人甲状腺未分化癌细胞系TAK抗肿瘤药物的敏感性试验

人甲状腺未分化癌细胞系TAK抗肿瘤药物的敏感性试验 ?,,? 生园地复痘堕渔盘查～,螋笙笙～?鲞笙～塑堕亟』,旦坠,～虫旦～～塑:～?垒,:, ,,四人甲状腺未分化癌细胞系(,,—,)抗肿瘤药物的敏感性试验孙辉 卜丽莎张德恒 【摘要】选择有效的化疗药物是肿瘤化疗成功的关键，本研究以人甲状腺未分化癌细胞系,, —,为研究对象，利用,,,比色法进行了,种化疗药物的敏感性试验，以药物半数抑制浓度(，,,,)进行。,,—,对抗癌药物敏感性由高至低依次为长春新碱、顺铂、米托蒽醌、平阳霉素、阿霉素、足叶乙甙、氟尿嘧啶。环磷酰胺体外无效。此结果为甲状腺未分化癌治疗的实验研究和临床化疗的制定提供了参考依据。 【关键词】 化疗药物敏感试验 ?,比色法 甲状腺未分化癌,,,,;,,伽,, ;,,,,,?,,,,,,,, ,, ,,,粕,,,,,,,,,; ,,)叩,,, ;,,;,,;,?，,,, ,,,,,,, ,,,，,, ，。,,,,，,,,,, ,,,,,,(脚,，,”四,吖?(切删讼,鼠聊了，,, ,，,，,,，,池, ,拟？‖，,,懈而删,,,,,,) 【,,,纳，;,】 ,, ,, ,,,,,,,,, ,,出, ,, ;;, ,,,,【,,,,, ;,,,烈,,冽,,,:,; ,,,,,,,,,,),,,,,,, ,, ;,,;,,(,,?舢,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,; ,,,,(, ;,,;,, ;,,, ,,,, ,,—, ,,, ,,,,;,,,、，，,,, ,仃, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,【, ,, ，,岛(,,, ,,？,,,;, ,, ,,,,黜,,,,,,, ,;;(),,,,, ，(、椰,,, ,,,;,,,,,,,，,,,—,,,,,,咖，,,,:(),—,,,,,,,，,,,,,,,,,,;,,，,,,,枷,;,,，,研)(),,,,，,一,，删,;,,(,,;,)，】,,,,,,,,,, ,,, ,, ,,,,;,,;,, ,;,,,,一,, ,, ,,,,)(,,,,(砌,,,,,,,, ，酷, ,, ,,即,,,,,; ,,,,,,伽,;,, ;,,,,,,, ,,—, ,, ,,,,, ,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,, ,,,?,,,(),,,,,,【), ;,朗,,,,,,,,,,,; ,;,朗,,( 【,,,川?,,,】;,,,,【),,,,,,,,,,,, ,,,?;,,(),,,,,, ,,; ,,,,, ,,,,,,州,; ,,,,,,, ;,,;,, 人甲状腺未分化癌是增殖能力和转移能力较强的一类 一天津河北制药厂，阿霉素(,,),)一日本明治会社，米托蒽肿瘤，我国目前对其基础与临床方面的研究工作不多。,,,, 醌(,,,、)一四川升和制药有限公司，环磷酰胺((,),)一上海年,,,,,等建立了人甲状腺未分癌的第一个细胞系，以后可 华联制药有限公司，足叶乙甙(,,—,,)一连云港恒瑞制药见人甲状腺未分化癌细胞系建立的零星报道，目前已建系的 厂，氟尿嘧啶(,一,,)一上海曙光药业有限公司，长春新碱有,,,—,,,、,,?,,,等，我国始终未见建系或利用人甲状 (,(、,)一上海第十二药厂，,,，,,,,,, ,。,,,, ,为美国(;，,(腺未分化癌细胞系进行实验研究的报道。本研究首次由日 (,)产品，噻唑兰(,兀、)、二甲基亚砜(,,,,)、胰蛋白酶、胎本国东北大学医学部第二外科引进人甲状腺未分化癌细胞 牛血清均为美国,，(,,,产品。系,、,—,。利用该细胞系进行抗癌药物的敏感性研究，以 ,(,(,主要实验仪器及用品判定该细胞系能否作为抗肿瘤治疗的体外实验模 型，同时探 ,,孔塑料培养板、,,,,培养瓶、离心管均为,,,;产品。讨该细胞系生长特点及实验条件，为下一步实验奠定基础。 (弛孵箱(日本(:,,一,,型)，倒置显微镜(日本(),,,,,,,,， ， ,，,一,型)，紫外分光光度仪(日本,一,,,()型)，酶标检测,材料与 仪(日本,,一,,型)，混合振荡器(日本,,一,型)，离心机,(,材料 (日本,,—,,,型)。,(,(,细胞来源人甲状腺未分化癌细胞系,,—,，由日 ,(,方法本国东北大学医学部第二外科惠赠。采用含,,,胎牛血清 ,(,(,抗癌药物敏感性试验(,,,法,, ,)采用对数生长的,,,,,,,,, ,,,,,,, ,(,,)培养液，,,?、,,,(),孵箱进行 期的,,—,细胞经,(,,,胰酶消化，用,,培养液调制成培养。 单细胞悬液，按一定浓度接种于,,孔培养板中，每孔种植,(,(,(,药物顺铂(,,，),)一锦州制药厂，平阳霉素(,,,) ,,,,，待细胞完全贴壁后，分别加入不同浓度的药物,,曲。, 种不同药物的实验剂量按国际常用的梯度稀释法，用,,,稀 释至所需浓度，各孔加入药物后的最终浓度为,(,，，,(,，,( ,，,,，,(),越,,,,。每个浓度设,个平行孔，同时设无药细胞 作者单位:自求恩医科大学第三临床学院外科(长春,,,,,,) 对照孔和空白对照孔。,,?、,,,,孵箱作用,,,，在结束 万 方数据 生基丝壅瘟堕迨盘查,,鲤堡筮～?鲞筮～塑尘丛垒』,立量型～婴旦造型:～三垒受:, ,,四 ?,,?培养前,,加入,,,(,,,,,,,)溶液,,,,矾，终止作用时吸 ,结果弃培养液，加入,,,,(,(,,,,,孔)，震荡,,,,,，将培养板放置酶标仪中，测定,,,啪波长处光吸收(,,)值，以空白对照 ,(, ,，兀、法检测不同抗肿瘤药物对,,—,细胞系的影响孔调零，与对照组比较，求出各药不同浓度的抑制率。细胞 在相同培养时间内(,,,)，,种不同抗肿瘤药物对,,—抑制率(,),(对照组平均,,值一实验组平均,,值)倒 ,细胞系的抑制作用中，,种显示浓度依赖的细胞毒作用。 照组平均,,值×,,,,。 根据细胞抑制率绘制曲线见图,(,，求出，,,,值(,孵,,,)比较 用,,,,,统计软件包求出各药物抑制率为,,,时的药 各药抗肿瘤效果，依次为,,, ,(,,、(、,，), ,(,,、,，, ,(,,、物浓度，即，,,,值。 ,,, ,(,,、,,, ,(,,、??一,, ,(,,、,一,,在所实验范围 ,(,(,光镜观察倒置显微镜下观察不同药物及浓度对 内未达到,,,抑制率，而,,,始终无效。,,—,细胞的影响。 邑 僻 芒 臣,一习到 覃 ? , ,( ( ( ( ,，(, 舯? ? ?跚?, ， ,，,,『, , ,(们 , , , ,, ,,, 药物浓度(,,,,,) 图,药物对,,—,细胞抑制率 图,药物对,,—,细胞抑制率,(,光镜下观察药物对,,—,细胞系的影响 的对照孔可见细胞为梭形、贴壁生长良好，见图,。加入药物 加入不同浓度的抗肿瘤药物后,,—,细胞培养,,,，在 后，有效浓度以上细胞形态发生改变，图,为加入,,,,，耀,加入,,,前对培养细胞进行倒置显微镜下观察。结果发现 ,,后的细胞像，细胞变圆、色暗、没有折光性、悬浮于液体中，加入,,,、,,,,、,，,、,,,、,,,、,,—,,后随着药物浓 几乎全部死亡。度的增加，,,—,细胞死亡数目电逐渐增多。未加入药物 ,,—,细胞未经治疗培养,,小时，×,,, 图, ,,—,细胞,,,,(,旭,，,,)治疗后培养,,小时，×,,, ,,—,进行体外药物实验。,讨论 本 实验选用临床中常用,种抗癌药物【,,，进行药物敏感 甲状腺未分化癌是甲状腺恶性肿瘤中进展快、恶性程度 性实验。此,种药物作用于细胞周期的不同时相。根据本高的恶性肿瘤，手术和放、化疗效果不理想，几乎所有患者均 实验结果，用，,,,值评价各药物对肿瘤细胞作用的强弱，依在诊断后一年内死亡,, ,。因此，选择有效的抗癌药物和有效 次为,(、,、,,,,，、,，,、,,,、,,,和,,—,,。在上述药的治疗方法，有着重要的临床意义。应用,，,法进行肿瘤 中,,,、,,,,、,，,具有较强的细胞毒作用，但药物本身的细胞的体外敏感实验的研究，已见骨肉瘤、肺癌、胃癌、鼻咽 毒副作用也相当重，常使患者不能连续应用到有明显疗效时癌等许多报道。但迄今为止，甲状腺癌在此方面报道甚 就被迫终止。因此，目前迫切需要寻找一种用量小、副作用少旧,，目前已见报道的人甲状腺未分化癌细胞系,株【,哪,， 轻的药物和治疗方法是提高甲状腺癌治愈和好转率的关键。皆为国外所建，本研究首次由日本国东北大学引进的细胞系 ,一,,和,,,在所试药物浓度范围内，未达到,,,的抑制 万 方数据 ?,,? 生国丝虚疸堕渔盘查,,螋堡箜～』鲞(筮～翅,垫地』亟～～至幽～坐墅～～型:～』垒受:, ,,嫂 率，提示,一?,对该肿瘤基本无效。而,,,实验结果与临 ,佐佐木文，石村美树，高田尚幸(,耵蛔法芑用,、恐甲状腺癌床疗效不符〔,,，这可能与,,,需在体内经肝脏微粒体转化 汇对亨如抗癌剂感受性试验(癌岂化学疗法(,,,,，,,:,,,,后才能对肿瘤有较强的杀伤作用，故体外实验无法评价其抗 , ,,,,,,,，,,珏;,、,,,，,,幻,,,，,, ,,(,毫,,,,,妇,,,, ,,,,,,,,,,— ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,商, ;,,,,, ;,, ,,,, ,,,,,;,,,, ,,,,,,, ,,州, ,,;,肿瘤活性。 ,,,, ,,, ;,,,,,,,,(,,,;,,(,,,,，,,:,,,, 本实验结果提示，,,—,细胞系对常用抗肿瘤药物的 , ,,, ,，,,,,,,,,, ,，,,,,,, ,，,, ,,(,,,,,，(,,,,,, ,, , ,,猢反应，与临床用药的疗效反应基本平行，可作为筛选抗肿瘤 ,,,穑欤幔螅簦椋?,,,,,。,, ;,,;,, ;,,, ,,,, ,,;,,,,,, ,,删,,;,,, ,,,,,—,,,—药物、检测药物细胞毒性作用的体外实验模型，为下一步体 ,,,,,,, ,,;,,, ,, ,,,,,,,, ,, ;脚,,,,, ,,啊,,, ;,,,(,,, ,,,, ,,,,，内实验提供了参考数据。 ,,,:,,, , ,,,,, ,，,,,？,, ,，,,,,,,, ,，,,,,,(,,,,,,,,,，,,锄, ;,搦;,商,,,汹,参考文献 ,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, , ,,, ,,,,，,,,,; ,,,,,,,, ;眦,?,, ;,，, ,,,,( (髓仃一,,,),,,;,榔(,,;,,,, ,,?,,,,,,，,,,,，,,:,,,, ,,,,,,, ,，,,,,, ;,,,,,,,,,,; ,,鞠, ,,, ;,,,,,,,, ,,,叭, ,,, ,,,( ,小林哲郎，清水雅弘，玉本康博(甲状腺未分化癌力集学力治疗( ,,,,,;,,,,,;,,疏,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,, ;,,,,,,,;,,,鼬,,,,,，, ,,,,?, 内分泌外科，,,,,，,:,,, ,,,,划, ,,,,(,,:,, (,,,,—,,—,,收稿?,,,,—,,—,,修回),田口哲也，芝英一， 伊豆正明(甲状腺未分化癌转土扩甲状腺原发 (编辑 陈会欣) 恶裕桑?,，?肿忙对寸如治疗战略(癌邑化学疗法，,,,,，,,:,,,,甲减心包积液误诊为结核性心包炎,例李嘉萍, 刘秀丽„金陶,叶文慧, 李辉, 患者男，,,岁。因胸闷，心前区不适经我院门诊以 状腺生,,毫克,日，每三天加量,,毫克。,周后加至,,,毫“心包积液”收入院。简单病史:胸闷，心前区不适，气短,个 克,日时，病人心包积液减少至微量，巩固治疗一周，病人心月，无咳嗽、咳痰及明显的心前区疼痛，无午后低热，盗汗等 包积液完全消失，心率恢复正常，仃,、兀,、,,,、血常规恢症状。入院时查体:体温,,(,?，心率:,,,次份，呼吸:,, 复正常，病人出院，继续甲状腺激素替代治疗。次,分，血压:,,(,,,,,,),。病人轻度贫血貌，颈静脉充盈，双 讨论:心包积液在临床上常由结核、肿瘤、尿毒症、低蛋肺无异常，心音低而遥远，节律整齐，各瓣膜区未闻及病理性 白血症等原因所致。单纯以心包积液为突出现的甲减很杂音，腹无异常，周身无凹陷性浮肿。辅助检查:心电图呈窦 少见。该病人除心包积液外，其他甲减的表现很少并且症状性心动过速，电轴左偏，,,,左肢导低电压。心脏彩超:心 较轻也是造成误诊的原因。在诊治中我们认为:?凡有心包包积液(中等量)，左心肌肥厚。血常规:白细胞,(,×,,,, 积液的病人，均应想到甲减的可能。?如仔细检查多可发现,，红细胞,(,×,,,,几，血红蛋白:,,,,,,，胸透无异常所 甲减的其他表现。?病人由于心包积液导致心输出量减少，见。入院诊断:结核性心包炎。给予抗痨治疗,,天，病情无 通过反射引起心动过速而掩盖甲减的心动过缓症状，在临床缓解，病人贫血貌加重，并述手及面部肿胀感。化脸甲功: 上应予以注意。,,,,,,,,,,，,,,,,,(,,,,,，爪;,，,,，,,,，复查血常规: (,,,,—,,—,,收稿)白细胞,(,×,,,,,，红细胞,(,×,,眨,,，血红蛋白,,,,,,， (编辑杨丽芬)血小板,,,×,,,,,。(纠正诊断:甲减性心包积液。口服甲 作者单位:,(吉林省吉林市中心医院内分泌科(,,,,,,); ,(吉林市昌邑区保健院;,(永吉县卫生职工中专 ,(吉林省人民医院 万 方数据.