犬组织中艾司唑仑在甲醛溶液中的稳定性

犬组织中艾司唑仑在甲醛溶液中的稳定性 犬组织中艾司唑仑在甲醛溶液中的稳定性 法医学杂志2011年4月第27卷第2期 犬组织中艾司唑仑在甲醛溶液中的稳定性 原九喜,王玉瑾,负克明 (山西医科大学法医学院,山西太原030001) ? 117? 摘要:目的研究甲醛溶液保存的生物样品中艾司唑仑的稳定性犬以艾司唑仑37.6Ing/kg剂量 灌胃,2h处死,解剖取其心,肝,'肾,脑并分割为1g14"),分别放置于4%甲醛溶液中固定.用高效液相色谱法 测定各组织及甲醛液中的艾司唑仑含量一结果犬心,肝,肾,脑组织随着固定在甲醛溶液中时间的延长. 组织及从组织溶解到甲醛溶液中的艾司唑仑含量均降低,保存至63d时,心,肝,肾和脑组织中艾司唑仑检 出量分别为固定前的0.8%,1.7%,1.0%和2_2%.结论犬组织中的艾司唑仑会部分溶解到甲醛溶液中.艾 司唑仑在甲醛溶液中容易分解含艾司唑仑的生物样品应避免保存在甲醛溶液中 关键词:法医毒理学;艾司唑仑;甲醛;稳定性;犬 中图分类号:DF795.1文献标志码:Adoi:i0.3969~.issn.1004—5619.2011.02.009 文章编号:1004—5619(2011)02—01l7—03 StabilityofEstazolaminDogTissuesPreservedinFormaldehydeSolution YUANu—xi,WANGYu-jin,YUNKe—ming (SchooZo厂rensicMedicine,ShanxMedicalUniversity,Taiyuan030001.China) Abstract:0ectiveToinvestigatethestabilityofestazolaminbiologicalsamplespreservedinf ormaldehyde solution.MethodsThedogwasgivenintragastricadministrationofestazolamwithadoseof3 7.6mg/kg andkilled2hlater.Heart,livm',kidneyandbrainofthedogwereeutupinto1gandpreservedin4% formaldehydesolutionrespectively.Thecontentofestazolaminbiologicalsamplesandformaldehydesolu— tionwereanalyzedbyHPLCatdifferenttimes.ResultsThecontentofestazolaminheart,liver,kidney andbrainorinformaldehydesolutionreduce(1graduallyfollowedwiththeextentionofpreservationtime. Atthe63thday,estazolamcontentinfoUFtissueswere0.8%.1.7%.1.0%and2.2%oftheoriginalcon. tentrespectively.C.onclusionEstazolamintissuescandiffuseintoformaldehydesolutionanddecomposed quickly,SObiologicalsamplescontainedestazolamshouldnotbepreservedinformaldehydesolution. Keywords:forensictoxicology;estazolam;formaldehyde;stability;dogs 艾司唑仑(estaZOlan1)又名舒乐安定.具有抗焦 虑,镇静,催眠,抗惊厥,抗癫痫等作川,长期服用可出 现依赖性由于该药催眠效果好.起效快.常被用以麻 醉抢劫近年来误用或滥用引起中毒的案例较多….口 服大剂量艾司唑仑自杀的事件也时有报道在法医 学鉴定实践中.由于甲醛活性较强.可能会与被检组 分发生反应.因此对中毒案件的检验.一般认为应取 新鲜组织和体液.冷藏保存.不宜使用甲醛溶液将其 固定但在实际工作中.常遇到解剖时未发现明显中 基金项目:山西省自然科学基金资助项目(200701l105):"十 一 五"国家科技支撑计划项目(2007BAK26B05) 作者简介:原九喜(1985一),男,山西河津人,硕士研究生.主要 从事毒物与毒品及方法学研究;E-mail:vuanilUXi@siHa.coin 通信作者:王玉瑾,女,博士,教授,博士研究生导师,主要从事毒 物与毒品分析鉴定及方法学研究:E—mail:wangyj529@l63.COHI 毒迹象.没有留取新鲜检材.而尸体经甲醛处理后又 怀疑中毒.这时.甲醛同定的组织就成为唯一可提供 化验的检材因而法医毒物分析T作者就面临能否从 甲醛固定的组织中检出毒物的问Tracv等曾研究 了10种苯二氮革类药物在甲醛溶液中的稳定性.本 实验则对中毒犬组织中艾司唑仑在甲醛溶液中的稳 定性进行研究.以期为实际检案提供参考 1材料与方法 1.1试药与试剂 艾司唑仑,地西泮对照品购自公安部物证鉴定 中心:艾司唑仑片购白天津太平洋制药有限公司(国 药准字H12020291):分析纯甲醛(HCHO质量分数 37%,40%)购白天津市红岩化学试剂厂.与蒸馏水按 1:9稀释而获得4%甲醛溶液:分析纯无水乙醚购自 天津市东丽区天大化学试剂厂:色谱纯甲醇购自美 ? 118? 国Tedia(天地)试剂公司:纯净水购自杭州娃哈哈集 团有限公司 1.2仪器与分析条件 1.2.1仪器 SPD一20A高效液相色谱仪(日本岛津公司), BP121S精密电子天平(青岛海洋化工厂).CV33超声 波细胞粉碎机(南京新辰生物科技有限公司). 1.2.2分析条件 色谱柱:YWG—Cl8柱(4.6mm~250nlm,5m),柱 温25?,流动相:(甲醇):V(水)=60:40,紫外检测 波长:254nlTl,流速:1mL/min,进样量:20L. 1-3染毒与取材 雄性杂种犬2只.购自山西医科大学实验动物中 心,体质量为(15+0.5)kg,一只作为实验犬,另一只作 为空白对照犬.实验前隔夜禁食.实验犬以37.6mg/kg 艾司唑仑灌胃染毒给药后2h(血药浓度达峰值),心 脏空气栓塞将犬处死,解剖取其心,肝,肾,脑组织,迅 速把以上组织各分为55份(1g/份).置于3mL4%甲 醛溶液中,保存于常温(20,25?)条件下分别于样 品固定前(0d)及固定1,7,14,21,28,35,42,49,56, 63d进行样品处理后分析空白对照犬同法处死取材 1.4样品处理 取固定的犬组织1g或甲醛溶液3mL,加蒸馏水 1mL,加入1.0mg/mL的内标地西泮溶液5L,固体 检材超声细胞粉碎匀浆3min.加5%NaOH溶液和 磷酸缓冲液调pH:9,加入无水乙醚5mL萃取,振荡 15min,1558xg离心10rain.取乙醚层,同法再萃取 一 次,合并有机相.4OqC恒温水浴下挥干.残留物用 300L甲醇定容,进高效液相色谱仪分析.以内标一 工作曲线法对艾司唑仑进行定量 1.5工作曲线的制备 取空白肝1g若干份.分别添加对照品艾司唑仑 及内标地西泮各适量,配制成含有艾司唑仑0,O.1,0.2, 0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0,32.0g和地西泮5p~g/g 的系列质量分数肝组织样品.按1.4项方法处理并 检测.以艾司唑仑质量分数(g)为横坐标(),艾司 唑仑与内标地西泮的峰面积比为纵坐标fY)进行线 性回归. 取空白甲醛溶液3mL若干份.分别添加对照品 艾司唑仑及内标地西泮各适量.配制成含有艾司唑仑 0,0.05,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0~zg/mL及内 标地西泮5p~g/mL的系列质量浓度甲醛溶液样品.按 1.4项方法处理并检测 1.6统计学处理 用SPSSl1.5软件对实验数据进行统计学处理. JournalofForensicMedicine,April2011,Vo1.27,No.2 所得数据用示采用SPSS11.5软件进行单因 素方差分析检验水准O/:0.05 2结果 2.1高效液相色谱图 空白犬肝,固定在甲醛溶液中的肝及固定肝的甲 醛溶液提取物的高效液相色谱图分别见图1,3.艾司 唑仑和地西泮的保留时间分别为13.107,28.939min. 时间/rain 图1对照犬肝提取物的高效液相色谱图 时间/min 1:艾司唑仑:2:地西泮 图2甲醛液固定肝第28天时肝提取物的高效液相色谱图 时间/min 1:艾司唑仑:2:地西泮 图3甲醛液固定肝第7天时甲醛液提取物的 高效液相色谱图 2.2工作曲线 肝中艾司唑仑回归方程为y=0.1026x+0.0621, 线性范围0.1,32.0g,相关系数(r)=0.9913.检出 限(LOD)为0.05p~g/g. 甲醛溶液中艾司唑仑回归方程为y=0.1555一 0.0124,线性范围0.05,16.0I~g/mL,相关系数(r)= 0.9964.检出限(LOD)为0.01tzg/mL. 2.3组织和甲醛溶液中艾司唑仑的含量 在甲醛溶液固定前及固定1,63d时.组织和甲醛 溶液中艾司唑仑的检出量及二者之和见表1 法医学杂志2011年4月第27卷第2期 表1不同保存时间组织(1g)和甲醛溶液(3mL)中艾司唑仑的检出量 ? 119? (n=5,X+S,txg) 注:与同组织中固定前(0d)相比,P<0.05 3讨论 本实验采用高效液相色谱法以地西泮为内标, 在选定条件下艾司唑仑,地西泮与其他杂质峰分离良 好.且灵敏度高.重现性好,同时检材用量少,操作简 便,快速. 曾有文献报道.肝中地西泮在甲醛溶液中不稳 定.特别是在酸性保存环境中降解加快『61.一些苯-2氮 革类药物及其他安眠药在甲醛溶液中易降解17-8]. Tracv等l3l报道阿普唑仑,地西泮,咪哒唑仑,普松西 泮,三唑仑,氟硝西泮,劳拉西泮,氯氮革,氟西泮及奥 沙西泮等10种苯二氮革类纯品在不同酸碱性甲醛溶 液中均不稳定.保存至30d均发生不同程度的降解. 本研究选用法医检案中常用的心,肝,肾,脑作为实验 对象.考察艾司唑仑在这4种组织及甲醛溶液中的降 解情况从表1可见,犬12,,肝,肾,脑组织随着固定在 甲醛溶液中时间的延长.组织中艾司唑仑含量与固定 前相比均有显着降低(P<0.05),保存至63d时,艾司 唑仑含量分别为固定前(0d)的0.8%,1.7%,1.0%和 2.2%当犬组织固定在甲醛溶液中1d时,即可在甲 醛液中检出艾司唑仑.说明犬组织中的部分艾司唑仑 能溶解到甲醛溶液中.但随着组织固定在甲醛溶液中 时间的延长.组织和固定组织的甲醛溶液中的药物检 出量之和呈现降低趋势.表明艾司唑仑在甲醛溶液中 容易分解.这与Tracv等报道的一些苯二氮革类纯 品在甲醛溶液中不稳定的结论相吻合. 研究结果.在涉及艾司唑仑的法医学鉴定中, 应避免将检材保存在甲醛溶液中.若确需分析已经保 存在甲醛溶液的检材中药物含量,应及早将检材及甲 醛溶液一并提取检测.以最大限度提高药物的检出量. 在本次实验中.随着时间推移,在艾司唑仑含量 减少的同时有较多不明物质出现在色谱图中,可能是 艾司唑仑的降解产物【.因此还需后续实验对分解产 物进行分析.同时本研究未考察不同pH及不同体积 分数的甲醛溶液对艾司唑仑降解的影响同,也是后续 研究的方向 参考文献: [1]AdamowiczP,KalaM.Date—rapedrugsscenein Poland[J].PrzeglLek,2005,62(6):572-575. 『21马立芝,李韧,茹志涛,等.急性大量艾司唑仑中毒6例 救治及心理介入治疗体会临床急诊杂志,2008,9(5): 313—314.(下转第124页) ? 124? [4] [5] [6】 [7] [8] [9] study[J].EurJClinNutr,2004,58(1):24—31. 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(收稿日期:2010—09,08) (本文编辑:刘伟)