小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告 实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验(2) 实验二 小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验 一 实验目的 1(掌握小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理 2(熟悉细胞吞噬作用的基本过程 二 基本原理 细胞的吞噬作用在单细胞动物是摄取营养物质的方式，在高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。巨噬细胞是由骨髓干细胞分化生成，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解。吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成;免疫抑制剂环磷酰胺(CYP)对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。 三 实验用品 1(器材:显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、1ml注射器、载玻片、盖玻片、吸管等 2(试剂:0.9%生理盐水;可溶性淀粉6.0g加水100ml煮沸备用。(6%淀粉中含0.3%台盼蓝) 3(材料:小白鼠;0.5%鸡红细胞悬液 四 实验步骤 1. 鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为0.5%。 2. 实验前一天，向小鼠腹腔注射1ml可溶性淀粉。 3. 实验前30分钟，向腹腔内注射1ml 0.5%的鸡红细胞，并轻揉腹部，使鸡红细胞悬液分散。 4. 30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠(右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓与脑髓间断并致死)。 5. 迅速剖开腹腔，用装针头的注射器吸取腹腔液。 6. 在干净的载玻片上滴加一滴腹腔液，盖上盖玻片，显微镜下检查。 7. 观察时，将视野调暗。在高倍镜下，先分辨清楚鸡红细胞和巨噬细胞。鸡红细胞为淡红色、椭圆形、有核的细胞。而体积较大圆形或不规则的细胞，其面有许多似毛刺状的小突起(伪足)，细胞质中有数量不等的蓝色颗粒(为吞入的含台盘蓝淀粉形成的吞噬泡)即为巨噬细胞。变换视野，仔细观察巨噬细胞吞噬吞噬鸡红细胞的过程。可见有的鸡红细胞(一至多个)紧贴附于巨噬细胞的表面;有的巨噬细胞已将1至数个红细胞部分吞入;有的巨噬细胞已吞入1个或几个红细胞在胞质中刚刚形成椭圆形的吞噬泡;有的局势细胞内的吞噬体积缩小，并呈现圆形，这是与初级溶酶体发生融合，泡内物正 在被消化分解。 五 注意事项 腹腔注射时不要刺伤内脏。 六 实验报告 1. 绘图:小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的各种形态。 2. 计算吞噬细胞吞噬百分数。 篇二:实验6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察 实验6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬(转 载于:wWw.xIeLw.com 写 论文 网:小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告)现象观察 姓名:李思露 学号:131140040 一、 实验目的 1. 通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程; 2. 了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法 二、 实验原理 吞噬作用也称为胞吞作用(cellular eating)，指细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质(直径一般大于250mm)的过程。许多原生动物通过吞噬作用摄取营养;高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。不同动物来源的巨噬细胞或同一动物来源的不同巨噬细胞吞噬功能强弱不同，个体吞噬细胞的平均吞噬能力是机体非特异性免疫功能强弱的重要反映。 吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的 受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。 内吞 内吞体 吞噬溶酶体 胞吐 巨噬细胞吞噬自身衰老凋亡细胞而不吞噬正常细胞，原因是，凋亡细胞细胞膜内 侧面的磷脂酰丝氨酸反转到胞膜外侧面而被巨噬细胞模式识别受体识别。 吞噬功能一般用吞噬百分率和吞噬指数两个指标反映。 吞噬百分率,吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数×100, 吞噬指数,吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数 三、 实验材料、试剂及器材 (一)材料: 1. 健康小白鼠:6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，每只腹腔注射4,淀粉肉汤1mL。 2. 抗凝鸡血 (二)试剂: 1. 4%淀粉肉汤 2. D-Hanks液 3. 0.85,生理盐水 4. 180IU/mL肝素钠生理盐水溶液 (三)用品 普通光学显微镜、 10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱(37?)、5mL一次性注射器、 10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等 四、 实验操作 1. 巨噬细胞收集:脱颈处死小鼠;腹腔注入2mL生理盐水，揉匀;剪开腹部皮肤， 暴露腹膜;用带针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。 2. 体外吞噬。0.3mL腹腔液+0.3mL鸡红细胞悬液，37?吞噬。 3. 制片及观察。 分别在0min、15min、30min、45min 制备细胞混合液临时装片，观 察现象并作图。 五、 实验结果 图1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片(不染色) 表1 巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程各个阶段 巨噬细胞吞噬物的变化亦具有与时间相关的特点，巨噬细胞吞噬物在形态上易于观察和检测，这些特征使得巨噬细胞在损伤时 间推断过程中具有重要的法医学意义。 六、 作业与思考题 1. 画图显示巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程各个阶段。 答:如表1. 2. 在体外吞噬实验中，为什么随着吞噬时间延长，制片中出现的巨噬细胞数量减少, 答:巨噬细胞(Macrophages)能够吞没、破坏受损伤组织，有助于启动康复过程。虽然它们在损伤位点发挥关键作用，但一旦任务完成，就需要尽快撤离，结束炎症反应，为再生过程开路。继续存在的巨噬细胞不利于组织恢复。 3. 如不预先洗涤鸡红细胞会影响实验结果吗,为什么, 答:会。D-hanks液是一种平衡盐溶液，用于洗涤鸡血红细胞，如果不洗涤则鸡血红细胞含有钙镁离子，会破坏巨噬细胞溶酶体水解酶的活性，影响吞噬过程的进行。 七、 反思与改进 1. 注射时注意不要注入皮下或将针头插进小鼠内脏。进针部位选在下腹部，距离生殖 器约1cm处腹中线两侧，针头与皮肤保持约30度到45度角，针头进入皮肤约1cm;可用一只手的拇指和食指将下腹部皮肤及腹膜夹起，然后将针头插入空腔。 2. 要注意计时，不同阶段细胞的形态不同。 篇三:小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察 一、 实验目的 a) 通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬大肠杆菌活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程; b) 了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法。 二、 实验原理 吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质(直径一般大于250nm)的过程。 吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。 许多原生动物通过吞噬作用摄取营养;高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。 三、 实验仪器及试剂 a) 材料:健康小白鼠:6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，一部分腹腔注射4,淀粉肉汤1mL另一部分不注射，大肠杆菌悬液。 b) 试剂:4%淀粉肉汤，D-Hanks液，0.85,生理盐水，180IU/mL肝素钠生理盐水溶液 c) 普通光学显微镜、 10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱(37?)，5mL一次性注射器、 10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等 四、 实验步骤 a) 巨噬细胞收集:分别用脱颈法处死一只腹腔注射4,淀粉肉汤1mL的小鼠和一只不注射的小鼠。然后都在腹腔注入2mL生理盐水，揉匀;剪开腹部皮肤，暴露腹膜;用带针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。 b) 体外吞噬。在两支10mL玻璃离心管分别加入0.3mL注射淀粉肉汤的腹腔液+0.3mL大肠杆菌悬液和0.3mL不注射淀粉肉汤的腹腔液+0.3mL大肠杆菌悬液，放在37?水浴锅中吞噬。 c) 制片及观察。 分别在0min、15min、30min、45min 制备细胞混合液临时装片，观察现象并作图。 d) 在0min和45min时在两管中分别取两滴混合液滴于载玻片上，用次甲基蓝染色5分钟后装片观察。 五、 实验结果 a) 0min时注射肉汤(左)与未注射肉汤(右)图片(次甲基蓝染色) 由图知，注射淀粉肉汤的巨噬细胞的数量较多。 b) 15min时注射肉汤(左)与未注射肉汤(右)图片 c) 30min时注射肉汤(左)与未注射肉汤(右)图片 d) 45min时注射肉汤(左)与未注射肉汤(右)图片(染色) 六、 实验 由实验的所得图中可以知道，注射肉汤的巨噬细胞的数量较多。从0-45min，本应该看到巨噬细胞吞噬大肠杆菌的一个过程，但是 可能是大肠杆菌的体积太小，或者是有两个时间段未进行染色，所以我觉得看的不是非常清楚。可能换成鸡血细胞会更加清楚。 七、 注意事项 a) 注射时注意不要注入皮下或将针头插进小鼠内脏。 b) 抽取腹腔液时应从空隙处抽，放止针头被堵。