妊娠肝内胆汁淤积症孕妇血清和脐血清NO变化及胎盘NOS的表达

妊娠肝内胆汁淤积症孕妇血清和脐血清NO变化及胎盘NOS的达 妊娠肝内胆汁淤积症孕妇血清和脐血清NO 变化及胎盘NOS的表达 .,登选笠篮N0蛮化及胎甜NOS的表达第20 闪子宫肌层的血管主要来自子宫动脉,m管在肌层中分布, 所以不受卵巢激素变化的影响.在肌层中由于ADM表达明显 增高.推断此时ADM可能作为一种较强的促血管生成因子发 挥作用,使促进血管增生的因素增打?,从而刺激局部新生徽 血管增多所致.过去大多认为子宫肌瘤中血管非常稀少,但 本研究发现肌瘤中MVD比同子宫的内膜中表达增高(P< 0.05),H不随月经周期的变化而变化.多发肌瘤与单发肌瘤 相比.前者在肌瘤组织和肌层中的微血管密度均高于后者, 这说明新生微血管在多发肌瘤的子宫中增生的更为明显.考 虑为多发肌瘤中ADM的表达明显高于单发肌瘤,即多发肌瘤 中促血管生成圜素高于单发肌瘤所致. 实验还将ADM的表达与MVD之间相关性进行了研究. 发现两者存在着正性相关?P<0,05).这可能是因为肌瘤子 宫促使ADM分泌增多,ADM又作为一种促血管生成因子,促 进更多的微血管生成,从而有利于肌瘤的生长.ADM与微血 管的相互作用,导致了子宫肌瘤的迅速生长.这与Hague S,ReesML=1等人的研究结果相一致. 本研究的意义在于发现ADM和MVD在荷瘤子宫中的表 达明显增高.侄多发性肌瘤患者中的表达更高,尤其在肌瘤 的假包膜部位.这将指导临床侄做肌瘸核除术时尽量切除假 包膜,对降低术后复发率有一定价值同时,可借鉴本研究 思路选择通过阻断或抑制ADM的促血管生成作用为子宫肌瘤 ? 286I? 的保守治疗提供新的靶点.在临床L发明有效抗ADM的药物 或ADM拟似剂可能是子宫肌瘤或其他良恶性肿瘤治疗L的一 个新思路. 4参考文献 1靳钰,袁捷.肾上腺髓质素薤生殖系统各部位及生殖器官肿 瘤组织中的表达变化及其意义.中华妇i科杂志,2005,40(3): 209 2HagueS,Zhaug1.,OehlerMKeta1.Expressionoftilehypoxieall3,reg- ulatedanglogeniefactoradrenomedullincorrelateswithuterineleiomyoma vasculardensity.ClinCancerRes,2000,6(7):2808 3ReesM,HagueS,OehlerMKeta1.Regulationofendometrialanglo. genesis.Climacteric,l999,2(I):52 4NikitenkoLL.MacKenzieIZ.ReesMCelal,Adrenomedullinisanan. tecrineregulatorofendothelialgrowthinhumanendometrium,MolHum Reprod.2000,6(9):8ll 5OuafikL,SauzeS,BoudouresqueFetal,Neutralizationofandsup- pressestunlorxenograftgrowthinvivo,AmJPatho,2002,160(4): l279 妊娠肝内胆汁淤积症孕妇血清和脐血清NO 变化及胎盘NOS的表达 (2005-02?16收稿) [编校徐强] 王静波常青?陈勇?史常旭?中国人民解放军251医院妇产科(河北张家 口)075000 中国图分类号对14?25文献标识码B文章编号10o14411I20O6)20-2861-03 【摘要】目的:通过测定妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者血清,脐血清一氧化氮(N0) 水平及胎盘一氧化氮合酶 (NOS)的表达强度,探讨NO在ICP围产儿不良结局中的作用.方法:以ICP孕妇31 例为ICP组,正常孕妇30例为对照组,采 用亚硝酸盐法测定母血,脐血N0水平,免疫组化检测胎盘iNOS和eNOS表达强度, 对染色强度进行图像.结果:ICP组脐 血NO水平低于对照组(P<0.O1).胎盘iNOS和eNOS表达强度均显着低于对照 组(分别为P<0.001和P<0.OI),两组孕妇 血清N0水平无着差异(P>0.05).结论:ICP患者胎盘绒毛组织iNOS和eNOS表 达降低,可能导致胎儿一胎盘循环阻力升 高,是ICP患者发生胎儿宫内窘迫和早产的原因之一. 【关键词】胆汁淤积一氧化氮妊娠 Expressionofnitricoxidesynthaseinplacentavillusandlevelsofserumnitricoxide inintrahepaticcholestasisofpregnancy WANGJing— Bo,CHANGQing,CHENYong,eta1.DepartmentofObstetricsandGenecology,251HospitalofPLA, Zhangjiakou075000,Hebei,China [AbstractjObjective:ToinvestigatethechangesofseFumNOandexpressionofendothelianitricoxidesynthase(eNOS),in. ducednitricoxidesynthase(iNOS)invillusofintrahepaticcholestasisofpregnancy(ICP)andrelationshipl~tweenNOSandperinatalout. come.Methods:Thirty— onepregnantwomenwithICPandthirtynormalpregnacywomenwerestudied.Maternalandumbilicalserumas wellasplacentawascollectedfromallcases.SerumNO2 一,theendproductofNO,weremeasuredwithnitritereductase.Expressioninten. ?第三军医大学附属西南医院妇产科 sityofiNOSandeNOSofeachplacentatissueweremeasuredby immunohist~hemicalmethod.Results:ThelevelsofNOinumbilical ? 2862?中国妇幼保健2006年第21卷 seruminICPgroupweresignificantlylowerthanthoseofcontrollgrnup(P<O.01),butthel evelsofNOinmaternalSertlmwerenotsignifi. cantlydifferentbetweenthem(Jp>005).FheexpressionintensityofiNOSandeNOSinpla centaofICPgroupWel'~alsosignificantlylower thanthoseofcontmlgroup(P<0.001,P<0.O1,respectively).Conclusion:Thedecrease ofiNOSandeNOSinplacentalvillusmayhe oneofthecausesforfetaldistressandprematurelaborinICP. [Keywords]Cho!estasis;Nitri(?oxide;Pregnancy 妊娠肝内胆汁淤积症(intmhepaticc,holestasisofpregnan. cy,ICP)是一一种妊娠特发性肝脏疾病.可引起胎儿窘迫,死 胎,死产等多种围产儿并发症,病因尚未完全阐明.作为母 胎之间连接的唯一纽带,胎盘具有复杂的内分泌功能,其功 能变化与胎儿结局密切相关,胎盘血管的低阻力是保证胎儿 正常发育的必要条件,一氧化氮(NO)则是胎盘分泌的最重 要的血管舒张因予,对胎儿一胎盘循环低阻力的维持起着重 要的调节作用.体内NO合成的唯一限速因子是一氧化氮 合酶(nitricoxidesynthase,NOS).我们采用哑硝酸盐法测定 了ICP孕妇血清和脐血清的NO水平,免疫组化法测定胎盘组 织中内皮型NOS(eNOS)和诱生型NOS(iNOS)的表达强 度,以探讨NO与ICP良围产儿结局的关系.. 1资料与方法 1.1临床资料2003年5月,2004年1月在西南医院住院 分娩的孕妇共983例,随机数字法选取明确诊断为ICP孕妇 31例作为ICP组,年龄23,35岁,平均(27.6?2.1)岁, 孕龄33—40周,平均(37?2.3)周.ICP诊断标准:?妊娠 中晚期出现躯干,四肢皮肤瘙痒,伴或不伴黄疸.?孕妇血 清胆酸升高(>320g/d1),可伴AII,,AST轻或中度异常, 胆红素正常或升高,?无其他急,慢性肝脏病史.?分娩后 上述指标恢复正常对照组为同期住院,无妊娠合并症的正 常孕妇27例,年龄21—37岁,平均(28.1?2.6)岁.孕龄 38—41周,平均(39?1.4)周.两组患者均于正式临产前 行剖宫产术以消除分娩对监测指标的影响. 1.2标本采集两组孕妇均于术前30rain取肘静脉血5ml, 分离血清后置一20?冰箱保存.新生儿娩出后取脐静脉血5 ml,分离血清后保存待测.胎盘娩出后立即取胎盘中央区组 织2cm×2cm×1(-m大小.液氮冻存,切片(8I,zm)后立即 行免疫组化染色. 1.3实验方法 1.3.1NO测定因NO半衰期短,性质不稳定,故采用亚 硝酸盐法测其稳定代谢产物NO:一间接反映NO的浓度.亚硝 酸盐试剂盒购自北京东亚免疫技术研究所.以722S分光光度 汁(上海精密科学仪器有限公司)测546nm波长的吸光度 值,计算样品NO,一浓度. 1.3.2胎盘eNOS和iNOS免疫组化测定采用S—P法,免 疫组化染色试剂盒(S—PgO01)和eNOS(Sc一654),iNOS (Sc一649)兔源性多克隆抗体均购自北京中山生物技术有限 公司.方法:冰冻切片厚8p.m,风干,预冷4~C纯丙酮固定, 3%过氧化氢37?孵育,加山羊封闭血清,37~C孵育20min, 滴加一抗(eNOS1:150,iNOS1:100),4~C冰箱过夜.漂洗 后依次加生物素标记二抗(羊抗兔IgG)和辣根酶标记的卵 臼索工作液,DAB显色时间为10min. 1.3.3ICP组和正常妊娠组临床资料记录两组孕妇分娩时 孕周,"fL清胆红素,碱性磷酸酶,新生儿1minApgar评分和 胎儿体重等一般资料. 1.4结果判定和统计分析采用Olympus图像采集系统和 Mias图像分析软件(四川大学图形图像研究所)对免疫组化 染色结果进行图像分析,以积分光密度(IOD)表示染色强 度.,SPSS8.0统计软件对所得数据进行检验,Pearson相关 分析 2结果 2.1ICP组与对照组孕妇母血和脐血NO水平结果显示, ICP孕妇脐血清NO水平显着降低,与正常孕妇相比,有显着 性差异(P<0.01).两组孕妇母体血清NO水平差异不显着. 见表1 表1ICP组和对照组孕妇血清及脐血清NO水平变化(?S) 2.2ICP组与对照组胎艋eNOS,iNOS表达水平结果表明, iNOS和eNOS的染色阳性部位均位于合体滋养细胞和细胞滋 养细胞胞浆内.ICP组iNOS和eNOS表达降低,与对照组相 比,有显着性差异(分别为P<0.001和P<0.01).见表2. 表2ICP组和对照组胎盘eNOS和iNOS表达(?) 2.3ICP组和对照组孕妇一般资料本组资料中,ICP孕妇 分娩时孕周短于对照组(P<0.05),胎儿体重较对照组降低 (P<0.05),两组孕妇年龄和新生儿1minApgar评分无统计 学差异(P>0.05).见表3. 2.4脐血NO与孕妇一般情况的相关性分析将脐血NO值 与胎儿体重进行Pearson相关分析.结果显示,脐血NO水平 与胎儿体重呈负相关趋势,统计学差异不显着(,=一0.537, 王静波等妊娠肝内胆汁淤积症孕妇血清和脐血清NO变化及胎盘NOS的表达第 20期 P=O.17). 表3两组孕妇一般情况比较表(?s) 3讨论 3.1胎盘分泌的NO及功能胎儿一胎盘循环正常低阻力的 维持是保证胎儿获得充足养分从而正常发育的关键因素之一. 由于缺乏自主神经调节.胎盘分泌的血管舒缩激素在胎儿一 胎盘循环的阻力调节中起主导作用.NO则是胎盘分泌的最重 要的舒血管激素,NOS是体内合成NO的唯一限速因子.多 项试验方法证明,胎盘的合体滋养细胞和血管内皮细胞含有 eNOS,iNOSmRNA.在预先用缩血管剂收缩胎盘血管的基 础上,NO供体亚硝酸钠和硝酸甘油具有强烈的舒张胎盘血管 的作用.此外,NO气体,L—Arg和NO供体还可使子宫平 滑肌舒张,而NOS的竞争性抑制剂L一硝基一精氮酸甲酯等 则使子宫平滑肌收缩.由于妊娠期胎盘的NOS活性远高于 子宫肌层并产生局部负反馈作用,因此胎盘产生的NO可扩 散到子宫肌层.维持子宫平滑肌处于舒张状态,子官或胎盘, 胎膜组织的NOS酶活性降低可以导致官缩和早产,NO供体 则可使孕期延长'. 3.2ICP患者NO水平和胎盘NOS表达变化及意义本研究 结果显示,ICP患者胎盘eNOS,iNOS表达均明显降低,同时 脐血NO水平显着低于对照组,而孕妇血清NO与对照组相比 无明显差异,提示ICP患者存在胎盘和脐血局部的NO分泌降 低.由于半衰期短,NO以旁分泌和自分泌形式发挥作用.作 为一种重要的局部激素,胎盘NOS表达降低和脐血NO水平 降低,一方面可导致胎盘和脐带血循环阻力升高,胎儿血供 不同程度减少;同时由胎盘扩散入子宫肌层的NO减少,也 可能打破维持子宫平滑肌静止状态冈素之间的平衡,诱发子 宫收缩,导致早产发动. 目前,引起ICP孕妇胎盘NOS表达下降的原因尚不清楚. 由于ICP对胎儿的不良影响主要与患者体内胆酸浓度异常升 高有关,导致通过胎盘的胆酸,石胆酸和脱氧胆酸水平也随 之增加,而且,母体到胎儿的胆酸流量增加可引起胎盘绒毛 静脉收缩,并具有浓度依赖效应.ICP患者体循环中高浓 度的胆汁酸和胆红素町在胎盘绒毛间隙沉积,导致绒毛间腔 ? 2863? 狭窄,胎盘灌注量减少.胎盘滋养细胞的内分泌功能受损, NOS合成降低,影响了胎盘源性NO产生.此外,体循环中 胆汁酸电可能直接作用于胎盘滋养细胞,通过免疫或其它途 径引起滋养细胞内分泌功能的紊乱,其具体机制尚需进一步 实验证明. 在本实验中,ICP母血NO水平与对照组相比无显着性差 异,提示母体血管内皮细胞分泌的NO无显着改变.脐血NO 与胎儿体重呈负相关趋势,可能与样本数及病例采集有关, 二者确切联系尚需进一步资料证实.由于ICP孕妇普遍监控 较严密,37周后多人工中止妊娠,可能是导致本组ICP孕妇 孕周显着降低而Apgar评分jE常的原因之一. 4参考文献 1SheppardC,ShawCE,LiYeta1.Endothelium—derivednitricoxide synthaseproteinexpressioninovineplacentalartedes.BiolReprod, 2001,64(5):1494 2PostonLFhecontrolofbloodflowtotheplacentaExpPhysio1. 1997,82(2)377 3MyattL.Bn~kmanDE.Eisat.Wet0f.Immunohistochemicallocaliza- tionofnitricoxidesynthaseinthehumanplacenla.Placenta,1993. 14:487 4RamsayB.SoorannaSR.JohnsonMR.Nitricoxidesynthaseinhuman myometriamandvilloustmphobl~sttbmughoutpregnancy.ObstetGyne— col,1996,87:249 5KhalilRA.CrowsJK.NovakIeta1.Enhanced,ascalaFreactivitydur. inginhibitionofnitricoxidesynthesisinpregnantrats.Hypertension, 1998,31:1065 6WetzkaB,SchaferWR.StehmansAeto1.Effectsofnitricoxidedonors onthecontractilityandprostaglandinsynthesisofmyometrialstripsfrom pregnantandnon—pregnantwomen.GynecolEndocrinol,2001,15 (1):34 7BukowskiR,SaadeGR.Newdevelopmentsinthemanagementofpre— temllabor.SeminPerinatol,2001,25(5):272 8SepulvedaWH.GonzalezC,CruzAeta1.Vasoconstrietiveeffectof bileacidsonisolatedplacentalchorionicveins.EurJObstetnaecol ReprodBio1.1991.42:211 9ZimberA,ZusmanI.Effectsoi'secondarybileacidsontheintrauterine developmentinrats.Teratology.1990.42:215 (2005-03-02收稿) [编校李秀娟] 参考文献书写格式 期刊作者.文题.杂志名称,出版年,卷(期):页码 如:胡晓云,李汉帆,李玲eta1.老河口市农村妇女《生命知识》调查与分析.中国妇 幼保健,1997,12(5):312 书籍着者.书名.版本,出版地:出版者,出版年:页次 如:刘湘云,林传家,薛沁冰eta1.儿童保健学.第1版,南京:江苏科学技术出版 社,1989:116—124