果糖二磷酸钠

果糖二磷酸钠 Guotang Erlinsuanna Fructose Sodium Diphosphate CHNaOP 406.06 6113122 CHNaOP 8HO 550.17 6113122 •2 本品为果糖-1,6-二磷酸三钠盐或果糖-1,6-二磷酸三钠盐八水合物。按无水物计算，含CHNaOP不得少于95.0%。6113122 【性状】 本品为白色或类白色的结晶性粉末;微有特臭，味微咸;果糖二磷酸钠(CHNaOP)极具引湿性。 6113122 本品在水中易溶，在乙醚、乙醇或丙酮中几乎不溶。 【鉴别】 (1)取本品适量，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液。另取果糖二磷酸钠对照品适量，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版二部附录?B)试验，吸取上述两种溶液各10µl，分别点于同一微晶纤维素薄层板(板厚约0.5mm)上，以正丁醇-冰醋酸-水-丙酮-10%氨溶液(35:20:22.5:15:7.5)为展开剂，展开后晾干，喷以盐酸间苯二胺乙醇溶液(取盐酸间苯二胺0.36g，加76,乙醇溶液10ml使溶解)，在105?加热30分钟使显色，供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液的主斑点相同;继续再喷以丙酮-12.5,钼酸铵溶液-盐酸-高氯酸(86:8:3:3)混合溶液，供试品溶液所显斑点的颜色与位置应与对照品溶液的主斑点相同。 (2)取本品约50mg，置坩埚中，加无水碳酸钠2g，混合后，炽灼至灰化，放冷，加水10ml使溶解，加硝酸使成酸性，滤过，滤液加钼酸铵试液，加热，即发生黄色沉淀;加过量氨试液，沉淀溶解。 (3)本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致(中国药典2010年版二部附录?C)。 (4)本品的水溶液显钠盐的鉴别反应(中国药典2010年版二部附录?)。 【检查】 酸度 取本品1.0g(以CHNaOP计算)，加水10ml溶解后，依法测定(中6113122 国药典2010年版二部附录?H)，pH值应为5.5,6.5。 溶液的澄清度与颜色 取本品1.5g(以CHNaOP计算)，加水10ml溶解后，溶液应澄6113122 清无色。如显色，与黄色、橙黄色或黄绿色2号比色液(中国药典2010年版二部附录?A第一法)比较，不得更深。 游离磷酸盐 取本品20mg(以CHNaOP计算)，精密称定，置25ml量瓶中，加水15ml6113122 使溶解;另精密量取标准磷酸盐溶液[精密称取经105?干燥2小时的磷酸二氢钾0.1433g，置 1 1000ml量瓶中，加硫酸溶液(3?10)10ml与水适量使溶解，并加水稀释至刻度，摇匀，临用时再加水稀释10倍，即每1ml相当于10,g的PO]8ml，置另一25ml量瓶中，各精密加钼酸铵4 硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液(取无水亚硫酸钠5g，亚硫酸氢钠94.3g与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸0.7g，充分混合，临用前取此混合物1.5g，加水10ml使溶解，必要时滤过)1ml，加水至刻度，摇匀，在20?放置30,50分钟，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录?A)，在740nm的波长处测定吸光度，按无水物计算，含游离磷酸盐(以PO计)不得4大于0.4,。 氯化物 取本品0.10g(以CHNaOP计算)，依法检查(中国药典2010年版二部附录6113122 ?A)，与标准氯化钠溶液3.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.03,)。 硫酸盐 取本品0.50g(以CHNaOP计算)，依法检查(中国药典2010年版二部附录6113122 ?B)，与标准硫酸钾溶液2.5ml制成的对照液比较，不得更浓(0.05,)。 有关物质 取本品，加水制成每1ml中含0.1g(以CHNaOP计算)的溶液，作为供试6113122 品溶液;精密称取6-磷酸果糖对照品适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为杂质对照品溶液(1);精密称取果糖对照品适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为杂质对照品溶液(2);精密称取6-磷酸葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为杂质对照品溶液(3);另取6-磷酸果糖对照品、果糖对照品、6-磷酸葡萄糖及本品适量，加水制成每1ml中各含6-磷酸果糖0.25mg、果糖0.25mg、6-磷酸葡萄糖0.25mg与本品2mg的混合对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版二部附录?B)试验，吸取上述5种溶液各5μl，分别点于同一微晶纤维素薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水-丙酮-10%氨溶液(35:20:22.5:15:7.5)为展开剂，展开，晾干，喷以间苯二酚乙醇盐酸溶液(取间苯二酚0.5g，加80%乙醇溶液100ml使溶解，加盐酸5ml，摇匀)，在105?加热5分钟使显色，立即检视。混合对照溶液应显示四个清晰分离的斑点。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，并分别应与杂质对照品溶液(1)、(2)或(3)主斑点的位置相同，其斑点颜色与相应的对照品溶液主斑点比较，不得更深(0.5,)。 水分 取本品，照水分测定法(中国药典2010年版二部附录?M第一法)测定，含水分不得过10.0%(CHNaOP)或应为24.0%,27.0%(CHNaOP 8HO)。 6113122 6113122 •2 铁盐 取本品1.0g(以CHNaOP计算)，加水35ml溶解后，加稀盐酸溶液3ml，过硫6113122 酸铵30mg与30%硫氰酸铵溶液3ml，加水稀释至50ml，摇匀，加正丁醇10ml，振摇，放置，醇层如显色，与标准铁溶液1.0ml制成的对照液比较，不得更深(0.001,)。 重金属 取本品1.0g(以CHNaOP计算)，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适量使6113122 溶解成25ml，依法检查(中国药典2010年版二部附录?H第一法)，含重金属不得过百万分之十。 砷盐 取本品2.0g(以CHNaOP计算)，加盐酸5ml与水23ml溶解后，依法检查(中6113122 国药典2010年版二部附录?J第一法)，应符合规定(0.0001%)。 蛋白质 取本品1.0g(以CHNaOP计算)，加水10ml溶解后，逐滴加入30%磺基水杨6113122 酸溶液2ml，不得产生浑浊。 异常毒性 取本品，加注射用水制成每1ml中含16mg(以CHNaOP计算)的溶液，6113122依法检查(中国药典2010年版二部附录?C)，按静脉注射法缓慢注射，应符合规定(供注射用)。 降压物质 取本品，加灭菌注射用水制成每1ml中含50mg(CHNaOP计算)的溶液，6113122依法检查(中国药典2010年版二部附录?G)，剂量按猫体重每1Kg注射1ml，应符合规定。(供注射用) 2 热原 取本品，加注射用水制成每1ml中含100mg(以CHNaOP计算)的溶液，依法6113122 检查(中国药典2010年版二部附录?D)，剂量按家兔体重每1kg缓缓注射6ml，应符合规定(供注射用)。 过敏反应 取本品，加灭菌注射用水制成每1ml中含100mg(以CHNaOP计算)的溶6113122液，依法检查(中国药典2010年版二部附录?K)，应符合规定。(供注射用) 无菌 取本品7.0g，加灭菌水50ml使溶解，用薄膜过滤法处理后，依法检查(中国药典2010年版二部附录?H)，应符合规定(供注射用)。 可见异物 称取本品5份，每份5g(以CHNaOP计算)，分别置洁净透明的适宜玻璃6113122 容器内，加水溶解并稀释至50ml，依法检查(中国药典2010年版二部附录?H)。5份供试品中，均不得检出明显可见异物。如检出微细可见异物，应不得过10个。如仅有1份不符合规定，另取10份同法复试，均应符合规定(供注射用)。 【含量测定】 取本品适量，采用适宜的酶法测定(附件1或2)。 【类别】 心血管系统疾病辅助用药;水电解质平衡类药。 【贮藏】 密封，在阴凉处保存。 【制剂】 (1)果糖二磷酸钠口服溶液 (2)果糖二磷酸钠片 (3) 果糖二磷酸钠注射液 (4)果糖二磷酸钠胶囊 (5)注射用果糖二磷酸钠 3 附件1. 混悬液酶试剂法 (1)试剂 盐酸三乙醇胺缓冲液(0.4mol/L，pH7.6):取盐酸三乙醇胺18.6g，加水200ml溶解，加乙二胺四乙酸二钠3.7g，溶解后，用2mol/L氢氧化钠溶液(约18ml)调节pH值至7.6，加水稀释至250ml。或取三乙醇胺17.5g，加水约200ml，加盐酸4ml，混匀，加乙二胺四乙酸二钠3.7g，溶解后，用2mol/L氢氧化钠溶液或2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.6，加水稀释至250ml。滤过后4?保存,一周内使用。 还原型辅酶?(NADH)溶液:取NADH二钠盐7mg，溶于2ml盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)中。4?保存。 3-磷酸甘油脱氢酶-磷酸丙糖异构酶混悬液(GDH/TIM):取3-磷酸甘油脱氢酶混悬液(GDH)与磷酸丙糖异构酶混悬液(TIM)适量，用3.2mol/L硫酸铵溶液(pH6)稀释成每1ml约含GDH310U和TIM1550U的溶液。4?保存。 醛缩酶混悬液(ALD):取醛缩酶混悬液(ALD)适量，用3.2mol/L硫酸铵溶液(pH6)稀释成每1ml中约含ALD90U的溶液。 (2)供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，加水溶解并制成每1ml约含0.2mg(按无水物计算)的溶液。 (3)测定法 精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)3.0ml，供试品溶液0.1ml，还原型辅酶?溶液0.05ml，甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml，置1cm吸收池中，摇匀，放置15分钟;另取盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)3.15ml，甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml，置另一吸收池中，摇匀，作为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录?A)，在340nm波长处测定供试品溶液的吸光度A，再在每池中加醛缩酶混悬液1 0.02ml，摇匀，于20?,25?放置约5分钟，在340nm波长处测定供试品池的吸光度，直至吸光度基本不变读取吸光度A。求出吸光度差值ΔA(ΔA=0.9937A-A)，按下式计算，即得。 212 ,,3.19，406.06，稀释倍数果糖二磷酸钠含量(%),，，1003 0.1，W6.29，10，2 式中 0.9937为3.17/3.19; 3.19为样品池中溶液的最终体积(ml); 36.2910为还原型辅酶?(NADH)的摩尔吸收系数; ， 2为果糖二磷酸钠反应系数; 406.06为果糖二磷酸钠(CHNaOP)的分子量; 6113122 0.1为供试品溶液加入体积(ml); W为供试品的取样量(mg)(以CHNaOP计算)。 6113122 4 附件2 固体复合酶试剂法 1(1)试剂 空白酶溶液:取固体复合酶(酶活力测定方法见注，活力应符合规定)60mg，用盐酸三乙醇胺缓冲液(取三乙醇胺17.5g，加水约200ml，加盐酸4ml，混匀，加乙二胺四乙酸二钠3.7g，溶解后，用2mol/L氢氧化钠溶液或2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.6，加水稀释至250ml。滤过后4?保存，一周内使用。)溶解并稀释至20ml。垂熔漏斗过滤，4?保存，两天内使用。 测定酶溶液:取空白酶溶液10ml，加还原型辅酶?(NADH)3.0mg，溶解后4?保存，两天内使用。 (2)供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，加水溶解并制成每1ml约含0.4mg(按无水物计算)的溶液。 (3)测定法 精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液2ml，测定酶溶液1ml，置石英吸收池中;另精密量取上述缓冲液2ml，空白酶溶液1ml置另一吸收池，作为空白，摇匀，静置15分钟，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录?A)，在340nm波长处测定吸光度A。各1池再分别精密加入供试品溶液0.1ml，摇匀，于20?,25?放置10分钟，在340nm的波长处测定，直至吸光度基本不变，读取吸光度A。求出吸光度差值ΔA(ΔA= A,1.0333A)，按下式212计算，即得。 ,,3.0，406.06，稀释倍数 果糖二磷酸钠含量(%),，，10030.1，W6.29，10，2 式中 3.0为加入供试品溶液前样品池中溶液的体积(ml); 36.29 10为还原型辅酶?(NADH)的摩尔吸收系数; ， 2为果糖二磷酸钠反应系数; 406.06为果糖二磷酸钠(CHNaOP)的分子量; 6113122 0.1为供试品溶液加入体积(ml); W为供试品的取样量(mg) (以CHNaOP计算)。 6113122 1注:固体复合酶的活力测定 固体复合酶 系指供果糖二磷酸钠含量测定专用的复合酶试剂，含醛缩酶(ALD，Aldolase)、磷酸丙糖异构酶(TIM，Triose-phosphate isomerase)和磷酸甘油脱氢酶(GDH，Glycerinphosphate dehydrogenase)。 复合酶活力系指每1mg酶每1分钟催化果糖二磷酸钠的μg数。每1mg固体复合酶活力应不得低于40μg。 试剂的制备 (1)盐酸三乙醇胺缓冲液(0.4mol/L，pH7.6):见含量测定项下。 (2)复合酶溶液:取固体复合酶0.1g，用盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)溶解并稀释至10ml。垂熔漏斗过滤，4?保存。 (3)还原型辅酶?(NADH)溶液:取还原型辅酶?6.5mg，用盐酸三乙醇胺缓冲液溶解并稀释至50ml。 5 (4)果糖二磷酸钠溶液:取果糖二磷酸钠0.3g(以CHNaOP计算)，用水溶解并稀释6113122 至10ml。 测定法 取石英吸收池两只，一只加还原型辅酶?溶液2.99ml和果糖二磷酸钠溶液10μl，作为样品池;另一只加盐酸三乙醇胺缓冲液2.99ml和果糖二磷酸钠溶液10μl，作为空白池，摇匀，静置5分钟，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录?A)，在340nm波长处测定吸光度。向样品池中加入复合酶溶液40μl，在20?,25?立即摇匀并准确记时，于1、2、3、4、5分钟分别测定吸光度，以时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，取近似直线部分的斜率(即平均每分钟吸收度的差值ΔA)按下式计算复合酶的活力。 406.06,,31000，，，36.29102， 复合酶活力,W 3式中 6.29 10为还原型辅酶?(NADH)的摩尔吸收系数; ， 3为反应溶液体积(ml); 406.06为果糖二磷酸钠(CHNaOP)的分子量; 6113122 1000为毫克转化为微克(μg)的系数; 2为果糖二磷酸钠反应系数; W为加入样品池中的复合酶溶液中含固体复合酶的毫克数(mg)。 复合酶活力系指每1mg酶每分钟催化果糖二磷酸钠的μg数(μg/分钟/mg)，应不少于40μg。 6 7