导数法测定结果的比较
取同表2批号的3批供试品,按《安徽省医院制 剂规范))1999年版"维生素E乳膏"项下规定(规范 方法)测其含量,结果明显偏高,回归方程为A= 0.O6O91C一0.00022,r=0.9995.见表2. 3讨论.
实验中供试品的提取曾采用正己烷加热回流2 h的方法_2J,结果供试品中维生素E的提取不完全, 含量偏低.因维生素E易溶于无水乙醇,提取维生 素E时采用加热溶解后冷藏处理的办法,既可使维 (下转第24O页)
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2.5统计学处理
数据以(i?s)表示,治疗前后各观察指标的比 较采用配对t检验,P<0.05为显着性检验水准. 3结果
3.1有效率
先将关节疼痛/肿胀/活动度3项指标计分叠 加,治疗后计分增加3分以上者为显效;增加2分者
为进步;增加1分以下者为无效.各患者经SH治疗 5周后,各项症状和体征均有明显的变化:显效25 例(69.4%),进步8(22.2%),无效3例(8.3%),总 有效率为91.6%.平均随访3个月,有效者未出现 明显不适症状.
3.2治疗前后踝关节疼痛/肿胀/活动度3项指标 平均积分对比结果
见表1.由表1可见,患者经1疗程治疗后,踝 关节疼痛,活动度和肿胀的改善与治疗前相比差异 显着.
表1治疗前后3项指标平均积分对比
Tab1ContrastofthethreeindicatrixSareregepointsbetweenpri— ortreatmentandpost—treatment 3.3不良反应
注射后可能于24,48h内关节腔酸胀感,可自 行缓解.极个别的患者注射后出现暂时性的疼痛加 重或局部肿胀,可能是由于SH渗入软组织内而引 起,但不影响治疗.全部病例未发现肝肾功能毒性 作用,无局部感染.
4讨论
OA的关节软骨在早期软骨表面的无定形结构 屏障作用消失,软骨基质中的糖蛋白质消失,引起软 骨破坏.同时由于滑液中的SH浓度和相对分子质 量降低,使润滑和抵抗机械力作用的生物功能产生 障碍,导致软骨细胞损失,释放一些酶破坏基质.基 质的降解可进一步引起软骨损伤,形成恶性循环-3j. 成人退变软骨的自身修复,尚无证据表明可获得满 意的生理状态透明软骨.其治疗以对症处理为主, 而常用的非甾体消炎药给患者带来众多的不良反
应,特别是消化道反应给患者造成痛楚.SH为关节
滑液的主要成分,关节腔内给予外源性的SH进行
补充疗法,使其覆盖于关节软骨表面保护软骨,抑制 炎症反应,利于软骨修复,刺激自身滑膜产生高分子 的SH,改善润滑功能,从而可以缓解症状,阻止病情
进一步发展,增加关节活动度_4j.
本组治疗结果证实,SH踝关节腔内注射可以达
到缓解疼痛,改善关节功能的作用,尤其对轻,中度
的患者具有良好的疗效.中轻度肿胀患者临床症状
基本得到改善.疗程结束后,其治疗作用较持久,平
均随访3个月,疗效稳定,无毒副作用.
踝关节腔内注射,技术性较高,注射时应避免穿
刺针反复刺伤关节软骨及药物注射于关节腔外组
织,强调定位准确及一次成功.同时,应特别注意局
部严格消毒及无菌操作,预防感染.
参考文献:
[1]MinamiS,OkazakiT,TanakiT,eta1.Astudyoftheeffectofintra-ar— ticularinjectionofSLMIO(sodiumhyaluronate)onosteoarthritisofthe
knee[J].JpnPharmacolTher,1993,21(supp1):565—579. [2]AhmanR,AschD,BlockD,eta1.Developmentofcriteriaf0rtheclas— sificationandreportingofosteoarthritis:classificationofosteoarthritisof
theknee[J].ArthritisRheum,1986,9(8):1039—1049. [3]蒋宾,王国新,罗成辉.关节内骨折术应用玻璃酸钠缓解关节疼 痛,肿胀的疗效观察[J].中国临床康复,2002,6(8):1206—1207. [4]凌沛学.透明质酸[M].北京:中国轻工业出版社.2OO2:139—140. (上接第238页)
生素E提取完全,又可通过冷藏除去制剂中的基
质,再通过水浴蒸干除去乙醇后,用正己烷溶解便可 将供试品中的维生素E充分提取完全,含量测定结
果与标示量20mg/g十分接近.
由于维生素E易受空气及紫外线的氧化而颜 色变深,所以实验操作时应使用棕色瓶,并注意避光 操作,以免影响含量测定结果的准确度.
《中国药典))2005年版收载了维生素E原料及 部分制剂,未收载维生素E乳膏,本文参考此版药 典并根据现有的实验室条件建立了柱填充气相色谱 法测定维生素E乳膏中维生素E含量的方法,结果 十分理想.与标准的二阶导数法相比,本方法测定 结果更接近标示量,而且更符合《中国药典))2005年 版的要求.
参考文献:
[1]安徽省卫生厅.安徽省医院制剂规范[s].1999版.合肥:安徽 科学技术出版社,1999:166.
[2]国家药典委员会.中国药典:二部[s].2005版.北京:化学工 业出版社,2005:675.