血康口服液对家兔免疫性血小板减少症的治疗作用

血康口服液对家兔免疫性血小板减少症的治疗作用 血康口服液对家兔免疫性血小板减少症的 治疗作用 安徽卫生职业技术学院学报2003年第2卷第3期?53? 血康口服液对家兔免疫性血小板减少症的治疗作用 李华宫传邝荔香 【中圈分类号】R973+.2;R944.6+5【文献标识码】A【文章编号】 1671—8054(2OO3)03—0053—02 【摘要】目的:观察血康口服液对免疫性血小板减少症家兔的治疗作用.方法:建立家兔免疫 性血小板减少症模型,设对照 组,模型组与血康口服液组(1.4ml/kg),灌胃给药8天,测定兔外周血小板数,以及血小板面 相关抗体(PAIgG)作 为观察指标.结果:血康口服液能显着抑制模型家兔的血小板减少和血小板表面相关抗体的 升高.结论:血康口服 液对家兔的免疫性血小板减少症有明显的疗效. 【关键词】免疫性血小板减少症动物模型血康口服液 血康口服液由肿节风提取的浸膏制备,具有活 血化瘀,消肿散结,凉血止血的功效.临床用于治疗 血热妄行,皮肤紫斑,原发性,继发性血小板紫癜. 本文通过建立家兔免疫性血小板减少症模型?l, 观察血康口服液的治疗作用. 1实验材料 1.1受试药 血康口服液,批号20021111,规格:10ml/支,江 西天狮中药集团贵溪制药厂. 1.2动物 纯种白色雌性豚鼠,体重250—300g,新西兰种 大耳白兔,体重2.5—3kg,雌雄各半,均由安徽医科 大学动物中心提供. 1.3试剂 0.01MpH7.4PBS液;0.05MpH9.6碳酸盐缓 冲液;pH5.0磷酸盐柠檬酸缓冲液;饱和硫酸铵溶 液;邻苯二胺;ACD溶液;血小板稀释液;2.5%戊二 醛(用于包裹红细胞),淋巴细胞分离液(d=1.07); 肝素钠溶液(2%);卡介苗100mg/支;草酸铵溶液 (4.5%);酶联葡萄球菌A蛋白(1:40). 1.4仪器和器材 透析袋,层析柱,离子交换树月旨(DEAE一52),硅. 化试管,吸管,输血袋.高速冷冻离心机,Beekmen, HJM6;85081型倒置光学显微镜.重庆光学仪器厂; EL301Stripl~adeF酶标仪,美国BIO—TEK公司;530 紫外分光光度计,YLS—SOP一002上海分析仪器厂. 2实验方法 2.1豚鼠抗兔血小板血清的制备幢 常规制备家兔血小板悬液10ml(血小板浓度> 作者单位:l安徽医学高等专科学校基础医学部 2安徽医专99级检验专业实习生 3安徽医科大学临床药理研究所 2003—05—08收稿,2003—06—10修回 109.L)加入灭菌弗氏不完全佐剂10IIll研磨再加 入70?灭活2小时的卡介苗100mg,制成乳剂. 给豚鼠皮下多点注射,3ml/只,间隔4周,同法 对豚鼠进行第二次强化致敏,1ml/只,第二次致敏 后2周,腹腔注射0.4%戊巴比妥钠(1ml/100g)麻 醉,颈总动脉放血于一次性无菌塑料管中,封口,静 置1小时,低温离心(4?4000r/rain,10rain),分离 血清,分别用包裹过的兔红细胞和兔淋巴细胞各吸 附一次(37?,1小时),分离血清,分装后置一80? 冰箱冷冻备用.用凝集反应和ELISA法测定抗血清 活性l,酶标仪(波长490n/l1)测定A值,若大于对 照组2倍A值为阳性. 2.2造模与检测兔血小板表面相关抗体(PAIgG)~j 给家兔耳静脉推注抗血清2.5IIll,对照组家兔 推注等量的生理盐水.实验前和造模后不同时间, 用ELISA法检测兔血小板表面相关抗体(PAIgG)的 含量.每次测定PAIgG须同时制备IgG(由豚鼠抗兔 血小板血清经DEAD一52”过柱”提纯)曲线.将 试验兔的标本测得的读数,从标准曲线中折算出 PMgG含量(ng/10’PL单位). 2.3血康口服液对免疫性血小板减少症家兔的防治 取家兔24只,随机分为3组,正常对照组,模型 组,血康口服液组(1.4ml/kg),每组8只,雌雄并 用.先给药3天第4天除正常对照组外,每兔于耳 静脉一次性推注抗血清2.5IIll,正常对照组家兔推 注等量生理盐水,同时每日灌胃(ig)给药,正常和模 型对照组等容量蒸馏水,连续ig8天.测定给药前, 注射抗血清后90min和第5天各兔的血小板数和 血小板表面相关抗体PAIgG. 3结果’ 3.1血康口服液对免疫性血小板减少症家兔血小 板的影响 表1结果表明,与正常组相比,模型组家兔在 造模90min和第5天的血小板数明显降低;与模型 ? 54?医学基础与药学研究 组相比,血康口服液可明显使免疫性血小板减少症家兔的I血小板数恢复至正常范围. 表1血康口服液对免疫性血小板减少症家免血小板数影响(×10?L,,?S,n=8) 与正常组对比”P<0.001,与模型组相比,P<0.05 3.2血康口服液对免疫性血小板减少症家兔血小 板表面相关抗体(PAIgG)水平的影响. 表2结果表明,与正常组相比,在造模后90 min和第5天模型组家兔血小板表面相关抗体明显 升高,血康口服液可明显降低家兔的血小板表面 相关抗体的水平. 表2血康口服液对免疫性血小板减少症家兔血小板表面相关抗体的影响(ng/10pl,(?s,n=7) 与正常组相比,P<0.001;与模型组相比,一P<0.001 4讨论Roleofplateletsinairwayimmediatehypersensitivityand 免疫性血小板减少症(简称,rI’P)患者大多存在乏 effectsofsodiumformulate.ChineseJournalofpha卜 力,饮食降低和出血等现象,免疫性血小板减少症家兔macologyandtoxicdodgy,1994,8(4):256 的状况与I临床症状相似,这是由于PAIgG的存在而导3AtnottJ.et.z.Blood.1987.69:1294 致血小板破坏增多,从而血/J,板减少,且PAIgG水平与4巴德年主编.当代免疫学技术与应用.北京医 血小板数呈明显负相关,与文献报道一致D,31,表明造模科大学中国协和医科大学出版社,1998.1l 是成功的.该模型有助于筛选药物和探讨免疫性血小5叶应妩,王毓三主编.全国临床检验操作规程. 板减少症的发病机理.本文表明血康口服液可明显提第二版,中国卫生部医药司,1997. 高模型家兔的血小板数,降低其血小板表面相关抗体6史敏言,姚立人等主编.免疫学基础与临床. (PAI{;G)水平,表明血康口服液对免疫性血小板减少症安徽科技出版社,1980:110,512 家兔具有明显的防治作用,其治疗机理尚待研究.7徐叔云,卞如廉,陈修主编.药理实验方法学. 北京:人民卫生出版.1985:93841 参考文献8阮长耿主编.血小板一基础与临床.上海科技 1詹文彦等.免疫血小板减少症家兔动物模型的出版社.1987:13242 建立.中国实验临床免疫学杂志,1992,4(5):17—209林清华主编.免疫学实验.武汉大学出版社, 2XUXiao—OU,ZHANGLi—fen,BIANRu—lian.1999., TheeffectsoftreatmentwithXueKangoralsolutiononimmune thromboeytopeniainrabbits AnhuiMedicalCollege,Hefei230061 LIHua,GONGChuan,KUANGLi—xiang Abstract:0etiveToexplorethatXueKangoralsolution(XK)potentiallytreatedimmunethrombocytope niain rabbits.MethodsArabbitmodelofimmunethr0mbocytopeniawasdeveloped. Rabbitswererandomlydividedintothree groups:thenormalcontrol,themodelandXKgroup.XKwasgivenintragastricallyatadoseof1.4ml/kgperdayfor eightdays.Thecirculatingplateletcountinperipheralbloodandthelevelofplatelet—associatedIgG(PA IgG)were measur~.ResultsTreatmentwithXKmarkedlyamelioratethedropinplateletcountandtheelevatedPAIgGofrabbits withimmunethromboeytopenia.ConclusionsXKisaneffectivetherapyforimmunethrombocytopeniainrabbits. KeyWords:immunethrombocytopenia;animalmodel;XueKangoralsolution