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寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的研究

2017-11-10 6页 doc 18KB 32阅读

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寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的研究寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的研究 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的 研究 (作者:___________单位: ___________邮编: ___________) 作者,刘丹卓,尤昭玲,赵新广 【摘要】 目的探讨寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育的毒性,对其生殖安全性进行研究。 方法采用寿胎丸不同剂量对SD孕鼠体内染毒,观察其吸收胎、畸胎等,并观察胎仔内脏、骨骼及胎仔体质发育等异常状况。结果其不同剂量对孕鼠胎仔活胎率、吸收胎率和畸胎率影响,以及对胎仔内脏、骨骼和体质发...
寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的研究
寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的研究 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的 研究 (作者:___________单位: ___________邮编: ___________) 作者,刘丹卓,尤昭玲,赵新广 【摘要】 目的探讨寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育的毒性,对其生殖安全性进行研究。 方法采用寿胎丸不同剂量对SD孕鼠体内染毒,观察其吸收胎、畸胎等,并观察胎仔内脏、骨骼及胎仔体质发育等异常状况。结果其不同剂量对孕鼠胎仔活胎率、吸收胎率和畸胎率影响,以及对胎仔内脏、骨骼和体质发育影响,与溶剂对照比较均未见明显差异。结论寿胎丸药液在本研究所确定的50 g/kg 剂量浓度以下,初步认为对健康育龄SD孕鼠生殖功能及其胚胎发育无明显毒性。 【关键词】 寿胎丸, 生殖毒性, 安全性 寿胎丸乃清代盐山名医张锡纯所创,出自《医学衷中参西录》,原为护胎而设,后经多年来临床医家们反复实践与锤炼,已演绎成为治疗胎漏、胎动不安、自发流产、滑胎的首选方。寿胎丸被广泛用于妊娠期,其药效已得到了充分肯定,但临床运用安全性研究至今未见详细报道。有效评价药物对女性生殖功能的毒性有着深远的意义,女性生殖 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 系统是药物作用的一个特有的靶器官,女性生殖系统复杂且所有配子在出生前就已形成,所以其损害可能是多靶点及永久性的,并可导致完全绝育,1,。有鉴于此,本文通过其不同剂量对SD孕鼠体内染毒,进行生殖毒性测定,以期获得其继药效学之后的临床前毒效学资料,为其孕期合理和安全应用提供实验学依据。 1 与仪器 1.1 药液制备 对所需中药药材的来源及品种进行鉴定,筛选优质正品,原料经品种鉴定无误后,再进行挑选和洗净,然后炮制、切片、烘干、粉碎。严格按经典处方比例用量配备,制取工艺如下,?取经加工炮制的中药饮片,菟丝子、续断、桑寄生,加蒸馏水6,8倍量,水液煎煮2次,1.5 h/次,合并滤液,浓缩至相对密度为1.1,1.2,50,60?,,?加入乙醇使醇含量达65%,冷藏24 h,醇液滤过,滤液回收乙醇,至无醇味,?阿胶烊化,?以上两液合并,滤过,? 滤液冷藏放置,视无沉淀析出,? 添加蒸馏水,调pH值至6.5,7.0, 并调整至相当于含生药2 g/ml,? 精滤、灌封、灭菌即得。 1.2 试剂与仪器 40%甲醛,北京化学试剂公司生产,冰乙酸,北京化学试剂公司生产,95%乙醇,北京化学试剂公司生产。丙三醇,北京化学试剂公司生产。光学显微镜,日本OLYMMPUS SZ-ST型。电子分析天平,美国AG-104,感量值0.01 g。游标卡尺,天津仪器厂生产。 1.3 动物取经检疫 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 1周的健康性成熟未经交配生育的Sprague-Dawley SPF/VAF 级大鼠,雌雄各150只,年龄约 80,90 d,体质量约200,220 g(?),350,380 g(?)。以上动物由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,动物合格证号,SCXK(京)2007-0001。使用北京科澳协力饲料有限公司生产的标准膨化饲料在标准饲养盒内喂养,饲料合格证号,SCXK(京)2005-0007。每盒5只, 盒内保持清洁干燥,定时定量向饲料盒添加足量饲料,由动物自由摄食。饮水采用经DWT型二氧化氯消毒机处理后聚乙烯塑料瓶装消毒饮用水,由动物自由饮用。每日清洗饮水瓶,并更换饮用水1次。SPF级动物房日光灯明暗交替12 h,室温22,25?,湿度30%,70%。 2 方法 2.1 实验分组 采用交配后动物分组法,将当日已交配受精鼠称重,按体重排序,以每盒5只将受精鼠按体质量依溶剂对照组,寿胎丸低剂量组、中剂量组、高剂量组,阳性对照,环磷酰胺,组顺序随机分配,并尽量使各组受精鼠数相近。次日交配受精鼠类此, 交配期2周,最终各实验组分组只数见表1。 2.2 给药方法 各剂量组大鼠分上下午2次固定时间灌胃给药,与人临床拟用途径相同,给药剂量见各表,最高剂量为人临床用量的200倍。于妊娠期第6天开始给药,连续给药10 d。给药期间依体重变化随时调整给药体积。溶剂对照同期灌胃蒸馏水,给药体积设计与各剂量组给 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 药体积相当,并依体重变化随时调整给药体积。阳性对照组采用腹腔注射环磷酰胺药,给药期限从妊娠第11天至妊娠第13天,给药剂量7 mg/,kg?d,。 2.3 实验步骤及观测指标 妊娠第20天颈椎脱臼处死孕鼠,切开腹部暴露两侧子宫,纵切子宫, 分离胎仔, 死胎、活胎和早晚吸收胎,称量子宫与胎仔重量,并记录仔代雄雌性别比。对每只活胎胎鼠先经肉眼检查, 肉眼不能确定某种畸形, 则将胎鼠放在解剖显微镜下进一步确定并照相。将每窝一半胎鼠放入Bouin’s液固定, 进行胎仔身长、尾长测定,并进行内脏检查;另一半放入90%酒精中固定进行骨骼检查,计算骨骼畸形发生率;检查各脏器有无异常,计算内脏畸形发生率。 2.4 统计学分析 全部数据统计分析均采用SAS 9.13版软件,由计算机完成。各组胎鼠平均体重、身长、尾长等计量资料以?s表示,数据采用t检验进行显著性分析。活胎、死胎、畸胎、早晚吸收胎等计数资料以百分率,%,表示,数据采用χ2检验进行显著性分析。 3 结果 3.1 寿胎丸对妊娠期孕鼠生殖状态影响 寿胎丸各剂量组活胎率为97.74,,98.51,,溶剂对照组活胎率为97.57,,寿胎丸各剂量组与溶剂对照组比较,其活胎率未见有明显差异,P,0.05,。各剂量组孕鼠的死胎率与溶剂对照组相当,在0.0,,0.4,之间,仅偶见死胎。寿胎丸不同剂量组的吸收胎率,均 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 与溶剂对照组相当,未见有明显差异。在胎鼠畸形方面,其高、中、低不同剂量组胎鼠的畸胎率,0.75%,1.54%,与溶剂对照组,1.24%,相比,差异无显著性,P,0.05,。阳性对照组活胎率,87.94%,和死胎率,0.39%,均与溶剂对照组相近,但畸胎率,37.61%,和吸收胎率,11.67%,明显高于溶剂对照组,具有非常显著性意义(P0.01)。结果见表1。表1 寿胎丸不同剂量对妊娠期孕鼠生殖状态影响,略, 3.2 寿胎丸不同剂量对胎仔内脏及骨骼发育状态影响 寿胎丸各剂量组、溶剂对照组及阳性对照环磷酰胺组做徒手切片共检查611只胎仔内脏,未查出1例内脏畸形或变异。骨骼检查畸形状况,其各剂量组与溶剂对照组畸形率比较,无显著性差异,P,0.05,。阳性对照环磷酰胺组与溶剂对照组骨骼畸形率差异有非常显著性,P0.01,。结果见表2。表2 寿胎丸不同剂量对胎仔内脏及骨骼发育状态影响,略, 3.3 寿胎丸不同剂量对胎仔体质发育状态影响 寿胎丸各剂量组胎鼠的窝均体重、身长、尾长、胎盘重与溶剂对照组相当,未见显著性差异,P,0.05,。寿胎丸各剂量组孕鼠所孕胎仔的雄雌性别比也未见明显差异,P,0.05,。阳性对照环磷酰胺组的窝均体重、身长、尾长及胎盘重以上各项指标均明显低于溶剂对照组,P,0.01,。但孕鼠所孕胎仔的雄雌性别比与溶剂对照比较,未见明显差异,P,0.05,。结果见表3。表3 寿胎丸不同剂量对胎仔体质发育状态影响,略, DOC格式论文,方便您的复制修改删减 4 讨论 合理使用药物,特别是减少药物毒性对妊娠期妇女机体的损害,一直是临床用药的宗旨。但是,许多临床应用于妊娠期、围生期等中药或复方,由于其疗效肯定,而其潜在的生殖或遗传毒性并没有引起人们足够重视,也正是由于这种忽视,方药的潜在毒性可能直接或间接地作用于DNA分子,使DNA的复制或修复过程受阻,从而引起疾病发生,甚至遗传给下一代。目前国内外所涉及的药物生殖毒性研究方法数以百计,常用的也有十余种,2,。如致畸敏感期毒性实验、胚胎毒性实验、一般生殖毒性实验、围产期生殖毒性实验、行为畸胎学实验等。研究方法虽多,但基本上没有依据中医药自身特点所建立的生殖安全性研究体系。基于中医的辨证论治规律,方药的遣方配伍原则,寿胎丸广泛用于妊娠期,而胚胎器官形成期对药物作用最为敏感,为此,本研究采用动物胚胎致畸敏感期作为药物作用的时间靶点进行生殖毒性试验。 本研究采用寿胎丸3个不同剂量对妊娠期孕鼠染毒,各剂量组活胎率、死胎率与溶剂对照组相当,仅偶见死胎。各剂量组吸收胎率、畸胎率与溶剂对照组相比,也无显著性差异,这说明药物本身对妊娠期孕鼠生殖功能状态未见明显影响,且无明显致胎仔外观畸形作用。各实验组做徒手切片共检查611只胎仔内脏,未查出1例内脏畸形或变异。检查畸形状况,其各剂量组与溶剂对照组骨骼畸形率比较,未见有显著性差异。各剂量组胎鼠的窝均体重、身长、尾长、 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 胎盘重及胎仔的雄雌性别比与溶剂对照组相当,未见明显差异。这进一步提示寿胎丸不同剂量对胎仔体质发育状态,无明显影响。综合以上实验结果,在本研究所确定的条件下,寿胎丸药液对健康育龄SD孕鼠胎仔、胚胎发育无明显毒性。 【参考文献】 ,1,刘育谷.卫生毒理学,M,.北京,人民卫生出版社,2003,103. ,2,付立杰,毒理学在中国现代化建设中面临的机遇和挑战,J,.中国药理学和毒理学杂志,2000,14(5),326.
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