去甲万古霉素血药浓度测定

去甲万古霉素血药浓度测定 中国临床医蔼研究杂志2006年总第162期 实验研究 去甲万古霉素血药浓度测定 江苏省扬州市第一人民医院制荆室(225001)焦志铁张树倩 摘要目的:建立测定去甲万古霉素血药浓度的方法.方法:采用反相高效液相色谱 法,分析柱为KromasflC.色谱柱,流动相为甲醇 - 0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH:3.2),比例为14:86,紫外检测波长外280nm,实验 数据用HW~2000色谱工作站处理,以蜂面积定 量.结果:该方法在3.645~,g/mlN69.984g/ml间线性关系良好,相关系数 =0.9998(n=5),血浆最低检测浓度为3.645~,g/ml(S/N)3),日 内,日问RSD均<i0%.结论:此方法简便,快速,准确,适用于临床血药浓度监测. 关键词去甲万古霉素血药浓度高效液相 AbstractObjective:Establishamethodfordeterminationofnorvancomycinplasmaleve1.Methods:Theauthorapplied themethodofRP-HPLC.ThesamplewasseparatedonKromasilC18columnwithamixtureofmethanoland0.05mol/L KH2PO4buffersolution(14:86)asthemobilephase.TheUVdetectorwavelengthwas280nm.Theexperimentdatawere dealtwithHW-2000chromatographicworkstationandcalculatedbypeakarea.Results:ThelinearityWasobtained withintheratngeofnorvancomycinconentrationsfrom3.6450g/mlto69.9840g/ml,r=0.9998(n=5),theminimalinspect levelwas3.6450g/ml,theintra-and—inter— dayRSDwerelessthan10%.Conclusion:Themethodwasrapid,simpleand accurate.whichcouldbeusedinclinicaltherapeuticdrugmonitoring. KoywOrdsnorvancomycinplasmaconcentrationHPLC 去甲万古霉素(norvancomycin)是我国研制成功的多肽类抗生 素,主要用于严重的革兰阳性菌感染,特别是MRSA,MRSE菌株 所致的感染.由于其可能发生耳,肾毒性等不良反应,故使用时应 监测血药浓度[1-21.本研究旨在建立适用于我院,快速准确的去甲 万古霉素血药浓度测定方法,为临床个体化给药设计提供依 据. 1与方法 1.1材料 1.2药品与试剂去甲万古霉素品(中国药品生物制品检 定所提供,批号3389302);甲醇(色谱纯,Merck);磷酸,磷酸二氢 钾,三氯乙酸(均为分析纯.国产);一级纯化水(MiUiporeDirect—Q 一 级水机生产). 1.3仪器高效液相色谱仪(日本岛津有限公司):LC—lOAD型 输液泵,SPD—IOA型紫外检测器:7725i型手动进样器(美国 Rheodyne);HW一2000色谱工作站(上海千谱软件有限公司);飞 鸽牌高速离心机(上海安亭科学仪器厂);飞鸽牌低速离心机(上 海安亭科学仪器厂);微型涡旋混合仪(上海沪西分析仪器厂); MilliporeDirect—Q型纯水机(美国Millipore有限公司). 1.4方法 1.5色谱条件色谱柱:KromasilCIB(250×4.6mm,5um);流动 相:甲醇一0.05mol/LKH2PO(pH=3.2),比例为14:86;检测波长: 280nm;灵敏度:0.01AUF;流速:lml/min;柱温:35?;进样量: 20l.实验数据用HW一2000色谱工作站处理,以峰面积定量. 1.6标准储备液精密称取86.4mg去甲万古霉素标准品(含量 为81%)于50ml容量瓶中,加纯化水稀释至刻度,配制成 1399.68eCml的储备液A.取储备液A各lml于两个10ml容量 瓶中,分别用纯化水,空白人血浆定容,得浓度为139.968rCml 水标样B和血浆标样C.以上溶液均置于4~C冰箱冷藏备用. 1.7血样处理取待测血浆100I于塑料离心管中,加入10% 三氯乙酸水溶液100l,30s涡旋混匀,沉淀蛋白,再加100l 流动相,30s涡旋混匀;高速离lOmin,15000r/min;取上清液进样, 20l测定.如进针次数较多,可增加血浆用量.沉淀剂,流动相用 量相应增加,比例为hhl. 2结果 2.1色谱分离与专属性在上述色谱条件下分别用去甲万古霉 素水标溶液,空白血浆,空白血浆加入去甲万古霉素标准样品和 病人服用去甲万古霉素后血浆样品,按血样处理后进行测定,结 果见图1,4. 一 i!一!望. 1去甲万古霹索水标样色谱幽图2空白血浆色谱图 :暑"?协?n"?"厂 2 罔3去甲万占霉素【fn浆标样鞫4病人静滴甲占霉素后血样 色谱嘲色潜剐 2.2血浆标准曲线取适量去甲万古霉素血浆标样C,用空白血 浆分别稀释配成浓度为69.984,55.987,46.656,34.992,23.328, 11.664,7.290,5.071,3.645g/ml的系列血浆标准晶,取上述系列 浓度各100l于塑料离心管中,按血样方法处理,上清液直接进 样.20l测定,以峰面积定量,每隔几天做一组,结果见1. 表1去甲万古霉素不同血浆浓度的峰面积 以均值峰面积(Y)对浓度(x)线性回归得方程:Y=835. 230X一1175.194,r=0.9998,线性范围为 3.645g/m1~69.984g/ml,最低检测浓度为3.645g/ml (sm~3).血浆标准曲线见图5. 面欺Y ?lt?till轴,.鼍-幅砷弭lo'IT.再浓艘X(gg/ra1) 圈5l击甲万古I蓐素血浆标准曲线图 2.3进样精密度取适量去甲万古霉素血浆标样c,用空白血 浆分别配成浓度为69.984,34.992,5.071g/ml的血浆标准品,各 取200l于塑料离心管中,按血样方法处理,上清液直接进样, 20l测定,各浓度重复进样5次,以峰面积定量.高,中,低浓度 的RSD分别为3.30%,3.53%,4.o4%. 2.4血样处理的重现性取适量去甲万古霉素血浆标样C.用空 白血浆分别配成浓度为69.984,34992,5.071g/ml的血浆标准 品,每种浓度各取5份,每份100l于塑料离心管中,按血样方 法处理,上清掖直接进样,20l测定,以峰面积定量.高,中,低浓 度的RSD分别为1.49%,2.80%,5.79%. 中国临床医药研究杂志2006年总第162期 2.5精密度 2.5.1日内变异取适量去甲万古霉素血浆标样c,用空白血浆 分别配成浓度69.984,34.992,5.071g/m1的血浆标准品,三个浓 度在同一天内分别于第0,2…468,10小时各取100l于塑料 离心管中,按血样方法处理,上清液直接进样,20l测定,以峰面 积定量计算其日内变异.结果见表2. 表2去甲万古霉素日 2.5.2日间变异连续5 c,配制成浓度为69.984,34.992,5.071g/ml的血浆标准晶,各 取100l于塑料离心管中,按血样方法处理.上清液直接进样, 20l测定,以峰面积定量计算其日问变异.结果见表3. 表3去甲万古霉素日问峦异 2.6I旦l收翠 2.6.1绝对回收率取适量去甲万古霉素水标样B,用流动相分 别配成浓度为69.984,34.992,5.071g/ha的水标样品,取适量去 甲万古霉素血浆标样c,用空白血浆分别配成与水标相同浓度即 69.984,34.992,5.071g/ml的血浆标准品.各浓度水标,血标分 别取100l于塑料离心管中,按血样方法处理.清液直接进样, 各三针,20l测定,以峰面积定量. 绝对回收率(%)=(血浆标样峰面积/水标样峰面积)x 100%.结果见表4. 4去甲万古霉桑绝对匣 2,6,2相对回收率对日内变异测定的不同浓度峰面积数据用 去甲万古霉素血浆直线回归方程计算其浓度,相对回收率(%)= (实测浓度/理论浓度)x100%,结果见表5. 表5去甲万古霉素相对回收: 2.7—20?贮存的稳定性取适量去甲万古霉素血浆标样c,平 行配制不同浓度血浆标样多份,浓度分别为69.984,34.992, 5.071g/ml,其中一份于当日测定,其余放入一20'12冰箱冷冻,并 分别于第10天,第16天,第21天取出冻融后按血浆样品处理测 定,结果见表6. 34.99229244298803095131419303743.26 ?;QZ2鲤?Z?=236盟!:垦2 3讨论关于去甲万古霉素的检测波长.本实验发现,去甲万古 国植床医药研究杂志2006耳患第一 霉素水溶液在236nm有较大吸收,但处理后的血浆溶液在该波 长处对去甲万古霉索主峰有严重干扰,因此将去甲万古霉素血浆 标准溶液在236—280nm波长段内每隔4nm进样一次,对各图谱 中血浆吸收,主峰吸收及主峰峰形进行比较.发现280nm处血浆 对主峰干扰最小且去甲万古霉素主峰吸收和峰形都较为理想.故 最终采用280nm作为检测波长. 本实验采用甲醇:KH2P04缓冲液(14:86);为流动相,调整两者 配比能改善去甲万古霉素的保留时间,保证良好的分离效果.该 流动相与文献报道pl的"乙腈一KH2PO.缓冲液"流动相相比,价格 低廉. 在本实验条件下,样品处理方法简单,去甲万古霉素峰形对称 性较好.分离完全,血浆中内源性杂质峰不干扰去甲万古霉素的 测定,线性关系良好(.9998).日内,日间RSD均<10%,在 _j 一 20~C放置21天其变异<4%,说明样品稳定性良好.故本法能基 本满足生物样品分析要求,可用于临床去甲万古霉素的血药浓度 监测. 目前对去甲万古霉素的有效血药浓度和中毒血药浓度均是参 照万古霉素.然而相同剂量去甲万古霉素的效价较万古霉素约高 10%,两者均主要以原形从尿排泄,因此对去甲万古霉素有效血 药浓度范围的确定有待作进一步摸索. 参考文献 1.陆晓和主编.实用临床用药监护【M】.北京:人民卫生出版社,2003:46 2.中华医学会等.抗菌药物临床应用的基本原~JltSl 3.徐俊,王钦敏.HPLC法测定脑脊液中去甲万古霉素的浓度【J】_药学实践 杂志.2O00:18(6):379 临床研究 不同方法制备钆双胺脂质体的研究 上海华东理工大学国家超细粉末工程研究中?~(200237)穆晓红吴秋芳 摘要目的:研究钆双胺脂质体制备的最佳方法.方法:通过4种不同的方法制备钆双胺脂质体.采用ICP发射光谱测定其包封率.结 果:薄膜超声法制备的钆双胺脂质体包封率达65.8%.结论:薄膜超声法制备工艺简单,易于掌握,为提高钆双胺的靶向性提供了可能. 关键词钆双胺脂质体制备工艺 Abstractobjective:Tostudyonpreparationandencapsulation0fGd—DTPAliposomes.method:Liposomewasprepared byfourkindsofmethods.determiningtheencapsulationeficiencybyICP.Result:Theentrap mentratioofGd—DTPAli— posomemadebythemethodoffilmdispersionmethodis65.8%.Conclusion:Theparationpro cessoffilmdispersion methodissimpleandeasytocontro1.ThenewformofprepareddrugGd—DTPAprovethepropertyoftarget. KeywordsGd—DTPAliposomespreparation 临床R1)中经常选择使用合适的造影剂增强图象的对比度 和清晰度.钆双胺(Gd—DTPA)为目前临床中广泛使用的一种造影 剂.它具有高的自旋数.对中枢神经系统和脊柱的造影效果令 人满意.且有实验对大脑造影安全有效p】.为了使钆双胺具有 靶向性.生物相容性,降低其毒性,延长其半衰期.本文实验将其 包裹在磷脂中,制备成脂质体.重点考察了四种不同方法所制备 的脂质体,以包封率为指标,优选出最佳的制备方法. 1实验材料 1.1药品与试剂实验所用卵磷脂是上海源聚生物有限公司的 产品,胆固醇由上海益生源药业有限公司提供,钆双胺注射液由 上海市肺科医院提供,氯仿等有机溶剂均为市售分析纯. 1-2仪器用于脂质体制备的主要仪器有旋转蒸发仪(上海申生 科技有限公司)和超声仪SK5210HP).全谱直读等离子体发射光 谱仪(美国热电IRISAdvantagemoo)用于钆双胺浓度测定.取脂 质体混悬液少许,用少量2%磷钨酸负染后加到专用铜网上,自 然挥干,以透射电子显微镜电子透射显微镜(日立电子 JEM一1200EX?型)进行观察脂质体的形貌和尺寸. 2实验方法 2.1包封率的测定方法I41 2.1.1包封率(Entrapmentefficiency.EE),又称为包裹率,包封效 率等,是指包封在脂质体内的药物量占投料量的百分比.重量包 封率()是指包人脂质体内的药物量与投料量的重量百分比.用 下式表示:Q.%--W包/W总×100%式中:W且,W包分别表示投料 量,包封于脂质体的药物量.Q可以在某种程度上反映出药物在 脂质体中的分散情况. 2.1.2钆浓度的定量测定方法分析样品的制备:定量称取一定 的经过透析的脂质体,用稀硝酸硝解,直至样品变为无色透明溶 液,在lOml容量瓶中定量即可.样品流量:1.50ml/min;雾化气: 0.81/rain;辅助气:0.21/rain;等离子:151/rain;功率:1300W;观测高 度:15ram;等离子体观测方向:垂直(径向);延迟时间:40s.定量分 析在ICP电感耦合等离子发射光谱仪上进行.后将所得数据进行 处理. 2.2双胺脂质体的制备方法的筛选 2.2.1薄膜超声法四配制Gd—DTPA的PBS溶液:将0.3ml钆双 胺注射液加入到lom】PH=7.4的PBS溶液中.200mg磷脂,80mg 胆固醇溶于10ml氯仿,旋转蒸发除去有机溶剂,旋转速度为125 转/分钟.在瓶壁上形成一层薄膜.后加入10mlGd—DTPA的PBS 溶液,旋转蒸发使薄膜脱落,在45?水浴中水化2小时,充分水