大鼠脊髓挫伤后甲基强的松龙治疗对热休克蛋白27基因表达的影响

毕业诚信声明 本人郑重声明： 所呈交的毕业论文《大鼠脊髓挫伤后甲强龙治疗对热休克蛋白27基因表达的影响》是本人在指导老师的指导下，独立研究、写作的成果。论文中所引用是他人的无论以何种方式发布的文字、研究成果，均在论文中以明确方式标明。 本声明的法律结果由本人独自承担。                 毕业论文作者签名：                                      2013年 5 月 15 日 成 绩： 江西科技师范大学 毕业论文 目（中文）：大鼠脊髓挫伤后甲强龙治疗对热休克蛋白27基因表达的影响                                        （外文）：Effect of methylprednisolone treatment on the expression of heat shock protein 27 mRNA in rats after spinal cord contusion                                    院（系）：              生命科学学院                    专    业:               09生物工程                    学生姓名：                  刘翔                        学    号：                20094230                      指导教师：                  顾兵                        2013年5月15日 1．引言    1 2．材料与方法    3 2.1 实验准备    3 2.2 动物与分组    3 2.3 建立大鼠脊髓挫伤模型    4 2.3.1前期准备    4 2.3.2麻醉及体位    4 2.3.3手术步骤    4 2.4 术后干预    4 2.5 取材方法    4 2.6  RT-PCR反应    5 2.7 统计处理方法    5 3．实验结果    5 3.1 一般情况和神经功能    6 3.2  RT-PCR检测    6 4．讨论    6 4.1 实验方法    6 4.2 热休克蛋白    6 4.3 保护机制    7 5．结论    9 附录    10 参考文献    12 大鼠脊髓挫伤后甲强龙治疗对热休克蛋白27基因表达的影响 摘要：目的：在建立大鼠脊髓挫伤的动物模型的基础上，应用大剂量甲强龙组作为试验组，然后通过RT-PCR检测热休克蛋白27的基因表达结果，探讨甲强龙对脊髓挫伤后HSP27基因表达的影响。方法：30只清洁级SD大鼠随机分组，分为假手术组、脊髓挫伤组和甲强龙组，每组10只。假手术组仅作椎板切除，其他两组均建立脊髓挫伤模型。打击法建立脊髓挫伤模型（5g×5cm），打击0.5h后，脊髓挫伤组腹腔注射5mL/kg生理盐水，甲强龙组大鼠静脉内注射大剂量甲强龙（30mg/kg），假手术组不予处理。24h后取材，以显微器械将挫伤平面上下0.5cm的脊髓组织切取，进行RT-PCR反应检测热休克蛋白27的基因表达结果。结果：假手术组在术后24小时HSP27mRNA的表达的相对丰度为0.0643±0.0152，挫伤组在伤后24小时HSP27mRNA的表达的相对丰度高达1.0013±0.3861，是假手术组的16倍，差异有非常显著性（P<0.01）。甲强龙组在伤后24小时HSP27mRNA的表达的相对丰度为1.2858±0.1384，与挫伤组比较差异有显著性（P<0.05），与假手术组比较增高了20倍。结论：脊髓挫伤后，临近挫伤处的脊髓组织HSP27的表达显著增高，大剂量甲强龙能促进HSP27的表达，发挥保护作用。 关键词：脊髓挫伤；动物模型；甲强龙；热休克蛋白；基因表达；RT-PCR技术 1．引言 脊髓挫伤后神经功能的保护和恢复仍然是世界性的一大难题。脊髓局部挫伤后会出现一系列的病理变化，最终致使脊髓细胞和组织的坏死。原发性挫伤周围的神经元细胞、胶质细胞、以及毛细血管暴露于明显变化的微环境中，其中一些细胞由于不能耐受这种变化而死亡，这是所谓的继发性挫伤。那些经受住微环境变化的神经元细胞和胶质细胞便得以存活。为了改善脊髓挫伤后的结果，大量各种各样的试验主要都是针对脊髓的继发性挫伤所进行的。神经细胞在遭受应激性刺激后会迅速产生所谓的应激蛋白或热休克蛋白(heat shock proteins，HSP)。减少继发性挫伤、及时彻底的减压和恢复脊柱稳定性是目前治疗脊柱脊髓挫伤的主要办法。脊髓挫伤后机体具有一定的自我修复能力，使挫伤局部一些保护性因子分泌增加，如热休克蛋白27。 在药物治疗方面，目前应用于临床的有甲强龙(methylprednisolone，MP)和神经节苷脂。大量的实验资料表明，过氧化基团的生成是创伤后神经损害的重要的因素。这些氧自由基主要源于细胞的脂质过氧化。这一结论得到了重视，并在美国国家第二次急性脊髓挫伤研究会上被推广用于临床。激素类药物因其能减轻脊髓挫伤后的继发性水肿，自上世纪60年代起就逐渐被用于临床。以往治疗脊髓挫伤最常用的类固醇激素为地塞米松，其初始剂量和治疗时间差异很大，一般强调运用保守的小剂量治疗。进人上世纪90年代后，甲强龙开始在临床上被逐渐广泛运用于治疗急性脊髓挫伤，大剂量MP治疗脊髓损害所引起的继发性挫伤已被美国脊髓挫伤学会组织的实验和临床研究证实。甲强龙是一种人工合成的糖皮质激素，是美国FDA批准的唯一一个用于治疗治疗脊髓挫伤的药物，其治疗方案已经在世界各地广泛应用。研究表明MP通过多方面机理发挥其对脊髓的保护作用，其神经保护作用可能的机理抑Nil质过氧化、抗炎作用、抑Nil质水解和花生四烯酸释放、改善挫伤后脊髓血流、防止细胞内外电解质失衡、防止脊髓细胞凋亡、抑制兴奋性氨基酸、增强神经兴奋性和突触传递等。 HSP27是人细胞中发现的一种分子量为27kD的HSP，属于低分子量HSP家族。HSP27在对神经系统的保护方面显示了较好的作用，Akbar准备了能够在大脑组织中过度表达HSP27的转基因大鼠。当他们应用能够导致大脑海马CA3区细胞死亡的kainate对大鼠刺激后发现，HSP27的过度表达表现出非常明显的保护作用。采用野生型大鼠的对照组在CA3区发生了33％的死亡率，而转基因大鼠组的CA3区却未发现明显的细胞死亡。同时发现，在使用kainate对大鼠刺激后的观察期内，转基因大鼠的癫痫的发作程度也明显小于普通大鼠。Benn的发现：无论是体外细胞培养还是完整动物的体内实验，HSP27的过度表达能达到阻止细胞的凋亡作用。Adbar2003年发现HSP27的过度表达也能减少被kainate处理的转基因大鼠体内的caspase的产生，从而减少细胞凋亡的发生。利用HSV-basd Vector造成HSP27的过度表达有助于ND7细胞和DRG神经元抵抗由于血清或神经生长因子的撤离而引发的细胞凋亡。但同样方法造成HSP70的过度表达却没有这样的作用。 当中枢神经系统在遭受缺血缺氧等刺激时，发现HSP27的水平明显升高，但是出现显著升高的时间比HSP70要晚，且伴随胶质细胞的增生，并且增高的持续时间比较长，甚至在缺血等挫伤4周后仍然可以检测到HSP27的显著性增高，并且HSP27主要表达于胶质细胞，并非神经元细胞。从而认为HSP27是胶质增生的标志，并且通过增生胶质细胞来营养支持神经元细胞。 HSP27保护神经细胞的作用机制可能有以下几种：①抑制热休克过程中蛋白的合成，使真核细胞中未折叠的蛋白的量减少，从而减弱对细胞的破坏作用。真核生物蛋白合成需形成起始帽复合物eLF4F，HSP27可以与eLF4P的结构成分eLF4G相结合，阻止mRNA的翻译，对细胞起保护作用；②HSP27可以防止肌动蛋白的破坏，维护细胞骨架的稳定，增加对热的耐受性；⑨在热休克后刺激RNA及蛋白质的合成，协助细胞在死亡之前修复热休克造成的挫伤，使细胞尽快恢复正常生理功能：④维持谷肤甘肤水平，可以减少细胞间的活性氧，维持线粒体膜电势稳定，阻止细胞色素c的释放，从而阻止细胞色素c依赖的细胞凋亡途径阅。⑤HSP27在各种应激条件下介人PKB活化的信号转导通路，可能参与不同途径细胞凋亡的调节，如在FaS/Apo-1诱导的细胞凋亡中可能起重要作用。HSP27虽然对cytc的释放、Apaf-1及Caspase-9的活性没有影响，但可以与Caspase-3结合，抑制其活性，做为该通路的负性调节因子，抑制细胞凋亡的发生。 HSP27具有对受损细胞的保护与修复功能，大剂量MP可激发细胞更多HSP27的表达。本实验证明了受损脊髓细胞内HSP27表达的上调与合理应用大剂量MP的相关性。推测早期应用的MP更多地被受损脊髓细胞摄取，进而导致受损脊髓细胞内HSP27表达的上调。表达上调的HSP27维护了细胞骨架的稳定、减少了受损细胞的过氧化、使受损的细胞得到修复并通过多种途径抑制了受损细胞的凋亡，从而很好起到了保护脊髓等中枢神经的作用。 2．材料与方法 2.1 实验准备 手术器械：组织钳一把，蚊式血管钳两把，眼科剪两把(弯剪和直剪)，眼科镊两把(有齿镊和无齿镊)，不同型号刀柄刀片若干，微型拉钩，纱布、缝针和缝线若干，以上由本院实验室提供。 实验试剂：5%水合氯醛、生理盐水、生物素化抗地高辛抗体、胰蛋白酶K、TUNEL试剂盒、c-fos SABC免疫试剂盒、Tritionx-100、APES粘片剂、中性树脂、0.01M PH值7.4的TBS、0.01M PH值6.0的枸橼酸盐缓冲液、0.02M PH值7.4的PBS(磷酸盐缓冲液)。 实验仪器：BenchmarkTM Angle Ⅰ立体定位仪，BenchmarkTM颅脑撞击器、蜡块切片机、恒温烤箱、盖玻片和载玻片、显微照相仪、 OLYMPUS光学显微镜、统计软件SPSSl2.0 for Windows。 2.2 动物与分组  30只清洁级Sprague-Dawley大鼠，体重240±20克，雌雄不限，由江西中医学院实验动物中心提供（动物合格证号JZDWNo:2011-0558）。饲养条件：自然光照周期，室温15-20℃，进食、饮水不限。大鼠随机分为假手术组、脊髓挫伤组、MP组，每组10只。假手术组仅作单纯椎板切除；其他两组均建立脊髓挫伤(SCC)模型。 2.3 建立大鼠脊髓挫伤模型  2.3.1前期准备 手术器械消毒20分钟，动物手术室紫外灯消毒约30分钟，大鼠术前禁饮食8小时，手术室温度不低于25摄氏度。 2.3.2麻醉及体位 动物经5%水合氯醛麻醉后，俯卧位固定于BenchmarkTM Angle Ⅰ型脑立体定位仪（美国，Myneurolab）。于脊椎胸腰段背部手术区备皮，碘伏消毒。 2.3.3手术步骤 (1)根据骨性标志，以T10棘突为中心，背部正中剪一4cm纵切口。分离脊椎两侧肌肉及筋膜，用蚊氏钳轻轻咬除棘突和椎板，暴露并保持硬脊膜完整。将撞击头（直径3mm）移至T10硬脊膜表面正中血管为中心上方。当连有PinPoint™高精度接触传感器（美国，Hatteras）的撞击头接触硬脊膜表面时会产生声音警示，然后确定三维坐标为（ML：0.000 mm；AP：0.000 mm；DV：0.000 mm）。按Retract缩回撞击头，统一设定打击深度1mm、撞击速度2m·s-1和滞留时间200ms后实施撞击，造成脊椎T10脊髓挫伤。此时可见到鼠尾剧烈摆动超过3秒，双下肢及头颈部肌肉见到瞬时收缩，硬膜下见到出血，麻醉苏醒后，双下肢完全瘫痪时间超过两个小时，以上表现说明打击有效。 (2)打击完毕，依次缝合肌肉、皮肤，关闭切口，等待至麻醉苏醒。 2.4 术后干预 打击后0.5h给予腹腔注射药物。脊髓挫伤组腹腔注射生理盐水5mL/kg，MP组腹腔注射MP30mg/kg，假手术组不予特殊处理；术后置于恒温箱内饲养，自由进食，自由饮水和活动。 2.5 取材方法 所以取材时间选在伤24h后，动物麻醉后原路进入，暴露T9至Tll节段，用刀片切取T10节脊柱组织，再以显微器械从中完整取出T10节段上下平面脊髓组织，进行RT-PCR反应；同时可用过量麻醉剂处死大鼠。 2.6  RT-PCR反应 (1) TRIzol抽提脊髓神经细胞总RNA 1g组织中加入1mL Trizol液，tip头反复吹打数次。加入0.2mL氯仿，颠倒混匀，12000rpm离心10min。吸取上清，加入0.5mL异丙醇，12000rpm离心10min。沉淀溶于30μL DEPC-水中。 (2) RNA定量和鉴定 溶解的RNA经紫外分光光度计准确定量，测定OD260、OD280及比值，确定浓度及纯度。要求OD260:OD280>1.8，总RNA浓度(ug/m1)=OD260×40×稀释倍数。取总RNA3μg上样，1％琼脂糖凝胶电泳30min，观察18S、28S条带，在紫外光下显示出清晰的28s及18s两条rRNA带，说明提取RNA完整性好。 (3) 以VectorNTI6.0软件设计检测引物 金属蛋白酶组织抑制因子-1 引物序列： 正义： 5’GCTTTCTGCAACTCGGACCTG 3’，反义：5’TGAGAAACTCCTCGCTGCG 3’扩增产物长度：222bp。β-Actin检测引物序列如下：正义：5’GGGCATGGGTCAGAAGGAT 3’反义：5’CAGTTGGTGACGATGCCGT 3’扩增长度为260bp。 (4) 反应体系如下：以One-tube RT-PCR system进行一步法反转录和PCR扩增。50m RT-PCR反应体系中加入：10xBuffer 5μL，10*dNTP1μL，primerl 4.0μL(含15pmol)，primer24.0μL(含15pmol)，DTT 2.5μL，模板RNA 2.5μL(约1μg)，酶混合物0.75m，水(RNAase-free)30.25μL，共50μL。 (5) RT-PCR扩增参数如下：55℃逆转录30分钟，94℃3分钟，94℃30秒，55℃1分钟，72℃1分钟，30个循环，72℃7分钟，4℃→∞。 (6) 取5μLPCR扩增产物于1.5％琼脂糖电泳，利用凝胶成像系统扫描DNA密度，分析基因表达的相对丰度。 2.7 统计处理方法 所有数据均用均数±标准差表示，用SPSS 12.0软件进行数据统计学处理，数据间用配对t检验，以P<0.05为有统计学差异。(表1) 3．实验结果 3.1 一般情况和神经功能 假手术组术前、术后一般情况，神经功能无明显变化；另外两组脊髓行打击后大鼠双后肢软瘫，感觉减退，放射消失或迟钝，自主排尿功能丧失；伤后24h内，SCC组和MK-801组神经功能均无改善。 3.2  RT-PCR检测 假手术组在术后24小时HSP27mRNA的表达的相对丰度为0.0643±0.0152，挫伤组在伤后24小时HSP27mRNA的表达的相对丰度高达1.0013±0.3861，是假手术组的16倍，差异有非常显著性(P<0.01)。甲强龙组在伤后24小时HSP27mRNA的表达的相对丰度为1.2858±0.1384，与挫伤组比较差异有显著性(P<0.05)，与假手术组比较增高了20倍。表明脊髓挫伤24小时后，临近挫伤处的脊髓组织HSP27的表达显著增高，大剂量甲强龙能促进HSP27的表达。 4．讨论 4.1 实验方法 BenchmarkTM颅脑撞击器是近年来设计的一种可控性电磁撞击器[10]，其不仅可以通过立体的精准三维坐标对脊髓进行定位，而且撞击头打击后自动缩回，避免二次打击。数字化的调控撞击速度，组织位移、接触时间等损伤参数能够减少损伤的不均一性。与传统Allen重物坠落法相比较，减小了撞击脊椎时的不稳定性和脊髓的偏向移位，使得打击力度和深度更精确，方便制作损伤程度分级的SCC动物模型[9]。为减少影响，除动物体重尽量一致、挫伤节段与暴露范围要一致、脊柱尽量固定好使打击不致侧方移位外，注意撞击时老鼠尾部抖动数下、硬膜下迅速充血、水肿出现，以及挫伤后形态、行为学检查挫伤程度等可证实模型是否成功。 4.2 热休克蛋白 热休克蛋白(heat shock protein，HSP)是一组在结构上高度保守的多肽，广泛存在于人、动物、微生物和植物细胞内，参与细胞正常的生长、发育和分化，当机体受到各种有害的应激时如缺血、高温、挫伤时，细胞通过改变基因表达的方式，诱导 HSP的产生而启动内源性保护机制。 HSP本身不能直接发挥其生物学活性，而是通过改变或修饰其它蛋白质，影响或调节其它功能性蛋白而间接发挥作用，故称为分子伴侣。HSP的功能广泛，主要是保护细胞常温mRNA和蛋白质，使其可以耐受较高的温度和各种有害的应激。HSP 的另一主要功能是在常温条件下作为分子伴侣，协助其他新生肽折叠、组装成为有功能的蛋白质，辅助蛋白质通过膜进入线粒体、叶绿体等细胞器，作为分子伴侣把已折叠的蛋白打开或把已组装的聚合体解聚。应激反应的原因不在温度本身，而在于应激引起蛋白变性，引起蛋白变性的条件如重金属、乙醇、 翻译错误，其它如癌基因、原癌基因、病源感染、神经挫伤、衰老均可引起应激反应。 HSP根据其分子量可分为高分子量和低分子量两大类，高分子量热应激蛋白以HSP70为代表，如HSP60，HSP71等，在真核生物中有50%～90%的同源序列，低分子量有15～8kD，1～4kD，8kD多种，都是多基因家族，如HSP16、HSP25、HSP27、HSP28、HSP40、HSP60、HSP70、HSP71、HSP90等。HSP27与各种疾病关系的研究正在受到重视。HSP27是p38MAPK代谢的终末产物，在细胞内可表现为单体/二聚体甚至700kD的寡聚体，分子内C端的连接形成稳定的二聚体，N末端的进一步连接使二聚体再形成多聚体[21]。HSP27主要参与微丝的稳定和细胞信号转导。HSP27能阻止应激状态的肌动蛋白和微丝的分裂，有利于细胞骨架的稳定，它不仅对单个细胞产生应激耐受起重要作用，而且通过内皮和上皮的屏障，对整个机体起必要的保护作用[22~24]。 4.3 保护机制 甲强龙是美国PDA批准的唯一一个用于治疗急性脊髓挫伤的药物。其标准治疗方案己经在世界各地广泛应用。目前美国急性脊髓挫伤患者均应用MP治疗方案。MP通过多种机制来阻止继发性挫伤的发生和发展。其作用主要有：(1)抑制炎症反应；(2)减轻水肿；(3)抑制血管活性、前列腺素活性，增加脊髓血流量；(4)抑制氧自由基及脂质过氧化反应，稳定细胞膜和溶酶体膜；(5)逆转细胞内钙离子聚集；(6)增加钠和钾离子依赖式ATP酶的活性，促进脊髓冲动的产生和传导。最近的研究表明，MP的主要作用是抗脂质过氧化。最近的一项长期随访研究并未发现甲强龙引起缺血性坏死的任何证据，Sauerland对51个随机安慰剂或空白对照的高剂量甲强龙治疗试验进行了系统综述和荟萃分析，结果进一步证实了甲强龙应用的安全性。作者不但没有发现任何甲强龙增加胃肠道出血、伤口并发症、肺部并发症或死亡风险的证据，而且还发现高剂量甲强龙对肺部并发症具有保护作用。因此，可以认为高剂量甲强龙可改善SCC患者的功能活动，而且并不增加副作用发生的风险。 HSP27是人细胞中发现的一种分子量为27kD的HSP，属于低分子量HSP家族。HSP27在对神经系统的保护方面显示了较好的作用，Akbar准备了能够在大脑组织中过度表达HSP27的转基因大鼠。当他们应用能够导致大脑海马CA3区细胞死亡的kainate对大鼠刺激后发现，HSP27的过度表达表现出非常明显的保护作用。采用野生型大鼠的对照组在CA3区发生了33％的死亡率，而转基因大鼠组的CA3区却未发现明显的细胞死亡。同时发现，在使用kainate对大鼠刺激后的观察期内，转基因大鼠的癫痫的发作程度也明显小于普通大鼠。Benn的发现：无论是体外细胞培养还是完整动物的体内实验，HSP27的过度表达能达到阻止细胞的凋亡作用。Adbar2003年发现HSP27的过度表达也能减少被kainate处理的转基因大鼠体内的caspase的产生，从而减少细胞凋亡的发生。利用HSV-basd Vector造成HSP27的过度表达有助于ND7细胞和DRG神经元抵抗由于血清或神经生长因子的撤离而引发的细胞凋亡。但同样方法造成HSP70的过度表达却没有这样的作用。 当急性脊髓挫伤后，发现HSP27的水平明显升高，但是出现显著升高的时间比HSP70要晚，且伴随胶质细胞的增生，并且增高的持续时间比较长，甚至在缺血等挫伤4周后仍然可以检测到HSP27的显著性增高，并且HSP27主要表达于胶质细胞，并非神经元细胞。从而认为HSP27是胶质增生的标志，并且通过增生胶质细胞来营养支持神经元细胞。 HSP27保护神经细胞的作用机制可能有以下几种：①抑制热休克过程中蛋白的合成，使真核细胞中未折叠的蛋白的量减少，从而减弱对细胞的破坏作用。真核生物蛋白合成需形成起始帽复合物eLF4F，HSP27可以与eLF4P的结构成分eLF4G相结合，阻止mRNA的翻译，对细胞起保护作用；②HsP27可以防止肌动蛋白的破坏，维护细胞骨架的稳定，增加对热的耐受性阅；③在热休克后刺激RNA及蛋白质的合成，协助细胞在死亡之前修复热休克造成的挫伤，使细胞尽快恢复正常生理功能；④维持谷肤甘肤水平，可以减少细胞间的活性氧，维持线粒体膜电势稳定，阻止细胞色素c的释放，从而阻止细胞色素C依赖的细胞凋亡途径阅；⑤HSP27在各种应激条件下介人PKB活化的信号转导通路，可能参与不同途径细胞凋亡的调节，如在FaS/Apo-1诱导的细胞凋亡中可能起重要作用。HSP27虽然对cytc的释放、APaf-1及Caspase-9的活性没有影响，但可以与Caspase-3结合，抑制其活性，作为该通路的负性调节因子，抑制细胞凋亡的发生。 HSP27具有对受损细胞的保护与修复功能，大剂量MP可激发细胞更多HSP27的表达。本实验证明了受损脊髓细胞内HSP27表达的上调与合理应用(脊髓伤后8h内)大剂量MP的相关性。推测早期应用的MP更多地被受损脊髓细胞摄取，进而导致受损脊髓细胞内HSP27表达的上调。表达上调的HSP27维护了细胞骨架的稳定、减少了受损细胞的过氧化、使受损的细胞得到修复并通过多种途径抑制了受损细胞的凋亡，从而很好起到了保护脊髓等中枢神经的作用。 5．结论 (1) 脊髓挫伤后，临近挫伤处的脊髓组织HSP27的表达显著增高。 (2) 大剂量甲强龙能促进HSP27的表达，发挥保护作用。 (3) 本实验发现MP对脊髓挫伤后HSP27的表达明显高于对照组(SCC组)，MP能够促进HSP27的表达，发挥保护保护神经元作用。 (4) MP可促进HSP27的表达，发挥保护保护神经元作用，本实验可以为临床治疗脊髓挫伤提供一定的理论依据。 附录 表1  脊髓挫伤24小时后HSP27mRNA表达情况（±s） HSP表达相对丰度 t检验 假手术组 0.0643±0.0125 挫伤组 1.0013±0.3861 P<0.01 甲强龙组 1.2858±0.1384 P<0.05 图1 脊髓挫伤后的HSP表达 图2  脊髓挫伤前，脊髓外表光滑平整，血管分支清楚。 图4  脊髓挫伤后，脊髓打击处脊膜下血管出血较重，血管分支模糊，水肿较重。 参考文献 [1] Kopecek P, Altmannova K, Weigl E. 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Effect of the methylprednisolone treatment on the expression of mRNA after spinal cord contusion in rats Abstract: Objective: To investigate Effect of the methylprednisolone treatment on the expression of heat shock protein 27 mRNA after spinal cord contusion in rats.  Methods：Thirty SD rats were divided equally into operation but none contusion group, BenchmarkTM weight drop contusion group and contusion with high dose MP group. Twenty four hours after the operation,5 mL/kg of saline was delivered to SCC group in 30 minutes after contusion. The spinal lesion and neighbor areas were moved for examination of HSP27 mRNA expression by retrograde Polymerase chain reaction technique (RT-PCR). Results: The HSP27 mRNA expression were 0.0643±0.0152,1.0013±0.3861(P<0.01),1.2858±0.1384(p<0.05)in three group. It increased 15 and 20 fold after spinal cord contusion and treatment with MP.  Conclusions: MP can greatly increase the expression of HSP27 and protect the neighbor areas after spinal cord contusion. Key words: spinal cord contusion; animal model; methylprednisolone; heat shock protein 27; RT-PCR