血凝抑制试验

血凝抑制试验 血凝试验( ) 血凝试验(HA) 和血凝抑制试验( ) 和血凝抑制试验(HI) 申杨帆 刘永红 陈 泽 孙 鹏 符 贵 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的 原理和操作方法 2.熟悉正确判定试验 结果并对 结果进行分析。 原理:血凝现象:有些病毒可凝 集某些动物(如鸡、鹅、豚鼠、 绵羊)和人的红 细胞(RBC) 血 凝:血凝素与RBC表面 相应受体结合，引起RBC凝集 血凝抑制试验:抗体与血凝素结 合，封闭血凝素，使之不能与 红细胞结合 二、实验试剂与器材 鸡红细胞 :用生理盐水配成1%红细胞悬液 4个血凝单位 鸡新城疫病毒 生理盐水 微量反应板、微量移液器、灭菌塑料吸头 三、操作步骤 (一)、血凝试验 )、血凝试验 在血凝板第一排的1-12孔加入25μl生理盐水。 在第1孔中加入25μl病毒，混匀后吸25μl到第2孔，如 此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃25μl;最后两孔(11、 12)为血凝素和空白对照。 3. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1-12孔中每孔加入25μl。 4.手工震荡，37?静置 手工震荡， ?静置30min (室温 分钟 )后观察结果 室温40分钟 后观察结果 手工震荡 室温 孔号 稀释度 生理盐 血凝素 1%鸡红 细胞 1 2 25 25 25 2 3 4 25 25 25 8 25 25 25 4 16 25 25 25 5 32 25 25 25 6 64 25 25 25 7 128 25 25 25 8 256 25 25 25 9 512 25 25 25 10 1024 25 25 25 11(+) 12(-) 弃 x 25 25 25 x 25 H A 37?静置30min (室温 分钟 )后观察结果 ?静置 室 温40分钟 后观察结果 室温 (二)、血凝抑制试验 )、血凝抑制试验 孔号 稀释度 生理盐 血凝素 1%鸡红 细胞 1 2 25 25 25 2 3 4 25 25 25 8 25 25 25 4 16 25 25 25 5 32 25 25 25 6 64 25 25 25 7 128 25 25 25 8 256 25 25 25 9 512 25 25 25 10 1024 25 25 25 11(+) 12(-) 弃 x 25 25 25 x 25 H A 孔号 稀释度 生理盐 待检血 清 4个单位 疫病毒 1%鸡红 细胞 1 2 25 25 25 25 2 3 4 25 25 25 25 8 25 25 25 25 4 16 25 25 25 25 5 32 25 25 25 25 6 64 25 25 25 25 7 128 25 25 25 25 8 256 25 25 25 25 9 512 25 25 25 25 10 1024 25 25 25 25 11(+) 12(-) 弃 X 25 25 25 25 x 25 25 H I 四、结果判定 ? 效价判定: 凝集特别显著:“，，，，” 凝集现象次之:“，，，” 凝集清楚可见:“，，” 稍显凝集者:“，” ? 血凝效价:呈“，，”凝集时的最高稀释 度。此时的稀释度即为1个血凝单位。 五、临床意义 血凝试验用途:?确定病毒的含量; ?计算病毒的血凝价，为血 凝 抑制试验做准备 血凝价:能使血球产生50%凝集的病毒 最高稀释度 血凝抑制试验用途: ?用于检测血清中抗体含量 用于检测血清中抗体含量; 用于 检测血清中抗体含量 ?鉴定病毒的型、亚型; 血凝抑制价:能完全抑制血凝素的 最高 血清稀释度即为该血清的血凝抑制价 ? 思考题 1、病毒凝集红细胞是不是一种特异的抗原 体反应,为什么, 2、血凝抑 制实验是不是特异的抗原抗体 反应? 为什么, 3、为什么加病毒液和红细胞悬液时 要反向 加, 4、血凝试验和血凝抑制试验中空白对照的 意义,